Respuesta de ratones Balb/c frente a ciclofosfamida y bleomicina en el ensayo de la morfología de la cabeza del espermatozoide - Balb/c mice’s response against bleomycin and cyclophosphamide in the head sperm morphology assay

Arencibia

Description

Resumen
El ensayo de la morfología de la cabeza del espermatozoide permite el estudio del potencial genotóxico de muestras problemas a nivel celular. En este artículo se decidió evaluar y comparar en 16 ratones Balb/c machos por grupo, el efecto de dos sustancias mutagénicas en este ensayo. La Ciclofosfamida (CF) en dosis de 50 mg/kg y la Bleomicina (BL) en dosis de 20 mg/kg, administradas por vía intraperitoneal durante 5 días consecutivos. Con
posterior sacrificio de los animales 35 días después de la última administración de los mutágenos.
Summary
The head sperm morphology assay, allows the study of the genotoxic potencial of samples at the cellular level problems. In this article we decide to evaluate and to compare in 16 Balb/c males mice per group, the effect of two
mutagenic substances in these assay, the Cyclophosphamide (CF) in dose of 50 mg/kg and the Bleomycin (BL) in dose of 20 mg/kg, administered by intraperitoneal route during 5 consecutive days, being sacrificed the animals
35 days after the last administration of the mutagens.

Sujets

• Bleomicina
• Ciclofosfamida
• Bleomycin
• Cyclophosphamide

Informations

• Publié par: erevistas
• Publié le: 01 janvier 2011
• Nombre de lectures: 14
• Langue: Español

Extrait

REDVET. Revista electrónica de Veterinaria 1695-7504
2011 Volumen 12 Número 2

REDVET Rev. electrón. vet. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet -http://revista.veterinaria.org
Vol. 12, Nº 2 Febrero/2011– http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n020211.html

Respuesta de ratones Balb/c frente a ciclofosfamida y
bleomicina en el ensayo de la morfología de la cabeza del
espermatozoide - Balb/c mice’s response against bleomycin and
cyclophosphamide in the head sperm morphology assay

a,1,Arencibia Arrebola Daniel Francisco *, Rosario Fernández Luis
b,2Alfredo .
aDoctor en Medicina Veterinaria y Zootecnia, Aspirante a
bInvestigador. Licenciado en Microbiología, Profesor Instructor.
1Instituciones: Departamento de Modelos Animales y Toxicología
Preclínica, Vicepresidencia de Investigaciones, Instituto Finlay,
avenida 17 e/ 198 y 200, Reparto Atabey, Municipio Playa, código
2postal 16017, Ciudad de la Habana, Cuba. DepartamentO de
Microbiología, Instituto de Farmacia y Alimentos (IFAL, U.H), calle
222 e/ 25 y 27, Reparto La Coronela, Municipio Lisa, Ciudad de la
Habana, Cuba.
*Correspondencia a: Arencibia Arrebola Daniel Francisco. E-mail:
[e-mail]


Resumen

El ensayo de la morfología de la cabeza del espermatozoide permite el estudio
del potencial genotóxico de muestras problemas a nivel celular. En este
artículo se decidió evaluar y comparar en 16 ratones Balb/c machos por grupo,
el efecto de dos sustancias mutagénicas en este ensayo. La Ciclofosfamida
(CF) en dosis de 50 mg/kg y la Bleomicina (BL) en dosis de 20 mg/kg,
administradas por vía intraperitoneal durante 5 días consecutivos. Con
posterior sacrificio de los animales 35 días después de la última administración
de los mutágenos. Se obtuvo como resultado que ambos mutágenos
disminuyeron la concentración espermática y aumentaron el índice espontáneo
de cabezas anómalas en los espermatozoides, siendo observado un marcado
efecto mutagénico en la CF en comparación con la BL. Estos resultados
reafirman el uso de la CF como mutágeno eficiente y seguro en este ensayo, el
cual es obligatorio dentro de la batería de ensayos genotóxicos. Además
permiten utilizar este diseño experimental en estudios y evaluaciones de
antigenotoxicidad in vivo de nuevos productos o drogas.

Palabras Claves: Bleomicina | ciclofosfamida | ensayo de la morfología de la
cabeza del espermatozoide | ratones Balb/c.



1/13Respuesta de ratones Balb/c frente a ciclofosfamida y bleomicina en el ensayo de la morfología de la cabeza del
espermatozoide
http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n120211/021107.pdf
REDVET. Revista electrónica de Veterinaria 1695-7504
2011 Volumen 12 Número 2

Abstract

The head sperm morphology assay, allows the study of the genotoxic potencial
of samples at the cellular level problems. In this article we decide to evaluate
and to compare in 16 Balb/c males mice per group, the effect of two
mutagenic substances in these assay, the Cyclophosphamide (CF) in dose of
50 mg/kg and the Bleomycin (BL) in dose of 20 mg/kg, administered by
intraperitoneal route during 5 consecutive days, being sacrificed the animals
35 days after the last administration of the mutagens. We obtained that both
mutagen diminished the spermatic concentration and they increased the
spontaneous index of anomalous sperms heads, being observed a marked
mutagenic effect in the CF in comparison with the BL. These results reaffirm
the CF as efficient mutagen and safe in this assay, which is obligatory inside
the battery of genotoxic assays. They also allow using this experimental design
on the in vivo antigenotoxicity studies and evaluations of new products or
drugs.

Key Words: Bleomycin | cyclophosphamide | head sperm morphology assay |
Balb/c mice.



Introducción

El ensayo de la morfología de la cabeza del espermatozoide se encuentra
dentro de la batería de ensayos de genotoxicidad, el cual permite determinar la
inducción de daño genotóxico a nivel de las células germinales masculinas.

Esta técnica es sensible, rápida y económica lo cual justifica su uso. Entre los
sistemas que se emplean para evaluar los daños ocurridos en las células
germinales se encuentra el ensayo basado en los criterios morfológicos de
Wyrobek y Bruce, estos criterios permiten el estudio y la clasificación de la
cabeza del espermatozoide al incluir dentro de las clasificaciones, cabezas
normales, anormales y dentro de este último los que tienen morfología en
1 forma de banana, los amorfos, sin gancho y con dos colas.

Esta herramienta a su vez permite evaluar cambios en la concentración
espermática, siendo capaz de detectar el daño irreversible que queda fijado
2por un período de tiempo relativamente largo.

Para la evaluación de nuevos productos en necesario conocer la frecuencia
basal e inducida de aparición de cada uno de los fenómenos que estudia la
toxicología genética, para de esta forma corroborar la existencia de una
sustancia mutagénica y/o genotóxica, y así corroborar la existencia o no de un
efecto mutagénico y en que medida se manifiesta, además al ser estas
2/13Respuesta de ratones Balb/c frente a ciclofosfamida y bleomicina en el ensayo de la morfología de la cabeza del
espermatozoide
http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n120211/021107.pdf
REDVET. Revista electrónica de Veterinaria 1695-7504
2011 Volumen 12 Número 2

pruebas tan decisivas en la evolución positiva o negativa de un nuevo producto
de índoles diversas es necesario buscar el biomodelo animal ideal.

Es conocido por todos los usos de la ciclofosfamida (CF) y la bleomicina (BL)
como drogas antineoplásicas. La ciclofosfamida pertenece al grupo
cloroetilaminas. El desarrollo de éste agente representó un esfuerzo para lograr
mayor selectividad de la droga hacia el tejido tumoral. Considerado un agente
3alquilante bifuncional, no posee especificidad por fase alguna del ciclo celular.
En tanto la bleomicina es considerada dentro del grupo de los antibióticos
4, 5tumorales. Las células tumorales son más susceptibles a la bleomicina
durante la proliferación activa y son demoradas específicamente en su
3 progresión a través de la fase G del ciclo celular.

Ambas drogas son utilizadas con gran efectividad como sustancias de
referencia en los estudios de genotoxicidad y mutagénesis; al ser evaluadas en
ensayos de toxicología preclínica (especial), fueron positivas a un sin número
de ensayos genotóxicos in vivo. Además ejercen un efecto negativo en
estudios de la reproducción de la hembra y del macho.

Existe gran polémica sobre los diferentes tipos de sustancias y esquemas de
tratamiento en los cuales se utilizan las sustancias mutagénicas como
controles positivos en los ensayos de mutagénesis y/o genotoxicidad. Así como
diversas dosis han sido utilizadas, pero por lo general en los ensayos in vivo
6 todo versa en el uso del biomodelo animal ideal.

Para lo cual en este artículo se decide evaluar y comparar en el biomodelo de
ratones Balb/c machos, el efecto de estas dos sustancias mutagénicas la CF y
la BL; en el ensayo de la morfología de la cabeza del espermatozoide, útil
como ensayo de genotoxicidad y como ensayo para determinar la fertilidad del
macho. Administradas por vía intraperitoneal (i.p), durante 5 días
consecutivos. Siendo sacrificados los animales 35 días posteriores a la última
administración de los mutágenos.

Destacando que utilizamos para este estudio solo ratones de la línea Balb/c
sobre la base de resultados de nuestras investigaciones donde obtuvimos que
esta línea es la más eficiente en este ensayo. Tomando en consideración la alta
concentración espermática y la baja frecuencia espontánea de
espermatozoides anómalos; así como la alta sensibilidad a sustancias
7mutagénicas como la CF encontrada en esta línea de ratón.
3/13Respuesta de ratones Balb/c frente a ciclofosfamida y bleomicina en el ensayo de la morfología de la cabeza del
espermatozoide
http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n120211/021107.pdf
REDVET. Revista electrónica de Veterinaria 1695-7504
2011 Volumen 12 Número 2

Materiales y métodos

Animales. Se utilizaron ratones machos Balb/c, adultos jóvenes (6-7
semanas), procedentes del Centro de Producción de Animales de Laboratorio
(CENPALAB, Cuba). El peso corporal oscilaba entre 25-30 g al término de la
cuarentena. Se mantuvieron en condiciones controladas de temperatura (25 ±
2º C