Etude par chromatographie gazeuse de la variabilité des acides gras des graines de mil

Pansu, Marc; Tostain, Serge; Pinta, Furnley Maurice

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Extrait

lic*prinrcd from
Jorrrrial of Clirornafograplty, 204 (1981) 377-383
Elsevier Scientific Publishing Company, Amsterdam - Printed in The Netherlands
CHROM. 13,167
ÉTUDE PAR CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE DE LA VARIABILITÉ DES
ACIDES GRAS DES GRAINES DE MIL
M. PANSU*, S. TOSTAIN et M. PINTA
Laboratoire de Spectrographie, Orstorn, 70-74 Route d’Aulnay, 93140 Bondy (France)
SUMMARY
4
Gns chroitintographic study of variatioiis in the amounts offatty acids in millet seeds
To investigate new millet hybrids more accurate methods for the analysis
of seed components are needed. For example, the study of small variations in
amounts of fatty acids requires a better knowledge of sources of errors in their
quantitatii,e chromatographic determination. The results of the extraction-trans-
methylation method used have been verified by saponification and methylation.
The resulting variability is not higher than that due to chromatographic determination
(0.5 y<). Precautions to avoid some unexpected errors have been taken. The multi-
variate analysis of the results, seed by seed, makes it possible to collect those fro1.n
the sanie en. Sterols determined in these seeds cannot be used as biochemical tracers,
since their quantities are too low and not sufficiently variable.
INTRODUCTION
La teneur en huile des graines de mil a été estimée à 4-5 %. Elle est similaire et
même légèrement supérieure (surtout pour l’acide palmitique) à celles du maïs,
sorgho et autres céréales3. Si la composition en acides gras de cette huile a ét6 plusieurs
fois déterminée, Jellum et Powell’ ont été les premiers à étudier les variations de com-
position pour 65 lignées de mil cultivées dnns les mêmes conditions. Ils observent des
variations importantes entre ces lignées. Les corrélations entre acides sont, cependant,
moins fortes que pour le maïs. L’acide stéarique varie le plus. Entre les acides oléiques
et linoléiques, les coefficients de corrélation (négatifs) sont les plus importants. Pour
une variété donnée, la taille des graines semble introduire des différences significatives
dans la composition, notamment pour les acides oléiques et linoléniques. La teneur
de ce dernier croit en raison inverse de cette taille.
L’état de mûrissement des graines joue un rôle important dans Ia composition.
Les changements les plus rapides et les plus importants se produisent dans les seize
jours après l’anthèse. Ces changements sont plus faibles après 24jours. Les fractions
d’acides palmitiques et linoléniques décroissent avec le milrissement tandis que les
acides stéariques et linoléïques augmentent. La composition varie peu dans les graines
mûres, quelle que soit la date de la récolte; les températures durant la maturation
n’ont pas d’influence sur la composition de l’huile de ces graines.
Les résultats d’analyses sont affectés par le choix du solvent d’extraction. Les
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0021-9673/81/000~.0000/%02.5d 0 1981 Elsevier Scientific Publishing Company
I r
CPG DES ACIDES GRAS
M. PANSU, S. TOSTAIN, M. PINTA 379 378
acidifife et Ics acides gras sont extraits à I’dther éthylique. Apr& Cvaporatiòn de
solvants apolaires cxtraicnt surtout Ics triglycdrides (65 h 80 % chcz I’avoinc), alors
I’fthcr, la ni~lhylation cst erccluéc comme dans la première méthode.
que les solvants polaircs extraicnt ICS lipides polaires liés h l’amidon de I’cndospcrmc.
Notre but cst de préciser la fiabilité d’une méthode d’analyse totale dcs acidcs
Coirclitiorrs clrroirratogral~ltiq~~~~s
gras sur der. graincs mûres. En eKct, l’iiitcrprétation des liaisons stochastiques pouvant
1-c dosogc dcs stfrols cst cffcctui: avcc unc colonnc pyrcx de 2.10 m i 300°C,
cxibLcr cntrc Ics coinpodions dc dilTtrcntcs souchcs, nc peut avoir de valcur quc si
rcmplic dc OV-l d 3 sur Chromosorb W AW HMDS.
l’on est assurd Ctc la totalité dc I’cxtraction ct si la variabilité de ccttc dcrnikrc, ainsi
Pour Ics acidcs gras, diverses colonnes ont été expérimentées (DEGS sur
que du dosage, solit faiblcs devant la variabilité des concciitrations des divcrs échan-
Chromosorb W, Silar JOC sur Volaspher A2 100-120 mesh) et nous avons obtenu,
tillons. -_ 3 m x 2 mm, remplie finalcmcnt, Ics meilleurs rfsultats avec une colonne inox de
Cette étude pcut donc se diviscr en quatrc partics.
dc 20% BDS -I- 2% HJP04 sur Chromosorb W (SO-100 mesh). Cette colonne donne
(1) Choix au laboratoire dc la niCthode d’cxtraction et transestdrification avcc
utic bonnc siparaiion dc tous les acidcs gras ainsi qu’une plage de séparation entre
contrôle de la totaliti: dc l’cxtraction par une saponification suivic d’une tiidthylation
I’acidc palmitoléïquc ct I’acidc stfarique pcrnicttant d’utiliser l’dtalon interne (acide
dcs produits saponifiks. I
IicptadfcanoYquc), sans intcrfh-cncc avcc les autres acidcs. En outre, le logarithme
(2) hudc sur une farine homogène de la variabiliti: des opfrations d’extraction
des distanccs dc rCtcntion dcs acidcs gras saturés est rigoureusement proportionncl à
et traiiscst~ri~caLion, et dc la variabiliti: propre h l’analyse chroinatographique; com-
Icur nombrc d’atomcs dc carbone.
pnraison des variabilitk des concentrations rclativcs et dcs tcneurs absolucs lorsque
Lc cIIrotnatographc utilise cst un Girdcl 300 avec détection par ionisation de
l’on utilise un Ctalon intcrne.
Ilaniiiic air-IiydrogCnc. Lc volumc irijcctd cst I pl, la serisibilitd 64 x I. Les tempéra-
(3) Étude de la variabilitd cntre farines de quelques souchcs différentes.
turcs sont rcspcctivemcnt 200°C pour la colonne, 270°C pour l‘injecteur et 250°C
(4) Étudc dc la variabilité entrc graines d’unc mêmc chandcllc, cntre graitics
pour IC dCtcctcur, ct la prcssion d’cntrde de I’azotc gaz vecteur 2 bars.
de plusieurs chandellcs d’une même souche, et colnparaisoll avcc les graincs d’une
autre souche.
RlfSU LTATS
PARTIE EXPERIMENTALE Irticrlallc~s (Ici cwrrjkillcc &.Y rcsirliats d’rinnlyse
L’aiinlysc des stirols sur six variktés fixées montre des tcneurs faibles et pcu
Exfractiori et troi~siitL;tl~~~lufiort
vilriables pour ccs composés. On obscrvc deux pics de faible amplitudc. Cclui de
Les graines sont pesfcs et broyfcs dans un morticr en pyrcx h pistoti rodd,
tcinps dc ri.lcniion IC plus dcvf correspond au [Lsitostfrol à une teneur d’environ
type VSC, puis transfkrécs dans des fiolcs Sovircl dc 25 nil, h bouchagc i vis. Lors dcs
0.06 %. L‘aulrc pic pcut êtrc du sligmastdrol ou du campostérol h une tencur
analyses sur une sculc grainc pesant IO h 25 nig, il a été vfrilid quc Ics pcrtcs, cn poids,
0.02 ”/.
n’exctdcnt pas 5 dans ces opkrations. Pour unc bonnc extraction dcs lipitlcs polaires
L‘analyse rlcs aciilcs gras, après saponification, fournit des chromatogrammcs
et apolaircs, nous avons choisi IC mélangc 2 nil mtthanol-?. nil fthcr ilc pétrolc.
atialogucs i ceux obtenus par I’cxiraction au mdl;lngc mdthanol-dlhcr de pdtrolc et
L’acide hcptadkcanoïquc utilisk coninic étalon intcrnc CSL dissous dans I’kther de transtiiCtliylatiot~. Ccttc dcrnièrc niCtliodc est donc satisfaisante pour l’analyse totale
pétrole d’extraction à raison de 1 mg/iiil pour Ics cxtractions sur 200 iiig dc farine,
dans Ics grnincs ct nous avons étudié la variabilité duc 5 l’dchantillonnagc et au dosage.
OU 0.1 nig/ml pour Ics extractions sur une sculc grainc. Aprb extraction unc nuit, Ia
Nous avons attaquf, pour ccli, uti nombrc de 12 échantillons (p) de 200 mg
1 transmithylation cst réalisée selon unc tcchniquc analoguc h ccllc dc Jclluin cl Powc~~‘,
d’une rnrinc homogfnc ct cKcctuf sur IC produit méthylé 4 injections (11) par échan- ‘70°C pendant 5 h, avec du méthanol anhydrc h 3 d’acidc sulfiiriquc. Aprks rcfroi-
tihi dans IC chrotiiatogrnplic, soit 48 injections (pit). Toutes les injections ont été
dissement et adjonction d’eau, Ics esters en solution dans I’Cthcr dc pétrolc sont
faitcs au hnxird pour Clitiiincr Ics cRcts dc ddrivc évcntucllc dc l’appareil.
I
séchés et recueillis dans dcs tubes gradués cylindroconiqucs h bouchage h vis. CCS Soil {lour un acidc gras donné: x,,, IC rfsultat de chaque injection; I,, les
tubes, fabriqufs sclon nos plans, pcrnicttcnt, sclon Ics priscs d’cssai, dc conccntrcr ICS moycnncs dc chaquc i:chantillon; f, Ia moyennc globale; la variance due aux injec-
solutions sous courant d’azote au volume désiré pour ne pas niodilicr Ics conditiolis tions; tri, In variancc duc B I’Cchantillonnagc.
chromatographiques. Les extraits peuvent être conscrvés h - 10°C ou injcctks dircctc- La dc I’fchantillonnagc cst estitiide par Si = n,Z (f, - T)*/(p - 1)
ment dans IC chromatographc. P
qui cst um cslimation dc aii-iro;. La variance due au dosage par S,2 =Z,Z(xn, - ZP)’/
Corilrôle de la [otalitt de l’exlractioti