Influence du lait maternel sur l'ontogenese de la réponse immunitaire de l'intestin du porcelet, Influence of maternal milk on the instestinal immune response ontogeny of the piglet

Benoît Levast

Description

Sous la direction de Henri Salmon
Thèse soutenue le 29 janvier 2010: Tours
Le porcelet a un système immunitaire immature à la naissance, ceci est compensé par la protectionsystémique (colostrum) et humoral (lait) de la mère. Cette immunité passive n’est pas le seul transfertmaternel, la microflore et probablement d’autres substances humorales sont aussi transmis, favorisant ledéveloppement de la réponse immune en Immunoglobuline A (IgA).Lors d’un élevage conventionnel, la réponse IgA se développe autour de 3 semaines. La question est desavoir quelle est l’influence de la durée de lactation sur le développement de l’intestin du jeune porcelet. Pourcela, nous avons définis 3 groupes de porcelets sevrés à 1, 2 et 3 semaines et un groupe contrôle non sevré.Nous avons étudié en cinétique à 7, 14, 21 et 28 jours la concentration en IgA du sang et la microfloreintestinale. De plus, l’analyse du répertoire VDJ (chaîne lourde) des IgA a été réalisée à 28 jours.Les résultats montrent qu’une lactation très réduite (à 1 semaine) provoque, à 21 jours, une déficienceen IgA sériques (spécifiques et totaux) et une diversification de la flore. Il en résulte une plus grande diversitédu répertoire IgA dans le ganglion mésentérique.
-Ganglion mésentérique
The neonate piglet has an immature immune system, consequently it receives from its mother asystemic and local mucosal protect via the colostrum and milk respectively. The mother is not contribute onlyby passive immunity but also by transmission of microflora and presumably other humoral substancesfavouring the onset of Immunoglobulin A (IgA) immune response.As IgA response increased in conventional breeding, i.e at 3 weeks of age, we ask the question of theinfluence of suckling onto the IgA development in neonatal gut. For that purpose we defined 3 groups ofpiglets weaned at 1, 2 and 3 weeks and 1 group no weaned. We looked IgA products in blood and intestinalmicroflora at days 7, 14, 21, 28 and the IgA heavy VDJ repertoire development at the same age, day 28.The results show that very short suckling (1 week only) led to lower seric IgA (specific and total)concentration and higher flora diversity, at day 21 and consequently larger IgA diversity in the mesentericlymph node (MLN).
-Flore intestinale
Source: http://www.theses.fr/2010TOUR4012/document

Sujets

• Flore intestinale

Informations

• Publié par: Thesee
• Nombre de lectures: 47
• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 3 Mo

Extrait

UNIVERSITÉ FRANÇOIS - RABELAIS
DE TOURS


ÉCOLE DOCTORALE SST
Lymphocytes et Immunité des Muqueuses

THÈSE présentée par :
Benoît LEVAST

soutenue le : 29 janvier 2010


pour obtenir le grade de : Docteur de l’université François – Rabelais de Tours
Discipline / Spécialité : Sciences de la Vie et de la Santé / Immunologie


Influence du lait maternel sur l’ontogenèse
de la réponse immunitaire de l’intestin du
porcelet



THÈSE dirigée par :
M. SALMON Henri Directeur de recherche, INRA, Nouzilly

RAPPORTEURS :
M. CHARLEY Bernard Directeur de recherche, INRA, Jouy en Josas
Mme. URDACI Maria Professeur, Université Bordeaux 1, Bordeaux

JURY :
M. CHARLEY Bernard Directeur de recherche, INRA, Jouy en Josas
M. CHIRON Jean-Paul Professeur, Université François - Rabelais, Tours
Mme. LAITAT Martine Première assistante, Université de Liège, Liège, Belgique
M. MARNET Pierre-Guy Professeur, Université Européenne de Bretagne, Rennes
M. MEURENS François Chargé de recherche, INRA, Nouzilly
M. SALMON Henri Directeur de recherche, INRA, Nouzilly
Mme. URDACI Maria Professeur, Université Bordeaux 1, Bordeaux


« C’est la curiosité, l’obsession et la simple persévérance qui m’ont conduit à
mes idées » - Albert Einstein




Remerciements

Ce travail de thèse s’est déroulé à l’INRA de Nouzilly dans l’unité Infectiologie Animale et
Santé Publique, dans l’équipe Lymphocytes et Immunité des Muqueuses, dirigée par le Dr
Henri Salmon. Ces 3 années de recherche ont été financées par l’INRA et la région Centre.
En premier lieu, je remercie Henri Salmon pour m’avoir accueilli dans son équipe. Toujours
disponible, il m’a enseigné la rigueur scientifique nécessaire à l’élaboration des protocoles et
à l’analyse des résultats. Merci de m’avoir fait découvrir l’univers du Sus scrofa !! Les
moments partagés en dehors du labo ont toujours été agréables voire excitants devant le baby-
foot !
Je tiens à remercier Jean-Paul Chiron pour la présidence de cette thèse et pour avoir consacré
de son temps à l’examen de ce travail.
Je voudrais exprimer toute ma gratitude à Maria Urdaci et à Bernard Charley qui ont accepté
d’être rapporteurs de cette thèse et qui ont consacré de leur temps à l’analyse et la critique de
ce travail de recherche.
Je remercie Martine Laitat et Pierre-Guy Marnet pour avoir accepté de faire partie du jury et
pour l’examen de cette thèse.
Merci à François Meurens, co-encadrant de cette thèse, qui a su prendre en charge certains
aspects techniques de mon travail comme la qPCR mais aussi et surtout la rédaction des
articles scientifiques et de la thèse. Merci pour ton fameux pragmatisme ! Merci pour le
soutien scientifique et humain que tu m’as apporté. Tu m’as fait partager ou découvrir ce
qu’est la passion du chocolat Belge, le bon goût de la bière…Belge aussi et la passion de
l’histoire, Française cette fois !
Merci à Mustapha Berri, mon autre co-encadrant, avec qui j’ai partagé le bureau pendant mes
deux premières années de thèse. Merci pour tes conseils et avis que tu as pu me soumettre
ainsi que pour ton soutien pendant ces trois années. Les discussions sportives que nous avons
pu avoir, venant d’un athlète de haut niveau, étaient un bon exutoire !
Le travail de thèse est souvent décrit comme un travail de « petites mains » dans le milieu de
la recherche. Les miennes ont été éduquées par le savoir, la technique et la vivacité de Claire
1 Chevaleyre. L’énergie consacrée par Claire pour le travail de paillasse de ma thèse m’a été
d’une grande aide. Merci Claire ! Grâce à toi l’élevage et les viscères du porc n’ont plus de
secret pour moi ! Tu as su me donner la passion du pot de labo, base essentielle du bon
fonctionnement d’une équipe. C’est pour cela que je dis vive Clairette !
Merci à Sandrine Melo aussi pour le travail de paillasse et le travail en élevage. Sa
disponibilité et sa bonne humeur m’ont été d’une grande aide dans la période chargée d’une
deuxième année.
Enfin un thésard dans un laboratoire, c’est comme un petit fusible, il en faut plusieurs sinon
ca pète ! Je tiens donc à exprimer ma gratitude envers Galliano Zanello (avec deux « l » svp !)
avec qui j’ai passé beaucoup de temps durant ces trois années. Pas trop au travail pour éviter
les accidents au scalpel, beaucoup à midi et en co-voiturage ! Mais surtout beaucoup en
dehors de l’INRA, merci Galli pour m’avoir amené au rugby, fait rire en VTT et parler dans
les bars !
La vie entre thésard masculin pourrait aussi lâcher sans la présence féminine. Une autre
thésarde a beaucoup compté dans mon intégration en Touraine, j’ai cité Marianne ! Merci
pour ta bonne humeur, tes soirées (chantantes) et ton écoute.
Parmi les autres jeunes de l’INRA, je souhaite remercier Manon (parce qu’elle est
Normande), Bertrand et sa petite taille, Denis et Thomas compagnons de squash, Astrid (vive
Preuilly !), Vincent DJ en devenir, Salim et son fameux tajine, Audrey, Nadia (vive
Grenoble !) et Fatemeh (ah ! Paris...).
Mes remerciements vont aux autres amis que j’ai pu rencontrer à Tours, les potes du rugby.
Aux amis de master de Grenoble, à ptit flo et enfin à mon ami d’enfance Arnaud.
Merci, pour leur collaboration scientifique, à Isabelle Lantier avec qui rime PCR et
microcapillaire. De même à Patrick Dabert pour son accueil à Rennes et ses connaissances en
SSCP. Merci aux unités expérimentales, Eric, Romuald, Frédéric, Eric, Gilles, Albert, Jean-
Philippe. Merci aux autres personnes de IASP avec qui j’ai pu partager des moments simples
au café, en congrès.
La rencontre de toutes ces personnes m’a aussi conduit à la rencontre essentielle de ma thèse.
La rencontre avec Lucie m’a donné l’énergie pour remonter des abysses et surfer sur les
vagues dangereuses qui font face au parcours d’un thésard. Merci mon chaton !!
2 Et tout naturellement, je veux remercier ma famille à qui j’ai pu régulièrement donner de mes
bonnes ou mauvaises nouvelles. Merci à mes grands-parents, mes parents, à Camille, Marion,
Juliette, Claire, Fanny et Rémi.

3 Résumé
Après la naissance, le porcelet, comme tout mammifère nouveau-né, reçoit par le lait maternel
une protection contre les agressions de l’environnement. Cette protection est assurée passivement par
les IgA maternelles et les facteurs lactés qui peuvent être à la fois des freins et des stimulants du
développement de la réponse immunitaire intestinale (RII) IgA propre du porcelet. L’objectif de ma
thèse est donc d’identifier l’influence de la durée de lactation sur la RII.
Pour réaliser cet objectif, nous avons tout d’abord comparé le transcriptome des plaques de
Peyer de l’iléon et du jéjunum de porcelets allaités à 28 jours. Nous avons mis en évidence un
répertoire aux antigènes des IgA (répertoire IgA) plus diversifié dans la plaque de Peyer iléale,
soulignant son importance particulière dans le développement de la RII.
Nous avons ensuite procédé à des sevrages de plus en plus précoces (Groupe G1 sevré à J7,
G2 à J14, G3 à J21 et G4 laissé sous la mère) et regardé leur impact sur le développement des IgA
propres, le transcriptome des cytokines et le répertoire IgA associés à la RII dans le ganglion
mésentérique (MLN). Les porcelets sevrés les plus précocement (G1) présentent, entre J14 et J28, une
concentration en IgA sériques plus faible que les porcelets sevrés plus tardivement (G3) ou non sevrés
(G4). Chez les porcelets sevrés les plus précocement, le transcriptome du MLN montre à J28 une
augmentation de l’expression des cytokines et facteurs de transcription tels que IL-17 (inflammation),
TGF-β et FOXP3 (Treg), et un répertoire IgA du MLN plus diversifié.
La modification de la flore intestinale des porcelets sevrés ultra précocement (G1) et non
sevrés (G4) a été suivie dans les fèces par analyse SSCP des ADNr 16s à 7, 14, 21 et 28 jours. A 21
jours, les porcelets sevrés ultra précocement présentent une flore plus diversifiée que les porcelets non
sevrés. La corrélation entre l’absence d’approvisionnement en IgA lactés et la diversification accrue de
la flore intestinale des porcelets s’observe d