Développement d'une méthode originale pour l'évaluation de l'activité virucide des antiseptiques - désinfectants : détermination du pouvoir antiseptique de calixarènes sur le coronavirus Humain, Development of an original method for antiviral antiseptic-disinfectant activity evaluation : determination of antiseptic properties of calixarenic compounds on the Human coronavirus 229E

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Publié par

Sous la direction de Chantal Finance, Raphaël Duval
Thèse soutenue le 13 juillet 2010: Nancy 1
Une antisepsie-désinfection (ATS-D) efficace est fondamentale si l'on considère le manque de traitements antiviraux spécifiques, l'émergence de nouveaux virus et l'accroissement du nombre d'infections nosocomiales virales. A ce jour, une seule norme Européenne, la norme NF EN 14476+A1, propose un cadre pour évaluer l'activité ATS-D antivirale en médecine Humaine et certaines améliorations sont encore nécessaires.Dans ce but, nous avons développé et validé, biologiquement et physico-chimiquement, un protocole pour évaluer l'activité ATS-D antivirale. Ce dernier est basé sur une méthode originale de filtration sur gel faisant appel à des colonnes de Séphadex™ G-25 et G-10 de notre conception comme moyen de neutralisation. Nous avons ainsi évalué, sur le coronavirus Humain 229E (HCoV 229E), les activités ATS-D de deux molécules de référence, la chlorhexidine (CHX) et l'hexamidine (HXM), ainsi que de deux calixarènes : le tetra-para-sulfonato-calix[4]arène (C[4]S) et le 1,3-bis(bithiazolyl)-tetra-para-sulfonato-calix[4]arène (C[4]S-BTZ). Selon la norme Européenne, pour qu'une formulation puisse prétendre à une activité ATS-D antivirale, il faut qu'elle induise une diminution de 4 log10 dans les titres viraux. L'HXM et le C[4]S n'ont montré qu'une très faible activité vis à vis du HCoV 229E. La CHX a montré quant à elle une activité beaucoup plus intéressante bien qu'elle ne puisse néanmoins pas prétendre à une activité ATS sur le HCoV 229E. Enfin, le C[4]S-BTZ a montré une activité comparable, voire meilleure, que la CHX. Son activité s'est en effet avérée plus rapide, rémanente et dénuée de cytotoxicité, contrairement à la CHX
-Evaluation de l'activité antiseptique antivirale
-Neutralisation par filtration sur gel
-Séphadex™
-Coronavirus Humain 229E
-Chlorhexidine
-Hexamidine
-Calix[4]arènes sulfonés
Efficient antisepsis-disinfection is fundamental, considering the lack in antiviral treatments, the emergence of new viruses and the raising of viral nosocomial infections. Only one European Standard (NF EN 14476 + A1) proposes a frame to evaluate antiseptic antiviral activity in Human medicine and some improvements are still needed. We thus developed and validated, biologically and physico-chemically, a virucidal assay based on an original gel filtration method, using “in-house” G-25 and G-10 Sephadex™ columns, as neutralization method. We evaluated, on the Human coronavirus 229E (HCoV 229E), the antiseptic activity of two reference molecules, chlorhexidine (CHX) and hexamidine (HXM), and of two new potent antiviral drugs: the tetra-para-sulfonatocalix[4]arene (C[4]S) and the 1,3-bis(bithiazolyl)-tetra-para-sulfonato calix[4]arene (C[4]S-BTZ). A 4 log10 reduction in viral titers is required, according to the European Standard.HXM and C[4]S showed almost no activity on the HCoV 229E. Considering the CHX, it showed a quite interesting activity, even if it did not reach the threshold to pretend to an antiseptic activity on the HCoV 229E. Finally, The C[4]S-BTZ showed a comparable activity to the CHX, and even better. Thanks to this original method, we could highlight a new interesting molecule, the C[4]S-BTZ, which showed a close activity to the CHX, but faster, residual and exempt of cytotoxicity, whereas chlorhexidine did
-Antiseptic antiviral activity evaluation
-Gel filtration-based neutralization
-Sephadex™
-Human coronavirus 229E
-Chlorhexidine
-Hexamidine
-Sulfonatocalix[4]arenes
Source: http://www.theses.fr/2010NAN10042/document
Publié le : vendredi 28 octobre 2011
Lecture(s) : 56
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Ecole Doctorale BioSE (Biologie, Santé, Environnement)

Thèse
Présentée et soutenue publiquement pour l'obtention du titre de
DOCTEUR DE L'UNIVERSITE HENRI POINCARE
Mention : « Sciences de la Vie et de la Santé »
Par Chloé GELLER

Développement d'une méthode originale pour l'évaluation de l'activité
virucide des antiseptiques – désinfectants
Détermination du pouvoir antiseptique de calixarènes
sur le coronavirus Humain
13 Juillet 2010
Membres du jury :
Rapporteurs Mme Astrid VABRET PU-PH, EA 2128, Université de Caen
Basse-Normandie
M. Jean FRENEY PU-PH, UMR 5557, CNRS, Université
Lyon 1
Examinateurs M. Pierre MARIS Directeur-adjoint, AFSSA, Site de
Fougères, Javene
M. Jean-Bernard REGNOUF-de- PU, UMR 7565, Nancy Université, CNRS
VAINS
Mme Chantal FINANCE PU-PH, UMR 7565, Nancy Université,
CNRS, Directeur de thèse
M. Raphaël E. DUVAL MCF, UMR 7565, Nancy Université,
CNRS, Co-encadrant de thèse
UMR 7565 Nancy – Université, CNRS
Faculté de Pharmacie - 5, rue Albert Lebrun - BP 80403 - 54001 NANCY Cédex








Ecole Doctorale BioSE (Biologie, Santé, Environnement)

Thèse
Présentée et soutenue publiquement pour l'obtention du titre de
DOCTEUR DE L'UNIVERSITE HENRI POINCARE
Mention : « Sciences de la Vie et de la Santé »
Par Chloé GELLER

Développement d'une méthode originale pour l'évaluation de l'activité
virucide des antiseptiques – désinfectants
Détermination du pouvoir antiseptique de calixarènes
sur le coronavirus Humain
13 Juillet 2010
Membres du jury :
Rapporteurs Mme Astrid VABRET PU-PH, EA 2128, Université de Caen
Basse-Normandie
M. Jean FRENEY PU-PH, UMR 5557, CNRS, Université
Lyon 1
Examinateurs M. Pierre MARIS Directeur-adjoint, AFSSA, Site de
Fougères, Javene
M. Jean-Bernard REGNOUF-de- PU, UMR 7565, Nancy Université, CNRS
VAINS
Mme Chantal FINANCE PU-PH, UMR 7565, Nancy Université,
CNRS, Directeur de thèse
M. Raphaël E. DUVAL MCF, UMR 7565, Nancy Université,
CNRS, Co-encadrant de thèse
UMR 7565 Nancy – Université, CNRS
Faculté de Pharmacie - 5, rue Albert Lebrun - BP 80403 - 54001 NANCY Cédex
i

ii










"Dans le champ de l'observation, le hasard ne favorise que les esprits
préparés"
Louis Pasteur, 1854
iii

iv

Remerciements
Je dédicace ce travail à tous ceux qui m'ont accompagnée, famille, amis et collègues, au cours de ces
dernières années et auparavant, à vous tous MERCI !
Et plus particulièrement,

Aux membres du Jury
A M. Le Professeur Freney,
Pour avoir accepté d'être rapporteur de cette étude mais aussi et surtout pour m'avoir transmis la
passion de la Microbiologie (et de son Histoire) et pour m'avoir guidée depuis le tout début de mes
études, je vous assure de ma sincère gratitude.

A Mme Le Professeur Vabret,
Pour me faire l'honneur de relire et juger ce travail, je vous adresse toute ma reconnaissance.

A M. Maris,
Pour avoir accepté d'examiner ce travail et de participer à son évaluation, je vous adresse mes plus
vifs remerciements.

A Mme le Professeur Finance,
Recevez mes plus vifs remerciements pour m'avoir accueillie au sein de votre laboratoire,
Pour la confiance que vous m'avez accordée au cours de ces années ainsi que pour votre soutien et
vos judicieux conseils,
Je tiens à vous adresser toute ma gratitude et mon profond respect.

A M. Raphaël Duval, Maître de Conférences,
Pour ton aide quotidienne, tes conseils, ta patience,
v

Pour avoir bien voulu réfléchir à mes "quelques" questions
Pour tous les bons moments passés, et surtout pour ton amitié,
qui m'ont permis, entre autres, de mener à bien ce projet,
Je te remercie infiniment.

A Mr le Professeur Regnouf-de-Vains,
Pour m'avoir accueillie au sein de l'équipe du GEVSM,
Pour tes conseils physico-chimiques,
Pour avoir permis la synthèse de ces calix[4]arènes prometteurs,
Je t'adresse toute ma reconnaissance.

A mes collègues,
A l'équipe du GEVSM et plus particulièrement,

Mme Francine Kedzierewicz, Maître de Conférences,
Pour vos conseils pratiques (notamment diététiques !) et surtout pour votre soutien moral.

Mme Catherine Colson, notre inestimable secrétaire,
Pour votre gentillesse incroyable, votre disponibilité et nos petites "pauses".

Stéphane Fontanay, jeune doctorant…
je laisserai à nos stagiaires le soin de discourir sur ta diplomatie et ta pédagogie… Je tiens plutôt à te
remercier pour nos discussions métaphysiques et/ou pratiques et pour les innombrables questions
que l'on n'a pas manqué de se poser au cours de ces cinq dernières années, bref pour ton amitié !

Et aussi Barbara, pour nos discussions qui m'ont apporté rire et soutien,

Sans oublier nos chimistes Max et Hugues, sans qui je n'aurais pas pu tester de molécules, ce qui
aurait cruellement manqué à ce travail…
vi

A M. le Professeur Sattar,
Pour m'avoir accueillie au sein de votre équipe, pour m'avoir ouvert les portes (parfois ésotériques)
de l'antisepsie antivirale et m'en avoir transmis les princeps fondamentaux, pour votre gentillesse et
votre altruisme, je vous remercie profondément.
A tous ceux avec qui j'ai travaillé par le passé et au cours de ces dernières années,
Notamment l'équipe du Laboratoire de Virologie du CHU de Nancy,
Pour m'avoir permis d'apprendre chaque jour de nouvelles choses à vos côtés,
Pour tous les bons moments passés, merci !

A mes proches
A ma Famille,
Parce que sans vous, je ne serais sans doute pas ici aujourd'hui,
Pour tout l'amour et le courage que vous m'apportez,
Pour m'avoir transmis les valeurs fondamentales de l'existence,
Je ne pourrai trouver de mots assez forts pour exprimer ma reconnaissance et mon amour, mais je
sais que vous saurez lire entre les lignes car vous me connaissez si bien…

A mes Amis,
Pour m'avoir soutenue et supportée,
Pour m'avoir fait rire et m'avoir appris blagues et calembours que je n'arrive jamais à retenir,
Pour les moments de détente inestimables que l'on a passé ensemble (Merci à D. Coquelet et aux
Wampas…),
Pour avoir été présents, pour l'apport quasi-quotidien de petits moments de bonheur,
En bref, vous m'êtes juste indispensables,
Et de tout mon cœur, je vous en remercie.

A mon Amoureux,
Pour ta patience, ton soutien, pour la motivation et le courage que tu m'apportes chaque jour pour
aller plus loin, Pour m'avoir expliqué l'importance Sol majeur et celle de savoir compter jusqu'à 4…
Pour toutes les raisons qui font que j'ai le sourire le matin à tes côtés,
Et aussi, pour tous les futurs bons moments d'oisiveté que nous allons enfin pouvoir passer !
vii

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