Thèse fusion

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• Langue: Français

Extrait

UNIVERSITE DE LIEGE
FACULTE DE MEDECINE VETERINAIRE
DEPARTEMENT DES MALADIES INFECTIEUSES ET PARASITAIRES
SERVICE DE PARASITOLOGIE ET DE PATHOLOGIE DES MALADIES PARASITAIRES





Contribution à l’étude fonctionnelle des dipeptidyl peptidases et
de la métalloprotéase MEP3 sécrétées par Microsporum canis



Contribution to the functional study of dipeptidyl peptidases and
MEP3 metalloprotease secreted by Microsporum canis






Sandy VERMOUT



THESE PRESENTEE EN VUE DE L’OBTENTION DU GRADE DE
DOCTEUR EN SCIENCES VETERINAIRES, ORIENTATION MEDECINE
VETERINAIRE




ANNEE ACADEMIQUE 2007-2008

Au terme de ce travail, je tiens à remercier toutes les personnes qui, d’une façon ou
d’une autre, m’ont soutenue au cours de ces années de doctorat.

Ma plus vive reconnaissance s’adresse à mon promoteur, le Docteur Bernard Mignon,
qui m’a guidée tout au long de mon travail de thèse. Il s’est toujours montré très disponible
pour résoudre les problèmes, tout en m’accordant une grande confiance et en me permettant
d’être autonome. C’est en grande partie grâce à son dynamisme que j’ai pu mener à bien ce
travail.

Je remercie également le Professeur Bertrand Losson, pour m’avoir permis de
travailler au sein du service de Parasitologie et pour la profonde sympathie dont il a toujours
fait preuve.

Le Docteur Frédéric Brouta et le Docteur Frédéric Descamps ont accompagné mes
premiers pas dans la recherche scientifique et m’ont permis de me familiariser avec le travail
de laboratoire. Ils m’ont écolée avec humour et enthousiasme, et je les en remercie vivement.

Je tiens à exprimer toute ma gratitude envers Aline et Jérémy, tant pour leur amitié que
pour leur collaboration scientifique au sein de notre équipe de recherche, ainsi qu’envers
Françoise, Mireille, Vinciane, Catherine, Yannick, Céline, Maryse, Julien, Chantal, Caroline,
Saadia, Régis, Jessica, et tous ceux qui au cours de ce doctorat ont été non seulement mes
collègues de travail au quotidien, mais aussi des amis.

Merci également à Marie-Eve Dumez, Andy Chevigné, ainsi qu’aux Professeurs Moreno
Galleni, Alain Vanderplasschen et Michel Monod, pour leurs conseils avisés et leur précieuse
aide scientifique.

Ce travail n’aurait pu être réalisé sans le soutien financier du Fonds National de la
Recherche Scientifique (F.N.R.S.), du Fonds pour la Formation à la Recherche dans l’Industrie
et l’Agriculture (F.R.I.A.), et du Patrimoine de l’Université de Liège.

Enfin, si j’ai eu la chance de pouvoir concilier ce travail avec une vie familiale
épanouie, c’est grâce à mon mari, Marc-Olivier, à mes parents, ainsi qu’à Marie-Jeanne et
Pierre. Je les en remercie chaleureusement.









TABLE DES MATIERES

AVANT-PROPOS

ABREVIATIONS

CHAPITRE 1 : INTRODUCTION...........................................................1

1. Introduction générale............................................................................................1
2. Microsporum canis et la dermatophytose à M. canis ..........................................2
2.1. CLASSIFICATION................................................................................................ 2
2.2. BIOLOGIE GENERALE....................................................................................... 4
Ecologie........................................................................................... 4
Morphologie et structure ................................................................. 6
2.3. EPIDEMIOLOGIE............................................................................................... 10
2.4. ASPECTS CLINIQUES....................................................................................... 11
2.5. DIAGNOSTIC...................................................................................................... 12
2.6. TRAITEMENT ET PROPHYLAXIE.................................................................. 14
3. Pathogenèse des dermatophytoses......................................................................15
3.1. LES PROTEASES SECRETEES DES DERMATOPHYTES........................... 16
3.1.1. Classification des protéases...................................................................... 17
Les protéases à sérine ............................................................................... 17
Les métalloprotéases ................................................................................ 18
Les dipeptidyl peptidases ..........................................................................18
3.1.2. Les protéases sécrétées des champignons pathogènes ............................. 20
3.1.3. Les protéases sécrétées par les dermatophytes et par M. canis ................ 21
Caractéristiques moléculaires et enzymatiques........................................ 21
Rôles dans la dégradation des substrats kératinisés ................................. 23
Rôles dans la modulation de la réponse immune ......................................24
Autres rôles............................................................................................... 25
La sulphitolyse ......................................................................................... 25
Expression in vivo .......................................................................................... 26
3.2. ETABLISSEMENT DE L’INFECTION : ADHERENCE, GERMINATION,
INVASION ............................................................................................................ 26
3.3. FACTEURS IMMUNOMODULATEURS ........................................................ 27
4. Les mécanismes de défense de l’hôte vis-à-vis des dermatophytes...................29
4.1. IMMUNITE INNEE............................................................................................ 29
4.2. REACTION INFLAMMATOIRE ...................................................................... 33
4.3. IMMUNITE SPECIFIQUE................................................................................. 34
Réponse cellulaire .................................................................................... 34
Réponse humorale .................................................................................... 36
Immunité spécifique anti-M. canis........................................................... 37
5. La vaccination contre les dermatophytoses........................................................38
5.1. VACCINS COMMERCIAUX ............................................................................ 38
5.2. VACCINS EXPERIMENTAUX ........................................................................ 39

CHAPITRE 2 : OBJECTIF ET PLAN ................................................... 41

1. Objectif général .............................................................................................41
2. Plan................................................................................................................41

CHAPITRE 3 : PRESENTATION SYSTEMATIQUE DES
RECHERCHES....................................................................................... 43

ETUDE 1 : ESSAI DE VACCINATION DU COBAYE CONTRE LA
DERMATOPHYTOSE A M. CANIS AU MOYEN D’UNE METALLOPROTEASE
KERATINOLYTIQUE RECOMBINANTE DE 43,5 kDa (MEP3)

EVALUATION OF IMMUNOGENICITY AND PROTECTIVE EFFICACY OF A
MICROSPORUM CANIS METALLOPROTEASE SUBUNIT VACCINE IN GUINEA PIGS.... 43

ETUDE 2 : ISOLEMENT ET CARACTERISATION DES GENES DE DIPEPTIDYL
PEPTIDASES DE MICROSPORUM CANIS ; ETUDE DE LEUR EXPRESSION IN VIVO ET
IN VITRO. PRODUCTION DES PROTEASES SOUS FORME RECOMBINANTE ET
ETUDE DE LA REPONSE IMMUNE CELLULAIRE CUTANEE ENVERS LA
DIPEPTIDYL PEPTIDASE V DE M. CANIS

SECRETED DIPEPTIDYL PEPTIDASES AS POTENTIAL VIRULENCE FACTORS
FOR MICROSPORUM CANIS................................................................................................... 59

ETUDE 3 : MISE AU POINT D’UNE TECHNIQUE D’INACTIVATION GENIQUE
PAR L’ARN CHEZ MICROSPORUM CANIS. CONSTRUCTION DE SOUCHES
DEFICIENTES AU NIVEAU DE LA DIPEPTIDYL PEPTIDASE IV DE M. CANIS, ET DE
SOUCHES DEFICIENTES AU NIVEAU D’UNE SUBTILASE KERATINOLYTIQUE DE
31,5 kDa (SUB3)

RNA SILENCING IN THE DERMATOPHYTE MICROSPORUM CANIS.................. 82

CHAPITRE 4 : PRESENTATION SYNOPTIQUE DES RESULTATS ..
................................................................................................................. 102

1. ETUDE 1.......................................................................................................................... 102