ETUDE DES ÉTAPES PRÉCOCES DE L'INFECTION PAR UN RÉTROVIRUS : CIBLAGE CENTROSOMAL DU PFV-1 (PRIMATE FOAMY VIRUS TYPE 1)

Coralie Petit

Description

Niveau: Supérieur
MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L'EDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre MEMOIRE présenté par Coralie PETIT Pour l'obtention du diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes ETUDE DES ÉTAPES PRÉCOCES DE L'INFECTION PAR UN RÉTROVIRUS : CIBLAGE CENTROSOMAL DU PFV-1 (PRIMATE FOAMY VIRUS TYPE 1) Laboratoire EPHE : Directeur d'études : Pr. Dominique DORMONT Agents Transmissibles Non Conventionnels C.E.A. - Département Recherche Médicale / Service de Neurovirologie 92265 Fontenay-aux-Roses Laboratoire de stage : sous la direction du Dr. Ali SAÏB Pathologie et Virologie Moléculaires Directeur de laboratoire : Pr. Hughes de Thé CNRS UPR9051 / Bât.INSERM – Hôp. St Louis / 75010 PARIS ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE ETUDES DES ÉTAPES PRÉCOCES DE L'INFECTION PAR UN RÉTROVIRUS : CIBLAGE CENTROSOMAL DU PFV-1 (PRIMATE FOAMY VIRUS TYPE 1) Mémoire soutenu EPHE Banque de Monographies SVT 1

• protéine lc8


• primate foamy


• interactions entre virus


• protéines virales


• étapes précoces de l'infection


• bases moléculaires de l'interaction

Sujets

• Soutien
• Institut national de la santé et de la recherche médicale
• Dormont, Pennsylvania

Informations

• Publié par: chaeh
• Nombre de lectures: 115
• Langue: Français

Extrait

       

MINISTERE   DE   LA   JUEENSSE , DE   L ’ UCEDIOATN   ELANAONTI ET   DE   LA   EERCHHCER   ECOLE    EITUQPRA   DES   HAUTES   ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre   MEMOIRE présenté par Coralie PETIT   Pour l’obtention du diplôme de l’Ecole Pratique des Hautes Etudes

E TUDE   DES   ÉTAPES   PRÉCOCES   DE   L ’ INFECTION PAR   UN   RÉTROVIRUS :   C IBLAGE   CENTROSOMAL   DU PFV-1 (P RIMATE F OAMY V IRUS   TYPE 1)             Laboratoire EPHE:Directeur d’études: Pr. Dominique DORMONT Agents Transmissibles Non Conventionnels C.E.A. - Département Recherche Médicale / Service de Neurovirologie 92265 Fontenay-aux-Roses   Laboratoire de stage:sous la direction duDr. Ali SAÏB Pathologie et Virologie Moléculaires                                           Directeur de laboratoire : Pr. Hughes de Thé CNRS UPR9051 / Bât.INSERM –Hôp. St Louis / 75010 PARIS ECOLE   PRATIQUE   DES   HAUTES   ETUDES SCIENCES   DE   LA   VIE   ET   DE   LA   TERRE   E TUDES   DES   ÉTAPES   PRÉCOCES   DE   L ’ INFECTION   PAR   UN   RÉTRSUVORI : C IBLAGE   CENTROSOMAL   DU PFV-1 (P RIMATE F OAMY V IRUS   TYPE 1)   Mémoire soutenu

par Coralie PETIT     De nombreux pathogènes intracellulaires ont développé des mécanismes spécifiques dans le but de détourner à leur seul profit les systèmes cellulaires. Par exemple, certains virus, comme le virus herpès ou le virus de la vaccine, utilisent le cytosquelette pour leur déplacement au sein de la cellule. Néanmoins, le rôle du cytosquelette dans la réplication des rétrovirus reste peu exploré. Il a préalablement été montré que la réplication du rétrovirus complexe PFV-1 (Primate Foamy Virus type 1), le prototype des virus foamy, nécessite un réseau microtubulaire intact : lors desétapes précoces de l’infection, le virus cible le centrosome avant l’import nucléaire du génome viral (Saïb et al., 1997). Dans cette étude ayant pour but de préciser et définir le rôle des microtubules dans le cycle réplicatif du PFV-1, nous montrons que, lors de l’infection, les protéines virales atteignent le centrosome sous forme de capsides entières et structurées. Or, la protéine structurale Gag, composant majeur des capsides, est capable de cibler seule la région péri-centrosomale, hors contexte viral. L’analyse de la distribution sub-cellulaire d’une protéine de fusion GFP-Gag et de différents mutants de cette protéine, révéle que ce ciblage nécessite un domaine de 30 acides aminés formant un motif coiled-coil localisé dans la région N-terminale de la protéine Gag, entre les acides aminés 150 et 180. L’utilisation du nocodazole, drogue qui dépolymérise les microtubules permet de confirmer l’implication du réseau microtubulaire dans ce ciblage. De plus, l’adressage de cette protéine au centrosome fait intervenir une protéine cellulaire associée aux microtubules, appartenant au complexe de la dynéine, la protéine LC8. En effet, des études d’immunofluorescence et de co- immunoprécipitation ont permis de mettre en évidence une interaction directe entre les protéines Gag et la chaîne légère LC8 de la dynéine. Cette étude renforce la notion d’implication du réseau microtubulaire lors des étapes précoces de la réplication d’un rétrovirus complexe (VIH-1 : McDonald et al., 2002), et fait de LC8 la première protéine cellulaire reconnue comme partenaire de la protéine Gag d’un rétrovirus.   MOTS CLES:Rétrovirus, Cytosquelette, Spumavirus, Centrosome      

   

ABREVIATIONS 5

LISTE DES FIGURES ET DOCUMENTS ANNEXES

PREAMBULE / AVANT-PROPOS 2

INTRODUCTION 3 A- L ES V IRUS F OAMY  3 1- Classification des rétrovirus 3 2- Historique des Spumaretrovirus 4

3- Morphologie et génome 6 4- Les protéines virales et les spécificités des virus foamy 7 5- Cycle viral 11 B- L E C TOSQYETTELEU  13 1- Les microfilaments 13 2- Les filaments intermédiaires 15 3- Les microtubules 15 4- Le centrosome 17 5- Dynamique des microtubules 18 6- Les moteurs microtubulaires 19 7- Interactions inter-réseaux 21 C- I NSIOCTARETN   ENTRE   VIRUS   ET   TTETOSQUELECY  21 1- Le réseau d’actine 22 2- Le réseau microtubulaire 22 D- P ROJET   DE   RECHERCHE                                                                 1- Questions en suspens : Interactions entre virus et cellule hôte          2- Situation à l’arrivée au laboratoire                                                  3- Plan de l’étude                                                                              

MATERIEL ET METHODES  1- Cellules et conditions de culture                                                     2- Obtention et titrage des lots viraux / Infection de cellules                3- Construction des mutants                                                                4- Transformation et mini-préparations d’ADN                                  5- Transfection                                                                                   6- Immunofluorescence (IF)                                                               7- Western Blot (WB)                                                                          8- IP-WB                                                                                            9- Transcription/traduction coupléesin vitro                                       10- Anticorps utilisés                                                                          11- Microscopie électronique                                                             12- Tampons utilisés                                                                          

RESULTATS                     A- R APPEL   DES   RÉSULTATS   DU   TOIRBORAALE                                 B- G AG   HORS   CONTEXTE   VIRAL                                                         C- A GRESOME                                                                                      D- S ÉQUENCE   MINIMALE                                                                    E I NIOCTRATEN   AVEC   LES   PROTÉINES   DES   MOTEURS   ITCURBOULAIMRES - 1- Utilisation de drogues spécifiques                                                   2- Utilisation de protéines « dominants négatifs »                                3- Détection d'une co-localisation par immunofluorescence