Caracterización molecular de las integrinas Beta-1 (CD29) y Beta-3 (CD61) porcinas: obtención de anticuerpos contra dominios específicos de ambas moléculas

Ángeles María Jiménez Marín

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• Publié le: 01 janvier 2003
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Extrait

Universidad de Córdoba

Departamento de Genética




CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE LAS
INTEGRINAS BETA-1 (CD29) Y BETA-3 (CD61)
PORCINAS. OBTENCIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA
DOMINIOS ESPECÍFICOS DE AMBAS MOLÉCULAS.







Ángeles María Jiménez Marín

Tesis Doctoral

Córdoba, Junio 2002 Cuando llegan estos momentos te vienen a la memoria muchas personas que
han participado en la realización de esta tesis doctoral, a las cuales tengo que

En primer lugar, a mi padre, que con la educación, firmeza y valor que me ha
transmitido, he aprendido a luchar siempre en los momentos más difíciles, y con sus

A Manolo Barbancho Medina, a través del cual entré a formar parte de este
Departamento y, que a p esar de su nuevo cargo en el Rectorado, siempre ha estado
disponible y me ha ayudado cuando lo he necesitado.
A Juan José Garrido Pavón, sin el cual no hubiera finalizado esta tesis
doctoral, por su ayuda constante, sus buenos consejos y por“aguantarme y
scucharme” más que como un director, como un amigo.
Por supuesto, a ambos, por su labor de dirección con dedicación y trabajo a lo
largo de estos cuatro años y por haber tenido la suerte de haber trabajado junto a
ellos.
A Diego Llanes Ruiz, por haber per mitido que formara parte de su grupo de
investigación, por el apoyo recibido para la consecución de la beca asociada a uno de

A Ángela Moreno López, por transmitirme sus conocimientos de Inmun ología,
estar siempre que la he necesitado y por sus palabras de aliento en más de un momento
difícil.
A Luis Morena Sanz, por estar dispuesto a ayudarme en todo momento y en

A Reyes Álvarez, por a yudarme en muchas ocasiones con el trabajo
experimental y pasarme las recetas de los reactivos. También por el interés mostrado
en mi trabajo de investigación y poder contar con ella en todos los aspectos.
A María Friend, por transmitirme todo lo relacion ado con el cultivo celular y
por su cuidado y mimo en las ocasiones que más los necesitabas.
A Cristina Arce, por sus consejos e interés en todo lo relacionado con esta tesis,
por su ayuda en la estructuración de la tesis, por su amistad y los buenos rato s

A Gonzalo Paños, por ayudarme con las citometrías, el interés mostrado, en
especial por una de las moléculas caracterizadas, y hacer los viajes en el autobús más
amenos, al igual que las comidas.
A Yasser Ezzart por ayudarme siempre que se lo he pedido y entender la

e
monopolización del ordenador durante estos últimos meses.
compartidos.
especial por enseñarme la técnica de los microsatélites.
sus proyectos y por su optimismo hasta en los peores momentos.
palabras de ánimo siempre hacía surgir en mi una sonrisa.
agradecer su granito de arena aportado. A Noemí Yubero, que aunque lleva poco tiempo entre nosotros ya hemos

A Damián de Andrés, por ayudarme siempre que pudo, tener respue sta a
cualquier duda y prestarme todo el tiempo necesario en mis primeros momentos en el

A José Pérez de la Lastra, que a pesar de no haber compartido mucho tiempo
juntos en el laboratorio, he podido siempre contar con su ayuda.
A Lola Gali ani, Alicia Márquez y Eva Sarrión, que a pesar de no encontrarse
ya entre nosotros, siempre estuvieron interesadas y me prestaron su ayuda siempre que
la necesité. En especial, a Alicia por los buenos momentos vividos y sus consejos tanto
en el trabajo exp erimental como en otros temas; y a Lola, por ayudarme en los
momentos tan difíciles que ella y yo sabemos.
A Juana Martín de la Mulas, por transmitirme las técnicas de
inmunohistoquímica, por su paciencia e interés mostrado, al igual que por ayudarme
en l a elaboración de las fotos y su interpretación.
A Yolanda Millán, por compartir poyata en más de una ocasión y enseñarme
todo lo relacionado con la inmunohistoquímica.
A Librado Carrasco, por su inestimable ayuda a la hora de la interpretación de
resultados de inmunohistoquímica.
A Antonio Di Pietro, por iniciarme en el trabajo experimental, contar con su

Como también a Isabel Roncero, por permitirme formar parte de su grupo
durante algunos años como alumna interna; y a Encarnación Alejandre, ya que
gracias a su motivación en las clases de Genética despertó en mi el interés por la

A Maite Roldán por su ayuda en algunos temas informáticos y cedernos el
sistema de expresión pET.
A todos mis compañeros de l ala este del edificio C 5, con los que comparto
todos los días la comida, gracias por el apoyo recibido y los temas de sobremesa.
A mi familia, por entender y comprender mi ausencia durante la elaboración de
la tesis, sobretodo en los últimos meses, y s obretodo a mi madre, por no estar a su lado
en estos momentos, que quizá sean, en los que más me necesita.
Finalmente, a Andrés por sus consejos, por la paciencia que ha mostrado en
todos los momentos, sobretodo en los más difíciles, y saber entenderme, e scucharme y
aguantarme cuando ni siquiera yo era capaz.
-
investigación.
apoyo y prestarme su ayuda.
algunos
Departamento.
compartido algunos buenos momentos.


























A la memoria de mi padre, Ángel























ÍNDICE Índice


La superfamilia de las inmunoglobulinas
1.2. Las cadherinas
1.3. Las selectinas
1.4. Las integrinas
2.1. Subunidades a
2.2. Sub unidades b


7. CD29 O b
7.1. La familia de las b integrinas
7.2. Fu nciones de la familia b integrina
7.3. a b 1, CD49a/CD29)
7.4. a b
7.5 a b 3, CD49c/CD29)
7.6. a b 4, CD49d/CD29)
7.7. a b 5, CD49e/CD29)
7.8. a b 6, C
7.9. a b 7, CD49g/CD29)
7.10. a b 8, CD49h/CD29)
7.11. a b 9, CD49i/CD29)
7.12. a b 10, CD49j/CD29) 10
7.13. a b 11, CD49k/CD29) 11
7.14. a b
8. CD61 O b
8.1. La familia de las b integrinas
8.2. a b
8.3. a b
b Y b
b Y b EN EL CÁNCER
11. EL b Y b
b Y b

OBJETIVOS
MATERIALES Y MÉTODOS

1.1. Aislami ento de células mononucleadas (PBMC) y plaquetas de sangre periférica
1.2. Esplenocitos de ratón
1.3. Células de mieloma

3620-43333-20172421331416-209V-181433532-1135i13-18311730-9111122135-181V11611922633-11531917234-2714871171101193516115-1-11

1. ANIMALES, TEJIDOS Y CÉLULAS
13. EL CERDO COMO ANIMAL DE ESTUDIO
INTEGRINAS EN LOS ANIMALES DOMÉSTICOS 12.LAS
EN LA TERAPIA GÉNICA PAPEL DE LAS INTEGRINAS
10. EL PAPEL DE LAS INTEGRINAS
EN EL XENOTRANSPLANTE 9. EL PAPEL DE LAS INTEGRINAS
IIb
INTEGRINA
v, CD49v/CD29) (VLA
(VLA
(VLA
(VLA (VLA
(VLA
D49f/CD29) (VLA
(VLA
(VLA
(VLA
2, CD49b/CD29) (VLA
(VLA
INTEGRINA6. LAS INTEGRINAS COMO RECEPTORES DE SEÑALIZACIÓN
5. LA UNIÓN AL LIGANDO
4. LOS CATIONES DIVALENTES3. EL LIGANDO2. ESTRUCTURA DE LAS INTEGRINAS
1.1.
1. RECEPTORES DE ADHESIÓN
INTRODUCCIÓNÁngeles Jiménez Marín Tesis Doctoral 36
1.5. Estirpes de E.Coli 3
36
37
37
5. RT 38
5.1. Síntesis de la primera cadena (RT) 38
5.2. Síntesis d e la segunda cadena (PCR) 38

39 39
40
40 41
41
42
13.1. Preparación del gel de secuenciación 42
42
13.3. Purificación mediante precipitación con etanol 42
13.4. Electroforesis y análisis automático de la secuencia 43
43
44
15.1 . Cultivo de la genoteca 44
15.2. Transferencia a membrana de nylon 44
45 45

46
46
47
18. EXPRESIÓN DE LOS GENES EN E.coli 49
18.1. Construcción de un vector para la expresió 49
18.2. Transformación bacteriana 49
18.3. Expresión en E.coli 50
50
51
51
21.1. Inmunización de los rat