Diplôme Cherbonnel-Pansart

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• Langue: Français

Extrait

MINISTERE DE L’EDUCATION NATIONALE, DE LA RECHERCHE ET DE LA TECHNOLOGIE    

ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES   Sciences de la vie et de la terre       MEMOIRE     présenté   par MartineCHERBONNEL-PANSART       pour l’obtention du diplôme de l’Ecole Pratique des Hautes Etudes     Titre :   Intérêt de la vaccination à ADN plasmidique en prévention de deux maladies aviaires La Parvovirose du canard et l’Influenza aviaire       soutenu le 21 Novembre 2002 devant le jury suivan:t    - Pr Max BERGOIN - Président                             - Mr Alain VAN WORMHOUDT - Rapporteur    - Mr Hervé BOURHY - Examinateur  - Mme Véronique JESTIN - Examinatrice                                        Laboratoire EPHE Evolution Moléculaire et Adaptation Directeur : A. Van Wormhoudt Station de Biologie Marine [e-mail] IFREMER, Concarneau     Agence Française de Sécurité Sanitaire des Aliments Directeur : P. Vannier Site de Ploufragan Tuteur scientifique : V. Jestin Unité Virologie Immunologie Parasitologie [e-mail]

aviaires et cunicoles, Ploufragan ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE   INTERET DE LA VACCINATION A ADN PLASMIDIQUE EN PREVENTION DE DEUX MALADIES AVIAIRES LA PARVOVIROSE DU CANARD et L’INFLUENZA AVIAIRE   Martine CHERBONNEL-PANSART   le 21 Novembre 2002

Résumé :  En raison de nos connaissances dans le modèle de la Parvovirose du canard et des imperfections du vaccin du commerce, des premiers essais de vaccination d’ADN plasmidique ont été conçus dans ce modèle. Par ailleurs, même si la vaccination à virus inactivé contre l’Influenza aviaire, lorsqu’elle est autorisée, protège cliniquement, elle ne supprime pas l’excrétion virale. De plus, aucune donnée concernant l’excrétion virale d’une souche non hautement pathogène de sous-type H7 n’existe. Aussi des essais de vaccination d’ADN plasmidique ont été mis en œuvre.  Tout d’abord, des montages dans des plasmides d’expression du commerce (pcDNA3.1 et pcDNA4/His Max) des gènes codant les protéines immunogènes VP2/VP3 du parvovirus du canard ont été inoculés à des canards EOPS de 6 semaines à raison de 2 ou 3 injections à 3 semaines d’intervalle, suivant différentes doses et plusieurs conditions d’inoculation (plasmide linéaire ou circulaire, avec adjuvant Polyvinylpirrolidone ou sans, en injection intramusculaire ou à l’aide d’un système Medi-Jector Vision (MJV)). Seul le lot recevant à 2 reprises 400 µg du plasmide pcDNA3.1/VP2/VP3 avec MJV, a donné une réponse immunitaire très satisfaisante : titre Elisa ou de séroneutralisation élevé, homogène et persistant, en anticorps anti-Parvovirus, similaire à celui induit par une vaccination classique.  En ce qui concerne l’Influenza aviaire, des plasmides (pCMV HA, pCMV NP et pCMV M1) respectivement codant l’hémagglutinine, la neuraminidase et la protéine de matrice du virus Influenza aviaire, non hautement pathogène H7N1 A/Chicken/Italy/1067/99, ont été construits en pcDNA3.1 et administrés à des poulets EOPS de 4 semaines. Premièrement, plusieurs méthodes d’injection ont été comparées en se basant sur l’inhibition de l’hémagglutination (IHA). Le système d’injection sans aiguille MJV a donné la meilleure séroconversion 3 semaines après un rappel avec 100 µg de pCMV HA identique à celle induite par une vaccination à virus inactivé. Puis, la coadministration de pCMV HA et pCMV NP et/ou pCMV M1 a été évaluée en se basant sur la réponse IHA et sur l’excrétion virale après épreuve homologue. L’excrétion virale par voie cloacale a été entièrement supprimée quel que soit le lot vacciné, tandis que seuls les lots pCMV HA/M1 et pCMV HA/NP/M1 ont supprimé totalement l’excrétion par voie trachéale, voie d’excrétion la plus difficile à juguler. Sous réserve d’une vérification sur un plus grand effectif, ces résultats sont innovants en ce sens où c’est la première fois qu’une suppression de l’excrétion par voies trachéale et cloacale, d’une souche non hautement pathogène a été observée.   Mots clés  : Vaccin ADN, Parvovirose du canard, VP2/VP3, Influenza aviaire, H7, Non hautement pathogène, Hémagglutinine, Nucléoprotéine, Protéine de matrice, Excrétion Virale. Introduction