ETUDE FONCTIONNELLE ET STRUCTURALE DE LA PROTEINE INTEGRASE DES RETROVIRUS ET APPLICATION EN TRANSGENESE

Julie Charmetant

Description

Niveau: Supérieur
MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L'EDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre MEMOIRE Présenté Par Julie CHARMETANT Pour l'obtention du diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes ETUDE FONCTIONNELLE ET STRUCTURALE DE LA PROTEINE INTEGRASE DES RETROVIRUS ET APPLICATION EN TRANSGENESE Soutenu le, 16 décembre 2005 devant le jury suivant Dr Thierry DUPRESSOIR Président du jury Dr Geneviève CORDIER Responsable EPHE Pr Gérard VERDIER Examinateur Dr Corinne RONFORT Directeur Scientifique Laboratoire EPHE ‘Interactions cellulaires, rétrovirus et cancer' Dr Geneviève CORDIER UMR 754 INRA-ENVL-UCBL, Lyon Laboratoire ‘Rétrovirus et pathologies comparée' Pr Jean François MORNEX UMR 754 INRA-ENVL-UCBL, Lyon Equipe : ‘Rétrovirus et intégration rétrovirale' Dr Corinne RONFORT ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES EPHE Banque de Monographies SVT 1

• arn


• code des enzymes virales


• protéine


• étape d'intégration


• génome


• murine leukemia


• enzyme dans le processus d'intégration


• transport du complexe de préintégration dans le noyau


• avian sarcoma

Sujets

• Verdier
• Cordier
• Protéine

Informations

• Publié par: chaeh
• Publié le: 01 décembre 2005
• Nombre de lectures: 95
• Langue: Français

Extrait

MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L’EDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE   ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES   Sciences de la Vie et de la Terre   MEMOIRE   Présenté   Par   Julie CHARMETANT   Pour l’obtention du diplôme de l’Ecole Pratique des Hautes Etudes       ETUDE FONCTIONNELLE ET STRUCTURALE DE   LA PROTEINE INTEGRASE DES RETROVIRUS   ET APPLICATION EN TRANSGENESE       Soutenu le, 16 décembre 2005 devant le jury suivant      Dr Thierry DUPRESSOIR Président du jury    Dr Geneviève CORDIER Responsable EPHE               Pr Gérard VERDIER Examinateur    Dr Corinne RONFORT Directeur Scientifique     Laboratoire EPHE ‘Interactions cellulaires, rétrovirus et cancer’ Dr Geneviève CORDIER UMR 754 INRA-ENVL-UCBL, Lyon [e-mail]   Laboratoire ‘Rétrovirus et pathologies comparée’ Pr Jean François MORNEX UMR 754 INRA-ENVL-UCBL, Lyon Equipe : ‘Rétrovirus et intégration rétrovirale’ Dr Corinne RONFORT [e-mail]     ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES

SCIENCES DE LA VIE ET DELA TERRE   ETUDE FONCTIONNELLE ET STRUCTURALE DE LA PROTEINE INTEGRASE DES RETROVIRUS ET APPLICATION EN TRANSGENESE   Julie CHARMETANT   Résumé   Les rétrovirus sont des virus à ARN dont le génome est converti en un ADN double brin. Et insérer dans le génome de la cellule cible. L’étape d’intégration met en jeu deux éléments majeurs : l’intégrase et les séquences situées aux extrémités du génome viral appelés séquencesatt (attachement). La protéine intégrase réalise l’insertion des deux extrémités virales en un même site de l’ADN de la cellule selon un processus appelé intégration concertée. Notre étude vise à une meilleure compréhension du processus d’intégration et une caractérisation plus précise de la protéine intégrase. Les travaux présentés ont été réaliséin vitro sur deux modèles d’intégrase : l’intégrase du virus RAV-1 (Rous Associated Virus type 1) appartenant à la famille des ALSV (Avian Leukemia and Sarcoma Viruses), et l’intégrase d’un lentivirus, le virus HIV-1 (Human ImmunoDeficiency Virus type1). L’analyse de la structure et des fonctions des mutants ponctuels L19A, V79A, S85T et I146A de l’intégrase du virus RAV-1 dans les différents tests (activité catalytique, liaison à l’ADN et oligomérie) à permis de mieux comprendre le rôle de ces résidus et de l’enzyme dans le processus d’intégration (L19A) et dans la multimérisation et la liaison à l’ADN (V79A et S85T) de la protéine. De plus, l’importance de chacune des extrémités virales a été analysée dans ce système. On a ainsi pu mettre en évidence que la présence d’une seule extrémité virale est suffisante pour réaliser un processus d’intégration concertée mais avec une efficacité et une qualité réduite et ceci plus fortement en absence des deux extrémités. En ce qui concerne la protéine intégrase du virus HIV-1, le travail à permis la mise en place d’un système d’étudein vitro celui de l’intégration concertée similaire à développé pour l’intégrase de RAV-1 mais qui doit encore être amélioré. Pour l’utilisation des propriétés intégratives de l’intégrase en transgènése le travail présente des résultats préliminaires qui nécessitent d’être validé en les appliquant dans des transgènéses proprement dites.     Mots clés: Rétrovirus – Intégrase – RAV-1 – HIV-1 – Intégration Concertée.  

Sommaire

  Liste des abréviations Introduction............................................... Préambule....................................................................... Chapitre 1 : Présentation des rétrovirus............................................................... 4 1. Les différents genres de rétrovirus................................................................................................................... 4 2. Structure et génome des rétrovirus.................................................................................................................. 5 3. Le cycle de réplication des