Mecanismos moleculares de la latencia viral. Papel del factor de transcripción HIVEP3

Gonzalo Sánchez Duffhues

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• Publié le: 01 janvier 2011
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Extrait

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UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE MEDICINA

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA CELULAR, FISIOLOGÍA E
INMUNOLOGÍA

SECCIÓN INMUNOLOGÍA




TESIS DOCTORAL

MECANISMOS MOLECULARES DE LA LATENCIA VIRAL.
PAPEL DEL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN HIVEP3.


Memoria presentada para optar al grado de Doctor en Bioquímica por
Gonzalo Sánchez Duffhues


Directores
Marco Antonio Calzado Canale
Eduardo Muñoz Blanco

Córdoba, Diciembre de 2010

TITULO: Mecanismos moleculares de la latencia viral. Papel del factor de
transcripción HIVEP3
AUTOR: Gonzalo Sánchez Duffhues
© Edita: Servicio de Publicaciones de la Universidad de Córdoba. 2011
Campus de Rabanales
Ctra. Nacional IV, Km. 396
14071 Córdoba
www.uco.es/publicaciones
[e-mail]
ISBN-13: 978-84-694-1642-6

D. Marco Antonio Calzado Canale, Investigador Doctor contratado por la
Universidad de Córdoba,



CERTIFICA



Que D. Gonzalo Sánchez Duffhues ha realizado en el Departamento de Biología
Celular, Fisiología e Inmunología bajo su dirección el trabajo titulado “Mecanismos
moleculares de la latencia viral. Papel del factor de transcripción Hivep3”, que a mi
juicio reúne los requisitos necesarios para optar al grado de doctor.









Y para que conste, firmo el presente, en Córdoba a 17 de Noviembre 2010.









D. Eduardo Muñoz Blanco, Catedrático de Inmunología. Departamento de Biología
Celular, Fisiología e Inmunología de la Universidad de Córdoba,



CERTIFICA



Que D. Gonzalo Sánchez Duffhues ha realizado en el Departamento de Biología
Celular, Fisiología e Inmunología bajo su dirección el trabajo titulado “Mecanismos
moleculares de la latencia viral. Papel del factor de transcripción Hivep3”, que a mi
juicio reúne los requisitos necesarios para optar al grado de doctor.









Y para que conste, firmo el presente, en Córdoba a 17 de Noviembre 2010.









AGRADECIMIENTOS

Toda vez que la tesis doctoral supone el fin de una etapa, y el comienzo de
otra, toca acordarse de aquellos quienes han aportado de una u otra forma para su
elaboración. En primer lugar, agradecer a mis directores de tesis Eduardo y Marco,
por la confianza depositada en mí, por el esfuerzo empleado en descubrirme este
mundo de la ciencia y por su dedicación durante estos años. Mención especial merece
Eduardo, que me conoció como alumno en clase y, aún así, me reclutó para la causa.
Mucho de lo que me ocurra de ahora en adelante en mi carrera científica, será
consecuencia de la base que me han aportado. Por supuesto, dar las gracias a todos los
compañeros(as) que han pasado por el laboratorio, porque de todos ellos he aprendido
algo. Algunos(as) llevan ya un tiempo fuera y otros están empezando. Mucha suerte y
ánimo. Y por último, justo ahí en el despacho de al lado, muchas gracias Rosario
porque siempre he podido contar contigo para aquellas cosas no tan experimentales.

Lejos del laboratorio, nunca se me olvidaría agradecer a mi familia, en
especial a mis padres. Siempre preocupados por mi situación, dando su apoyo, aunque
me parece que nunca les pude explicar exáctamente en qué trabajaba. Normal.

Finalmente, es imposible no mencionar a Amaya. A su lado empezó y
concluyó todo. Ha sido testigo de cada uno de los avances que fueron apareciendo y
sufridora de todos los "daños colaterales" de su elaboración. En definitiva,
imprescindible para mí en el laboratorio y fuera de él. Mil gracias. Prepárate porque
empezamos otro reto.














































"Si buscas resultados distintos, no hagas siempre lo mismo."

Albert Einstein


























ABREVIATURAS
ABREVIATURAS
ARNi ARN de interferencia
ARNpol-II ARN polimerasa II
ARNsi ARN silenciador
Proteína de unión a !-antitripsin AT-BP
ATCC American type culture collection
CCR5 Receptor de quimiocinas 5
CPT Complejo de Preiniciación de la Transcripción
CTD Dominio Carboxi Terminal
CTIP-2 Proteína de interacción con COUP-TF 2
CXCR4 Receptor de quimiocinas 4
dNTPs Deoxinucleótidos Difosfato
FACS Fluorescence Analizer Cell Sorter
GFP Proteína fluorescente verde
HAT Histona Acetil Transferasa
HDAC Histona deacetilasa
HIVEP Proteína activadora del VIH
I"B! Inhibidor de NF-kB
I"B quinasa IKK
IL Interleucina
KBP-1 Kappa Enhancer binding protein-1
LTR Región promotora terminal
Luc Gen luciferasa
NaBut Butirato Sódico
Nef Factor regulador negativo de la expresión
NF-"B Factor Nuclear kappa B
NRE Zona Reguladora Negativa
p-TEFb Factor de elongación de la transcripción positivo
PIC Complejo de Pre-Integración
PMA Forbol 12-miristato, 13-acetato
RRE Elemento de respuesta a Rev
SAHA Vorinostat, Suberoylanilide Hydroxamic Acid
SIDA Síndrome de Inmunodeficiencia adquirida
TAR Elemento de respuesta a Tat
TARGA Terapia Antiretroviral de gran actividad
Tat Proteína transactivadora transcripcional VIH
TSA Triscostatin A
VIH Virus de la Inmunodeficiencia Humana
VPA Ácido Valproico
VSV Virus de la estomatitis vesicular
ZAS Estructura ácida en dedos de Zinc
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ÍNDICE Índice!
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I. INTRODUCCIÓN.

1. EL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA. 2
1.1. Estructura del virus de la Inmunodeficiencia Humana. 3
1.2. Ciclo Infectivo del VIH-1. 6
1.2.1. Proceso de entrada del virus en la célula. 6
1.2.2. Procesos tempranos del ciclo infectivo. 8
1.2.3. Regulación transcripcional del VIH-1.. 10
1.2.4. Procesos tardíos del ciclo infectivo. 14

2. LATENCIA VIRAL. 15
2.1. Tipos de latencia: pre- y post-integración del VIH-1. 17
2.2. Mecanismos moleculares que contribuyen a la latencia. 19
2.2.1 El lugar y la orientación de integración del VIH-1 en el
genoma hospedador. 19
2.2.2. Factores de transcripción celulares. 20
2.2.3. La organización de la cromatina del VIH-1. 22
2.2.4. La proteína Tat. 23
2.2.5. ARN de interferencia. 25

3. FAMILIA DE PROTEÍNAS HIVEP. 26
3.1. Regulación de la expresión de Hivep3. 28
3.2. Función de la familia de proteínas HIVEP 29

II. OBJETIVOS. 32

III. MATERIALES Y MÉTODOS. 34

1. Líneas celulares. 35
2. Anticuerpos y reactivos. 35
3. Plásmidos. 36