Effets de la protéine C-réactive sur la biologie du monocyte humain dans l'athériosclérose à travers une analyse du transcriptome, Effects of C-Reactive Protein on human monocytes in atherogenesis through a transcriptome analysis

Didier Hanriot

Description

Sous la direction de Dan Longrois
Thèse soutenue le 07 avril 2008: Nancy 1
But : L’inflammation joue un rôle important dans la pathophysiologie de l’athérosclérose. Des marqueurs non spécifiques de l’inflammation tels que la Protéine C-Réactive (CRP) sont associés à un risque élevé de développer l’athérosclérose ou des complications aigues. Par sa capacité à se différencier en macrophage et à interagir avec différents types cellulaires, le monocyte joue un rôle essentiel dans l’athérogenèse. Afin de mieux caractériser le lien causal entre CRP et athérosclérose, nous avons étudié les effets de la CRP sur plusieurs aspects de la biologie du monocyte humain. Matériel et Méthodes : Les monocytes isolés du sang périphérique d’hommes jeunes (n=9) et de femmes pré ménopausées (n=9) en bonne santé ont été purifiés par gradient de Ficoll et sélection positive CD14, mis en culture pendant une nuit puis exposés à la CRP purifiée (25 µg/ml) pendant 12 ou 24 h. Une puce à oligonucléotides réalisée à façon par nos soins et contenant 250 gènes a permis d’effectuer le profilage de l’expression génique des monocytes traités ou non par la CRP. Les variations d’expression de certains gènes ont été confirmées par PCR quantitative et western blot. Résultats et Discussion : Nos résultats montrent que la CRP augmente l’expression des cytokines proinflammatoires IL-1 et IL-6, et des chimiokines IL-8 et Gro-beta. En revanche, la CRP diminue l’expression des MIP-1alpha, MIP-1beta et de l’alpha 2 macroglobuline. De plus, nous rapportons ici pour la première fois que la CRP augmente l’expression génique du récepteur nucléaire Liver X Receptor (LXR) alpha, facteur de transcription dont le rôle dans l’athérosclérose n’a été que récemment suggéré. Par western blot, nous montrons que l’augmentation d’expression du LXR alpha est suivie de sa translocation nucléaire. En conclusion, cette thèse montre que la CRP exerce à la fois des effets pro- et antiinflammatoires sur les monocytes humains ex-vivo. Nos résultats sont en faveur d’un rôle anti-athérogénique de la CRP de part son effet précédemment inconnu sur le LXR alpha.
-Puces à oligonucléotides
-LXR alpha
Object : Inflammation plays an important role in the pathophysiology of atherosclerosis. Non specific inflammation biomarkers, such as C-Reactive Protein (CRP), are associated with a higher risk of developing atherosclerosis or other acute complications. By its capacity to differentiate into macrophages and to interact with other cells monocytes play a key role in atherogenesis. In order to better understand the causal link between CRP and atherosclerosis, we studied the effects of CRP on several aspects of human monocyte biology. Material and methods : Monocytes isolated from peripheral blood of healthy men (n=9) and healthy premenopausal women (n=9), were purified by Ficoll and CD14 positive selection, cultured over night then exposed to purified CRP (25 µg/ml) for 12 or 24h. A custom-made oligonucleotide array of 250 genes was used to analyse gene expression profiles of monocytes exposed or not to CRP. Changes in gene expression were confirmed by quantitative PCR and western blot. Results and Discussion : Our results show CRP increased pro-inflammatory cytokine (IL-1 and IL-6) and chemokine (IL-8 and Gro-beta) expression. In contrast, CRP decreased MIP-1 alpha, MIP-1 beta and alpha-2 macro-globuline expression. Furthermore, we were able to report, for the first time, that CRP increased gene expression of Liver X receptor (LXR) alpha, a transcription factor whose role in atherosclerosis has only recently been shown. Using western blot, we showed that the increased LXR alpha gene expression was followed by its nuclear translocation. In conclusion, this thesis suggests that CRP may have both pro and anti-inflammatory effects on the human monocyte ex-vivo. Our results argue in favor of an anti-atherogenic role of CRP, at least in part by its new effect on LXR alpha.
Source: http://www.theses.fr/2008NAN10119/document

Informations

• Publié par: Thesee
• Nombre de lectures: 656
• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 3 Mo

Extrait

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http://www.cfcopies.com/V2/leg/leg_droi.php
http://www.culture.gouv.fr/culture/infos-pratiques/droits/protection.htm UNIVERSITE HENRI POINCARE-NANCY I

FACULTE DE MEDECINE


N° attribué par la bibliothèque
/--/--/--/--/--/--/--/--/--/--/



Thèse
Présentée pour l’obtention du titre de

Docteur de l’Université Henri Poincaré, Nancy I

Ecole Doctorale : Biologie Santé Environnement

Spécialité : Ingénierie cellulaire et tissulaire



Par

Didier HANRIOT



EFFETS DE LA PROTEINE C REACTIVE

SUR LA BIOLOGIE DU MONOCYTE HUMAIN DANS L’ATHEROSCLEROSE

A TRAVERS UNE ANALYSE DU TRANSCRIPTOME


Thèse soutenue publiquement Le 7 Avril 2008




Directeur de thèse : Monsieur le Pr. Dan LONGROIS (Nancy I)

Membres du jury :

Rapporteurs : Madame le Dr. Cécile DUPLAA (Pessac)
Monsieur le Dr. Daniel WAGNER (Luxembourg)

Examinateurs : Monsieur le Pr. Stéphane LAURENT (Paris)
Monsieur le Pr. Jean MANTZ (Clichy)
Monsieur le Pr. Faïez ZANNAD (Nancy)


UNIVERSITE HENRI POINCARE-NANCY I

FACULTE DE MEDECINE


N° attribué par la bibliothèque
/--/--/--/--/--/--/--/--/--/--/



Thèse
Présentée pour l’obtention du titre de

Docteur de l’Université Henri Poincaré, Nancy I

Ecole Doctorale : Biologie Santé Environnement

Spécialité : Ingénierie cellulaire et tissulaire



Par

Didier HANRIOT



EFFETS DE LA PROTEINE C REACTIVE

SUR LA BIOLOGIE DU MONOCYTE HUMAIN DANS L’ATHEROSCLEROSE

A TRAVERS UNE ANALYSE DU TRANSCRIPTOME


Thèse soutenue publiquement Le 7 Avril 2008




Directeur de thèse : Monsieur le Pr. Dan LONGROIS (Nancy I)

Membres du jury :

Rapporteurs : Madame le Dr. Cécile DUPLAA (Pessac)
Monsieur le Dr. Daniel WAGNER (Luxembourg)

Examinateurs : Monsieur le Pr. Stéphane LAURENT (Paris)
Monsieur le Pr. Jean MANTZ (Clichy)
Monsieur le Pr. Faïez ZANNAD (Nancy)

Je tiens à remercier :

Monsieur le Professeur Faiez ZANNAD,
Qui m’a accueilli dans son laboratoire et donné les moyens de réaliser ce
travail.
Il me fait l’honneur de juger cette thèse, qu’il veuille trouver ici le témoignage
de ma sincère gratitude et de toute ma considération.

Monsieur le Professeur Dan LONGROIS,
Qui m’a confié et suivi ce travail. Il m’a fait profiter de ses grandes et
inestimables connaissances scientifiques et médicales. A travers sa confiance,
ses recommandations, son dynamisme et son humanisme, il m’a transmis le
plaisir de la recherche fondamentale. Qu’il soit assuré de mon grand respect et
de ma profonde reconnaissance.

Madame le Docteur Cécile DUPLAA,
Qui m’a fait un grand hommage et plaisir en acceptant de juger ce travail,
qu’elle trouve ici le témoignage de ma grande considération.

Monsieur le Docteur Daniel WAGNER,
Qui a bien voulu me faire la faveur de juger cette thèse, je tiens à lui adresser
mon profond respect et toute ma reconnaissance.

Monsieur le Professeur Jean MANTZ,
Qu’il soit vivement remercié pour le temps qu’il m’a accordé en jugeant ce
travail.

Monsieur le Professeur Stéphane LAURENT,
Qui m’a fait le privilège d’accepter de juger ce travail.
Qu’il trouve ici l’expression de mes remerciements les plus respectueux.





Qu’il me soit permis de remercier très sincèrement,

Madame le Docteur Véronique REGNAULT et Monsieur le Docteur Patrick
LACOLLEY,
Pour leurs excellents conseils scientifiques et leurs concours dans
l’aboutissement de cette thèse. Qu’ils soient assurés de toute ma sympathie et
ma grande reconnaissance.

Madame le Docteur Ketsia HESS,
Sans qui cette thèse ne serait pas ce qu’elle est. Je la remercie pour ses précieux
conseils, aussi bien théorique que pratique, en biologie moléculaire. J’ai appris
beaucoup d’elle. Qu’elle soit assurée de mon immense gratitude pour sa
précieuse aide scientifique de même que son soutien moral.

Madame le Docteur Armelle ROPARS,
Pour ses riches conseils en immunologie et en culture cellulaire. Merci pour
son réconfort et son amabilité durant ces années de recherche.

Monsieur le Professeur Paul-Michel MERTES,
Qui m’a apporté son appui et ses connaissances aussi bien scientifiques que
médicales lors des nombreuses réunions de travail au cours de cette thèse. Qu’il
soit assuré de toute ma considération.

Messieurs les Professeurs Athanase BENETOS et Pierre-Yves MARIE,
Pour leurs excellents conseils scientifiques et médicaux partagés autour de ce
projet.

Madame le Docteur Josette CAPIAUMONT,
Pour sa précieuse aide en culture cellulaire et pour m’avoir fait confiance en
m’allouant certains enseignements.





Monsieur le Professeur Simon THORNTON,
Pour sa précieuse aide et ses excellents conseils scientifiques dans
l’aboutissement de ce projet.

Monsieur le Professeur Jean-Louis GUEANT,
Chez qui j’ai fait mes premiers pas dans le monde de la recherche et qui a eu la
gentillesse de me laisser accéder à l’équipement de PCR quantitative en temps
réel de son laboratoire. Qu’il soit assuré de ma profonde et sincère estime.

Monsieur le Professeur Thomas LECOMPTE et Madame le Docteur Véronique
LATGER-CANNARD,
Qui ont eu l’amabilité de m’ouvrir les portes de leur laboratoire pour me
donner accès aux techniques de cytométrie en flux.

Madame le Docteur Brigitte DOUSSET,
D’avoir participé à mon initiation dans le domaine de la recherche. Qu’elle soit
assurée de toute mon amitié.

Qu’il me soit enfin permis de remercier de tout cœur,

Tous les membres du laboratoire INSERM U684 avec qui j’ai eu tant de plaisir à
partager ces moments de travail pendant plus de trois ans…je pense en particulier à
Adey, Audrey, Carlos, Carole, Fathia, Frédéric, Gaël, Gaëlle, Jean-Marc, Huguette,
Patrick, Rosine, Sandrine, Yvan, Valérie,...et toutes celles et ceux avec qui j’ai eu la
chance de collaborer.

De même que toute l’équipe du service de Biochimie et Biologie moléculaire du
Professeur Jean-Louis Guéant, en particulier le Docteur Isabelle Gastin pour son
amabilité, le Docteur Rosa Maria Guéant avec qui j’ai eu le plaisir de collaborer, Jean-
Pierre Huet pour sa sympathie et enfin, le Professeur Farès Namour pour ses précieux
conseils scientifiques.














A mes parents,

A mes frères, beaux frères et belles-sœurs,

A mes neveux et nièces,

A ma femme Idrissia qui m’a soutenu jusqu’au bout…

…et à mon fils Ziad à qui je dédie cette thèse.



PUBLICATIONS


- Publication n°1:

C-Reactive Protein induces pro- and anti-inflammatory effects, including activation of the
liver X Receptor, on human monocytes.
Didier HANRIOT, Gaëlle BELLO, Armelle ROPARS, Carole SEGUIN-DEVAUX, Gaël
POITEVIN, Sandrine GROSJEAN, Véronique LATGER-CANNARD, Yvan DEVAUX,
Faiez ZANNAD, Véronique REGNAULT, Patrick LACOLLEY, Paul-Michel MERTES,
Ketsia HESS and Dan LONGROIS.
Acceptée dans “Thrombosis and Haemostasis” (Thromb Haemost 2008; 99: 558–569)
A fait l’objet d’un Focus Editorial (Thromb Haemost 2008; 99: 461–462)


- Publication n°2:

C-reactive protein (CRP) increases VEGF-A expression in monocytic cells via a PI3-kinase
and ERK 1/2 signaling dependent pathway.
Gaëlle BELLO and Frédéric CAILOTTO, Didier HANRIO