Aligned fibrillar collagen matrices for tissue Engineering [Elektronische Ressource] / von Babette Lanfer

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• Publié par: technische_universitat_dresden
• Publié le: 01 janvier 2010
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Extrait

Aligned Fibrillar Collagen Matrices for
Tissue Engineering
  
 
Dissertation

Zur Erlangung des Akademischen Grades
Doktor-Ingenieur
(Dr.-Ing.)


vorgelegt der
Fakultät Maschinenwesen
der Technischen Universität Dresden
von

Babette Lanfer (M.Sc.)
geboren am 10.5.1979 in Stuttgart


eingereicht am 2.12.2009
verteidigt am 21.4.2010

Gutachter:
Prof. Dr.rer.nat.habil. Thomas Bley, TU Dresden
Prof. Dr.rer.nat. Carsten Werner, TU Dresden
 Contents
Danksagung iii
Nomenclature iv
Abstract v
1 Introduction 1
2 Fundamentals 3
2.1 The extracellular matrix - a biomolecular sca old . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
2.1.1 Collagens . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
2.1.2 Proteoglycans . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
2.2 Cell-matrix interactions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
2.2.1 Biochemical signals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
2.2.2 Mechanical signals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.2.3 Structural signals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.3 Approaches to engineer aligned extracellular matrix structures . . . . . . . . . . 9
2.3.1 Topographically and chemically patterned surfaces . . . . . . . . . . . . . 10
2.3.2 Electrospun bers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
2.3.3 Reconstitution of extracellular matrix . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
2.3.4 Guidance conduits . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
2.4 Cellular response to aligned structural cues . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
2.4.1 Cellular response in general . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
2.4.2 Mesenchymal stem and progenitor cells . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
2.4.3 Neural stem and progenitor cells . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
3 Objectives 19
4 General Discussion 20
4.1 Aligned collagen matrices obtained by shear ow deposition . . . . . . . . . . . . 20
4.1.1 Alignment mechanism . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
4.1.2 Functionalization with heparin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
4.2 Mesenchymal stem and progenitor cells cultured on aligned collagen matrices . . 24
4.3 Human neural stem cells cultured on aligned collagen matrices . . . . . . . . . . 25
4.4 Cellulose hollow ber membranes coated with aligned collagen for spinal cord
regeneration . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27
iContents
5 Summary and Outlook 28
Bibliography 30
Appendices 42
iiDanksagung
Die vorliegende Dissertation wurde am Leibniz-Institut fur Polymerforschung Dresden e.V. in
der Arbeitsgruppe Biofunktionelle Polymermaterialien am Max Bergmann Zentrum fur Bioma-
terialien angefertigt.
Herzlich bedanken moc hte ich mich bei Herrn Prof. Dr. Thomas Bley fur die Ermoglichung und
Betreuung der Promotion und die konstruktiven Hinweise bei der Anfertigung dieser Arbeit.
Mein besonderer Dank gilt Herrn Prof. Dr. Carsten Werner fur seine wissenschaftliche Un-
terstutzung und Forderung, sein stetes Interesse am Fortgang der Arbeit, die motivierenden
Gesprache und das freundschaftliche Arbeitsklima.
Fur die anregenden Diskussionen, wertvollen Hinweise sowie hilfreichen Kritiken zum erfolgre-
ichen Fortgang der Arbeit mochte ich mich herzlich bei Herrn Dr. Uwe Freudenberg bedanken.
Herrn Dr. Philipp Seib danke ich besonders fur die sehr gute fachliche Betreuung bei der
Durchfuhrung der Zellversuche und die nutzlichen Ratschlage zum Manuskript.
Fur seinen gro en Beitrag bei der Entwicklung des Versuchsaufbaus und seine stete Hilfsbere-
itschaft danke ich Herrn Dr. Ralf Zimmermann. Herrn Dr. Tilo Pompe danke ich fur die
fachlichen Anregungen und hilfreichen Kritiken zum erfolgreichen Fortgang der Arbeit.
Meinen Kollegen und Mitarbeitern des Forschungsbereich Biofunktionelle Polymermaterialien
moc hte ich ganz herzlich fur die gute Zusammenarbeit und fur ihren Beitrag zum Entstehen
und Gelingen der vorliegenden Arbeit danken. Insbesondere bedanke ich mich bei Frau Mi-
lauscha Grimmer fur die fachkundige Einweisung in die Praparation der Kollagengele und ihren
Beitrag zur Entwicklung der orientierten Kollagenmatrices, bei Frau Yvonne Muller fur ihren
Beitrag bei der Beschichtung der Zellulosekapillaren und bei Herrn Martin Kaufmann und Herrn
Lars Renner fur die hilfreichen Tipps und Tricks bei der konfokalen Mikroskopie. Mein Dank
gilt auch Frau Martina Franke und Frau Marina Prewitz fur ihre Hilfe bei der Durchfuhrung
der Zellversuche, Herrn Dimitar Stamov fur die Charakterisierung der Kollagenmatrices durch
Rasterkraftmikroskopie und Frau Tina Lenk fur die HPLC Untersuchungen.
Fur die angenehme und freundschaftliche Atmosphare in der Arbeitsgruppe danke ich David
Sebinger, Marion Fischer, Marina Prewitz, Andreas Ofenbauer, Uwe Freudenberg, Martin Kauf-
mann, Dimitar Stamov und meinen ehemaligen Arbeitskollegen Lars Renner und Philipp Seib.
Abschlie end m ochte ich mich bei meiner Familie, bei meinen Freunden und ganz besonders bei
meinem Freund Martin fur ihre Unterstutzung und Motivation wahrend der Anfertigung dieser
Arbeit bedanken.
iiiNomenclature
3D Three - Dimensional
CFUs Colony-Forming Unit-Fibroblasts
CNS Central Nervous System
ECM Extracellular Matrix
EGF Epidermal Growth Factor
FGF Fibroblast Growth Factor
GAGs Glycosaminoglycans
GFAP Glial Fibrillary Acid Protein
GlcA Glucuronic Acid
GlcNAc N-Acetylglucosamine
MSC Mesenchymal Stem Cell
NSCs Neural Stem Cells
PA Peptide-Amphiphile
PDMS Polydimethylsiloxane
PEMA Poly(ethylene alt maleic anhydride)
PLA Poly Lactic Acid
PLGA Poly (Lactic-Coglutamic) Acid
PLLA Poly(L-lactic acid)
PNS Peripheral Nervous System
POMA Poly(octadecene alt maleic anhydride)
PS Polystyrene
RGD Arginine-Glycine-Asparate
ivAbstract
The desire for repair of tissue defects and injury is the major need prompting research into
tissue engineering. Engineering of anisotropic tissues requires production of ordered substrates
that orient cells preferentially and support cell viability and di erentiation. Towards this goal,
this thesis investigated methodologies to align extracellular matrix structures in vitro to guide
stem/progenitor cell behaviour for tissue regeneration. Aligned collagen brils were deposited
on planar substrates from collagen solutions streaming through a micro uidic channel system.
Collagen solution concentration, degree of gelation, shear rate and pre-coating of the substrate
were demonstrated to determine the orientation and density of the immobilized brils. The
degree of collagen bril orientation increased with increasing ow rates of the solution while the
matrix density increased at higher collagen solution concentrations and on hydrophobic poly-
mer pre-coatings. Additionally, the length of the immobilized collagen brils increased with
increasing solution concentration and gelation time. Aligned collagen matrices were re ned by
incorporating the glycosaminoglycan heparin to study multiple extracellular matrix components
in a single system. Multilineage (osteogenic/adipogenic/chondrogenic) di erentiation of mes-
enchymal stem and progenitor cells was maintained by the aligned structures. Most noticeable
was the observation that during osteogenesis, aligned collagen substrates choreographed ordered
matrix mineralization. Likewise, myotube assembly of C2C12 cells was profoundly in uenced by
aligned topographic features resulting in enhanced myotube organization and length. Neurites
from neural stem cells were highly oriented in the direction of the underlying brils. Neurite
outgrowth was enhanced on aligned collagen compared to non-aligned collagen or poly-D-lysine
substrates, while neural di erentiation and cell survival were not in uenced by the type of sub-
strate. Using the new method to align collagen type I, the interior walls of cellulose hollow ber
membranes were coated with longitudinally aligned collagen brils to fabricate an advanced
guidance conduit for nerve regeneration. First cell culture experiments showed that the tubes
coated with aligned collagen supported viability and adherence of spinal cord-derived neuro-
spheres. Together, these results demonstrate the feasibility of aligned collagen matrices as a
versatile platform to control cell behaviour towards tissue regeneration. Ultimately, the new
method to align collagen brils and to coat hollow membranes may become an integral compo-
nent of tissue engineering, working synergistically with other emerging techniques to promote
functional tissue replacements.
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