Anticuerpos monoclonales que reconocen epítopes conformacionales de la fimbria F41 de la Escherichia coli enterotoxigénicas (Monoclonal antibodies that recognize different conformational epítopes in enterotoxigenic Escherichia coli F41 fimbriae)

Campal

Description

Resumen
Las Escherichia coli enterotoxigénicas (ECET) producen diarreas en terneros neonatos debido a su capacidad para unirse a las células del epitelio intestinal a través de las fimbrias y la secreción de enterotoxinas. En terneros, las cepas de ECET K99+ y F41+ son aisladas con mayor frecuencia, mientras que en los cerdos los aislamientos de ECET F41+ son menos frecuentes, existiendo pocos estudios al respecto. Es por ello, que el objetivo planteado en este trabajo fue obtener anticuerpos monoclonales, para ser empleados como herramientas diagnósticas, para la detección de la fimbria. Para ello los ratones fueron inmunizados con la fimbria purificada y en combinación con células F41+ muertas con 0,5% de formalina. La especificidad de los anticuerpos fue determinada por ELISA con antígenos relacionados. El análisis de los epítopes se realizó por ensayo de competencia y Western Blot. Como resultado se obtuvieron 4 AcMs dirigidos hacia tres epítopes conformacionales diferentes en la fimbria F41, uno de los cuales está también presente en la fimbria K99. El AcM CBC ? F41.3 fue útil para detectar a la fimbria F41 en muestras de fermentaciones en un ELISA de captura.
Abstract
Production of diarrhea in neonatal calves by enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) depends on the bacterial ability to bind to the intestinal epithelial cells in host through fimbriae and the secretion of enterotoxins. In calves, ECET strains K99 + and F41 + are the most important causes of colibacillosis. By the contrary the isolation of ECET strains F41 + from piglets with diarrhea, are less frequent. The objectives this work were generation and characterization of monoclonal antibodies (Mabs), to be used as diagnostic tools for the fimbriae detection. To this aim, mice were immunized with purified fimbriae in combination with F41 + cells killed with 0,5% of formalin. The specificity of the antibodies was determined by ELISA with related antigens. Epítope analysis was carried out by competitive ELISA and Western Blot. Finally were obtained 4 Mabs recognizing three different conformational epítopes in the F41 fimbriae, one of them was present also in the K99 fimbria. The Mabs CBC ? F41.3 was useful to detect F41 fimbriae in samples from fermentations by a capture ELISA.

Sujets

• F41
• Anticuerpo monoclonal
• Colibacilosis
• Enterotoxigenic Escherichia coli
• Fimbria
• Monoclonal antibodies

Informations

• Publié par: erevistas
• Publié le: 01 janvier 2007
• Nombre de lectures: 41

Extrait

REDVET. Revista electrónica de Veterinaria. ISSN 1695-7504
2007 Volumen VIII Número 8

REDVET Rev. electrón. vet. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet
Vol. VIII, Nº 8, Agosto/2007– http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n080807.html

Anticuerpos monoclonales que reconocen epítopes
conformacionales de la fimbria F41 de la Escherichia coli
enterotoxigénicas (Monoclonal antibodies that recognize different
conformational epítopes in enterotoxigenic F41
fimbriae)
Campal Espinosa, Ana Cristina: Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
de Camagüey. Apdo 387. C.P. 70100. Camagüey, Cuba. | Junco Barranco,
Jesús Arturo: Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de Camagüey. Apdo
387. C.P. 70100. Camagüey, Cuba. | Casas Suárez Sonia: Centro de
Ingeniería Genética y Biotecnología de Camagüey. Apdo 387. C.P. 70100.
Camagüey, Cuba. | Arteaga Moré, Niurka Onexis: Centro de Ingeniería
Genética y Biotecnología de Camagüey. Apdo 387. C.P. 70100. Camagüey, Cuba .|
Castro Santana, María Dolores: Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
de Camagüey. Apdo 387. C.P. 70100. Camagüey, Cuba. | Fuentes Aguilar,
Franklin: Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de Camagüey. Apdo 387.
C.P. 70100. Camagüey, Cuba. | León Barreras, Licette: Centro de Ingeniería
Genética y Biotecnología de Camagüey. Apdo 387. C.P. 70100. Camagüey, Cuba |
Barreto Argilagos Guillermo: Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad
de Camagüey, Circunvalación Norte, CP. 70100, Camagüey, Cuba | Pardo,
Guillermo: Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad de Camagüey,
Circunvalación Norte, CP. 70100, Camagüey, Cuba.

La correspondencia deberá dirigirse a:
Lic. Ana Cristina Campal Espinosa.
Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología.
Apdo 387. CP. 70100. Camagüey. Cuba.
e-mail: [e-mail]


REDVET: 2007, Vol. VIII Nº 8

Recibido: 29 Mayo 2007 / Referencia: 080715_REDVET / Aceptado: 21 Julio 2007 / Publicado: 01 Agosto 2007

Este trabajo Resulta de la Tesis para obtener el grado de Maestro En Educación en Ciencias Naturales con terminal
en Biología presentada José Luis Carlos Bedolla Cedeño en el Instituto Michoacano De Ciencias De La
Educación “José María Morelos”. Secretaria De Educación. Gobierno Del Estado De Michoacán México,
siendo su Asesor de Tesis Mc. Georgina Canedo Mendarozqueta. Está disponible en
http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n080807.html concretamente en
http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n080807/080715.pdf

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Resumen
Las Escherichia coli enterotoxigénicas (ECET) producen diarreas en terneros neonatos debido a
su capacidad para unirse a las células del epitelio intestinal a través de las fimbrias y la
secreción de enterotoxinas. En terneros, las cepas de ECET K99+ y F41+ son aisladas con
mayor frecuencia, mientras que en los cerdos los aislamientos de ECET F41+ son menos
frecuentes, existiendo pocos estudios al respecto. Es por ello, que el objetivo planteado en
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Anticuerpos monoclonales que reconocen epítopes conformacionales de la fimbria F41 de la Escherichia coli
enterotoxigénicas
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REDVET. Revista electrónica de Veterinaria. ISSN:1695-7504
2007 Volumen VIII Número 6

este trabajo fue obtener anticuerpos monoclonales, para ser empleados como herramientas
diagnósticas, para la detección de la fimbria. Para ello los ratones fueron inmunizados con la
fimbria purificada y en combinación con células F41+ muertas con 0,5% de formalina. La
especificidad de los anticuerpos fue determinada por ELISA con antígenos relacionados. El
análisis de los epítopes se realizó por ensayo de competencia y Western Blot. Como resultado
se obtuvieron 4 AcMs dirigidos hacia tres epítopes conformacionales diferentes en la fimbria
F41, uno de los cuales está también presente en la fimbria K99. El AcM CBC – F41.3 fue útil
para detectar a la fimbria F41 en muestras de fermentaciones en un ELISA de captura.
Palabras claves: Escherichia coli enterotoxigénicas, fimbrias, F41, anticuerpos monoclonales,
colibacilosis.

Abstract
Production of diarrhea in neonatal calves by enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) depends
on the bacterial ability to bind to the intestinal epithelial cells in host through fimbriae and
the secretion of enterotoxins. In calves, ECET strains K99 + and F41 + are the most
important causes of colibacillosis. By the contrary the isolation of ECET strains F41 + from
piglets with diarrhea, are less frequent. The objectives this work were generation and
characterization of monoclonal antibodies (Mabs), to be used as diagnostic tools for the
fimbriae detection. To this aim, mice were immunized with purified fimbriae in combination
with F41 + cells killed with 0,5% of formalin. The specificity of the antibodies was determined
by ELISA with related antigens. Epítope analysis was carried out by competitive ELISA and
Western Blot. Finally were obtained 4 Mabs recognizing three different conformational
epítopes in the F41 fimbriae, one of them was present also in the K99 fimbria. The Mabs CBC
– F41.3 was useful to detect F41 fimbriae in samples from fermentations by a capture ELISA.
Key words: enterotoxigenic Escherichia coli, fimbriae, F41, monoclonal antibodies,
colibacillosis.


Introducción:
La diarrea neonatal en terneros y cerdos causa importantes daños económicos en las
producciones pecuarias en todo el mundo (Barragry, 1997, da Costa et al., 2006), su principal
agente causal son las cepas de Escherichia coli enterotoxigénicas (ECET) (Runnels et al.,
1986). La patogénesis involucra la unión de las fimbrias a glicoproteínas y glicolípidos que
actúan como receptores en la mucosa y en las células epiteliales del intestino delgado del
hospedero así como, la inducción de diarreas a través de las enterotoxinas (Francis et al.,
1998).
Las cepas porcinas de ECET expresan varios tipos de fimbrias: K88 (F4), K99 (F5), F41, 987p
(F6) y F18. La fimbria F41 se expresa frecuentemente en cepas que también expresan a la F5
de los serotipos O9 y O101 (Smyth et al., 1994). La misma tiene una estructura filamentosa
de 29.5kDa, con un diámetro de 3,2 nm (de Graaf y Roorda, 1982). En cerdos, las cepas de
ECET F41+ son poco frecuentes, pero en lugares donde la masa está vacunada con
formulaciones que no contienen a la fimbria, su incidencia puede ser mayor.
Entre los genes codificantes para las proteínas accesorias encargadas de la biosíntesis de las
fimbrias de F41, F4 y la CS31A existe una alta homología (Anderson y Moseley, 1988, Korth et
al., 1992). Sin embargo, a nivel aminoacídico la homología entre la F41, y las fimbrias F4, F5,
tipo I, CFA-I y PapA es limitada e incluye los residuos hidrofóbicos y a la penúltima tirosina
del carboxilo terminal (de Graaf y Mooi, 1986).
Se han generado varios anticuerpos monoclonales (AcM) murinos hacia las fimbrias F41
(Raybould et al., 1987, Thorns y Roeder, 1988, Van Zijderveld et al., 1989) que han sido
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Caracterización toxicológica de las macroalgas marinas Hypnea spp y Sargasun spp para la futura
utilización en la alimentación y la salud animal como humana
http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n070707/070705.pdf
REDVET. Revista electrónica de Veterinaria ISSN 1695-7504
2007 Volumen VIII Número 8

empleados en estudios inmunológicos, en ensayos para la detección y cuantificación del
antígeno en muestras de heces fecales y cultivo, así como en la inmunización pasiva de
animales susceptibles (Duchet – Suchaux et al., 1992). Mediante ellos se ha determinado la
existencia en la subunidad mayor de la fímbria de 5 epitopes inmunodominantes (Van
Zijderveld, et al., 1989). En el presente trabajo se caracterizan tres AcM murinos que
reconocen tres epítopes diferentes en la fimbria F41 nativa. Además se demostró la utilidad de
uno de ellos para la inmunodetección de cepas F41 + en diferentes muestras biológicas.
Materiales y Métodos.

Cepas Bacterianas, anticuerpos y antígenos.

Las cepas de ECET: H945/77 (O157:K88ac,LT+,Sta-), G 205 (O8:K87:K88ac), G7 (O8:K87:
K88ab), pr (190-56 O32: K87: