Régulation des sous-types d’hétérodimères du récepteur GABAB dans la moelle épinière en conditions de douleurs neuropathiques : rôle des protéines partenaires

Marie-Amélie Papon

Description

Sous la direction de Marc Landry
Thèse soutenue le 04 décembre 2009: Bordeaux 2
Dans le système nerveux central, le récepteur inhibiteur GABAB est un archétype des RCPGs hétérodimériques. Il est composé en effet de deux sous-unités, la sous-unité GABAB1 (B1a ou B1b) qui lie l’agoniste et la sous-unité GABAB2 couplée aux protéines G. L’activation de ce récepteur a un effet antinociceptif bien établi concernant les douleurs aiguës mais son effet reste cependant très limité en cas de douleurs neuropathiques. Notre hypothèse est que son activation et sa signalisation peuvent être altérées par des protéines partenaires, aboutissant à des processus de désinhibition dans la moelle épinière en conditions de neuropathie. Nos résultats mettent en évidence le rôle de deux protéines partenaires qui sont surexprimées en conditions douloureuses et qui diminuent l’activation du récepteur GABAB via deux mécanismes différents. D’un part, la protéine cytosolique 14-3-3? induit la dissociation de l’hétérodimère B1b/B2. Cette action a lieu principalement dans les compartiments post-synaptiques. D’autre part, la fibuline-2, protéine de la matrice extracellulaire diminue l’activation de l’hétérodimère B1a/B2. Il s’agit cette fois préférentiellement d’une action dans les compartiments pré-synaptiques. Des stratégies anti-sens (siRNA anti-14-3-3? ou anti-fibuline-2) ou des peptides de compétition sélectifs de l’interaction B1b/14-3-3? permettent de potentialiser les effets antinociceptifs d’un agoniste du récepteur sur un modèle animal de neuropathie. L’ensemble de ces résultats suggèrent que l’état d’oligomérisation des RCPGs peut être modulé in vivo par des protéines partenaires endogènes impliquées dans le développement ou le maintien d’états pathologiques de sensibilisation à la douleur.
-Récepteur GABAB
-Désinhibition
-Moelle épinière
-Douleur neuropathique
-Protéine partenaire
-Fibuline-2
-14-3-3?
-Rat
In the central nervous system, the inhibitory GABAB receptor is an obligate heterodimeric GPCR that requires the association between GABAB1 (B1a or B1b) and GABAB2 subunits. The heterodimeric GABAB receptor activation has a well-known antinociceptive action in acute pain but its effect appears limited in pathological states. Our hypothesis is that the GABAB activation and signaling could be altered by partner proteins, thus resulting in desinhibition processes in the spinal cord. In the present study, we investigated the role of two partner proteins overexpressed in neuropathic states which decrease GABAB activation through two different mechanisms. On the one hand, the cytosolic 14-3-3? protein induces the dissociation of the heterodimer B1b/B2. This effect occurs in post-synaptic compartments. On the other hand, fibulin-2, an extracellular matrix protein, which decreases the activation of the heterodimer B1a/B2 localized preferentially in presynaptic compartments. Anti-sens strategies (anti-14-3-3? or anti-fibulin-2 siRNA) or competing peptides specific of 14-3-3?/B1b interaction, potentiate the antinociceptive effects of GABAB agonist in an animal model of neuropathic pain. Taken together, our data suggest that GPCR oligomeric state can be modulated in vivo by endogenous partners proteins that are involved in the development and the maintenance of pain sensitization.
-GABAB receptor
-Disinhibition
-Spinal cord
-Neuropathic pain
-Partner protein
-Fibulin-2
-14-3-3?
-Rat
Source: http://www.theses.fr/2009BOR21671/document

Sujets

• Désinhibition
• Moelle épinière
• Douleur

Informations

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• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 13 Mo

Extrait

Université Victor Segalen Bordeaux 2

Année 2009
Thèse n°1671
THÈSE
pour le
DOCTORAT DE L’UNIVERSITÉ BORDEAUX 2

Mention : Sciences Biologiques et Médicales
Option : Biologie Cellulaire et Physiopathologie


Présentée et soutenue publiquement


Le 04 Décembre 2009
Par Marie-Amélie PAPON
Née le 21 Août 1983 à Brive-la Gaillarde (19)



Régulation des sous-types d’hétérodimères du récepteur GABA B
dans la moelle épinière en conditions de douleurs
neuropathiques : Rôle des protéines partenaires







Membres du Jury

M. Daniel Voisin – Professeur – U862 Université Bordeaux 2……………………....Président
M. Eric Lingueglia – DR INSERM – IPMC Université de Nice ............ …………...Rapporteur
M. François Rassendren – DR CNRS – IGH Université de Montpellier 1 et 2…….Rapporteur
M. Laurent Groc – CR CNRS – UMR5091 Université Bordeaux 2 ....... ……….Membre invité
M. Marc Landry – Professeur – U862 Université Bordeaux 2 .............. ……Directeur de thèse REMERCIEMENTS

Tout d’abord, je souhaite remercier sincèrement les membres de mon jury de thèse :
Monsieur Daniel Voisin qui a accepté de présider cette soutenance, Messieurs Eric
Lingueglia et François Rassendren qui ont aimablement accepté d’être les rapporteurs
de mon mémoire de thèse, et Monsieur Laurent Groc qui a accepté d’examiner ce travail.

Je tiens particulièrement à remercier Monsieur Frédéric Nagy pour m’avoir accueillie
dans son laboratoire ainsi que pour sa disponibilité et son écoute en toutes
circonstances, même lorsque le moment n’était pas nécessairement opportun. Vous avez
su me conseiller, me rassurer, m’épauler à tout moment et je vous en suis très
reconnaissante.

Je remercie très chaleureusement Monsieur Marc Landry pour m’avoir offert la grande
opportunité de rejoindre son équipe en m’accueillant tout d’abord pour mon stage de
Master 2, puis pour ces trois années de thèse riches d’enseignements et de rencontres
inoubliables. Marc, c’est la première fois en 4 ans que je vais TE tutoyer!! Je te
remercie de m’avoir fait confiance dans ce projet et de m’avoir confrontée à mes
responsabilités car je n’aurais peut être pas sauté certaines barrières si tu ne m’y avais
pas poussé. J’en suis sorti grandie et tu y es certainement pour beaucoup.

Un grand merci à Monsieur André Calas pour avoir consacré de son temps à la lecture et
à la correction de ma thèse. Je le remercie également pour m’avoir donné l’opportunité
de faire une émission de radio à ses cotés. Ce fut une expérience très enrichissante et
j’en garderai un très bon souvenir !

Je voudrai vraiment remercier tous les membres du laboratoire sans ordre particulier
pour leur aide et leur sympathie.

Tiphaine, mon binôme du labo, la seule personne à qui j’ai « tourné le dos » (si, si !!)
pendant de longues journées passées dans le bureau mais avec qui j’ai pu discuter de
choses toutes aussi intéressantes les unes que les autres. Binôme en tous genres, de
congrès, mais aussi d’allergies aux rats ! Il est vrai qu’on n’était pas toujours très belles
à voir avec nos yeux globuleux à déambuler dans les couloirs du laboratoire! Egalement,
binôme de « pauses KitKat » même si on sait gérer de mieux en mieux nos pulsions! Ce
fût sincèrement un réel plaisir de travailler quotidiennement à tes cotés! Ce congrès à
Chicago me laissera un souvenir inoubliable! Vivement le prochain!

Alexandre pour avoir tenté par tous les moyens de me redonner goût à la biologie
moléculaire. Merci de t’être autant investi à mes cotés dans cette galère de clonage et
de sous-clonage. La raclette est toujours d’actualité!!

Encore un grand merci à Tiphaine, Alexandre mais aussi Claire et Thomas Papouin qui
m’ont filé un énorme coup de main notamment sur la fin, dans les derniers moments les
plus difficiles à gérer émotionnellement! Merci encore énormément à tous les 4 !
Dimitri, je retiendrai de tes conversations la curiosité que tu n’as de cesse d’éveiller en
tous ceux qui t’entourent. Maintenant heureux papa, je vous souhaite plein de bonheur
pour la suite à tous les trois !

Un grand merci à Monsieur Etienne Gontier pour sa disponibilité et son aide précieuse
qu’il m’a accordées. Ce fût très enrichissant de travailler à tes côtés ! Merci encore
Monsieur le Directeur et bonne continuation!

Pour mes premiers pas expérimentaux en ces murs, je ne peux que remercier Sophie qui
m’a encadrée avec patience et pédagogie lors de mon arrivée au laboratoire. Tu m’as
initiée à de multiples techniques et je dois dire que les bons réflexes appris au cours de
ma formation de jeune Padawan me servent encore aujourd’hui. Je ne cesse de suivre
ton chemin, puisque j’arrive normalement à Québec très bientôt!!

Désormais je l’espère membre actif de la confrérie des FRETeux, ma devise est d’être à
l’image de mon enzyme préférée en donnant beaucoup sans rien attendre, excepté peut
être l’illumination de ceux qui m’entourent.

Merci à Claire, Virginie, Rabia, mes trois petites mamans du labo. Je souhaite
sincèrement vous remercier de tout le travail que vous faites car si j’ai pu évoluer
pendant ces 4 années dans un tel environnement c’est certainement parce qu’il y a des
personnes comme vous qui font beaucoup de sacrifices pour que l’équipe ne manque de
rien. Merci pour cela et bien sûr pour tous les bons moments de rires et de discussions
passés ensemble.

Merci aux électrophysiologistes, Yves et Fanny. Merci d’avoir passé autant de temps à
patcher vos cellules sur le projet Fibuline malgré toutes les difficultés rencontrées!
Fanny, incontestable Paloise, membre actif du Toutouyoutou, merci pour ton réconfort,
ton aide, ton encouragement, les petits mots colorés que tu me laissais régulièrement
sur mon bureau, mais aussi pour les nombreuses farces auxquelles tu t’es donné à cœur
joie! Et libre à toi de faire Coco lors de ma soutenance de thèse !!

Merci au club des Salamanders : Jean-Marie, Hélène et Stéphanie, notre fournisseuse
de Vitamine C pour nous aider à passer l’hiver! Toujours étrange de voir défiler courant
Novembre dans les couloirs de l’institut un trafic de sacs de kiwis de 5kg (pas plus, pas
moins !)! En tous cas, ils sont fameux et j’espère me souvenir que l’arbre à Kiwi
est…l’actinidia et non le kiwitier !

Merci à Lien, Alberto, et à Pétra, à qui je passe le flambeau. Pétra, j’espère que mes
petites souris B1-GFP que j’ai eu beaucoup de mal à faire parvenir à Bordeaux te
porteront chance ! Bon courage pour la suite !

A Marie qui se démène beaucoup pour mener à bien l’organisation de son congrès en
Egypte ! Et à Chérine, pour ses précieux conseils concernant les évènements post-
congrès, il est vrai que d’après toi « Tout est bien ! », donc rendez-vous au mois de
décembre !
A tous ceux qui ont traversé le labo plus ou moins longtemps: Pascal, Sarah, Anne-Cécile,
Florence, le ptit Fred, notre chouchou Malik, Sabrina, Cédric, Vincent, et j’en oublie
sûrement! Un merci tout particulier à « mes petits stagiaires » qui ont tous mis la main à
la pâte pour l’élaboration de ce travail : Laurent Ladépèche et Delphine Bernard
essentiellement, mais aussi Elodie Martial et Radwa Atef et enfin Georges Chalhoub qui
me laissera un souvenir impérissable de l’encadrement!

Merci à Rafael Rodriguez-Puertas et Gabriel Barreda-Gomez pour m’avoir accueillie dans
votre laboratoire et pour ce séjour sympathique à Bilbao.

Merci à Christel et Philippe pour m’avoir appris les techniques des « 3F »: FRET, FLIM,
et FRAP !

Merci à tous mes amis ! Les Corréziens que j’ai un peu délaissés ces derniers temps :
Edith et Rémy, So et Pice, Bertrand, Benoit... Merci à Sophie et JB et leur joli petit
Antoine! Tata Pam aura le temps de venir te voir désormais!! Merci à Hervé qui
m’encourage depuis un moment déjà !! Un grand merci à tous les autres pour votre
soutien !

Evidemment je tiens à remercier tout particulièrement Ma Cr… !! Merci d’être toujours
présente dans les moments de pe