THÈSE du DOCTEUR VÉTÉRINAIRE sur la congélation des embryons de juments

Emmanuel Legrand

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• Publié par: coeur-de-lion
• Publié le: 06 mai 2014
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• Langue: Français
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Extrait

Ecole Nationale Vétérinaire de Nantes Année 1997 De la congélation des embryons de chevaux THESE pour le diplôme d'état de DOCTEUR VETERINAIRE Présentée et soutenue publiquement devant la Faculté de Médecine de Nantes par EMMANUEL LEGRAND né le 16 juillet 1968 à Aunay s/Odon (14) Email:[e-mail] jury : Président :Monsieur .......  Professeurà la Faculté de Médecine de Nantes Rapporteur :Monsieur BRUYAS  Professeurà l'école Nationale Vétérinaire de Nantes Assesseur :Monsieur ......  Professeurà l'école Nationale Vétérinaire de Nantes

A St Eloi Mon désormais Nouveau Patron Afin qu'il me protège durant ma vie, guide mon travail et... "me fasse découvrir quelle est la petitesse de la terre et la grandeur du ciel, la brièveté du temps et la longueur de l'éternité." (Clément XI)

A Monsieur le Président du jury Qui nous a fait l'honneur d'accepter la présidence de notre jury Que ce travail soit l'expression de mon estime Hommage respectueux A Monsieur Pour avoir accepté (d'être membre de jury) (l'ingrate place d'avocat du diable) Hommage respectueux A Monsieur Bruyas qui a été l'instigateur de ce travail Hommage respectueux

"Ut in omnibus glorificatur Deus" Aux petits frères et aux petites soeurs du Sacré Coeur de St-Parres les Vaudes A Monsieur l'abbé de Nantes Pour leur amitié Pour m'avoir fait découvrir Maurras, que le "Coeur est Roi, L'intelligence est son Ministre" et pour m'avoir fait découvrir l'importance de la Vérité et de l'Amour Aux Soeurs Bénédictines de L'abbaye d'Argentan A Madame. Qui par leurs prières ont influé sur ma réussite au Concours Pour les remercier de leurs babillages et des prières qui leur font suite (et dont nous faisons notre profit) Union de prières

A M Dulac démystifiée denotre classe préparatoire, professeur de physique " " A M Mallet , pédagogue et professeur de chimie de notre classe préparatoire  Pourla passion qu’ils ont eu à nous enseigner Au Dr JY Deschamps , pour son inlassable gentillesse à nous enseigner la logique lors des cliniques  Mêmes’il n’officiait que pour les chiens ! A M le professeur Denis , professeur de zootechnie et féru d’histoire(s) vétérinaire, pour sa gentillesse et le respect qu’il a de ses élèves  Parcequ’il sait qu’un peuple qui oubli son passé est en train de mourir. A M le professeur Le Nihouannen , professeur de chirurgie, pour sa disponibilité et sa stature de mandarin  Uncarabin reconnaissant ! A M le professeur Sevestre , professeur de chirurgie, homme de cheval et praticien, pour son calme, sa grande connaissance des chevaux, sa gentillesse...  ...pour son exemple A M d’Orgeix , professeur d’équitation de saut d’obstacle, parce que je n’ai eu la chance de connaître ni M de Pluvinel, ni M Robichon de la Guérinière, ni M Bauchet. Et parce que j’aimerais autant atteindre l’art équestre que l’art vétérinaire. A tous Serment d'Hippocrate

« Labor improbus omnia vincit » A mes parents Quelle sera verte notre vallée !

A M Morineau A tous les honnêtes gens que j'ai croisé, hommes gentils, si ce n'est gentilhomme A ceux que j’ai rencontrés et à ceux que je rencontrerai A ces Hommes qui se parlent du temps qu’il fait, du temps qu’il a fait, du temps qu’il fera ou du temps qu’il aurait pu faire !... A cesmaît’ de Sei " " A ces rois sur leur terres, ces princes de longues lignées roturières, ces malins qui casquette sur la tête, pied de frêne en main, vous parlent de la Duchée de Normandie, ont un furet à vendre dans la poche gauche et portent des bottes vert olives A ces hommes qui ne fondent pas sous la pluie ! Profond respect.

A ces gens moins honnêtes, dont certains sont vétérinaires, et même quelquefois professeurs A ceux que j’ai rencontrés et à ceux que je rencontrerais. Parce qu’ils m’ont aidé à mûrir ! Et à mon chien... Car "Plus je connais les hommes,... ... et plus j'aime mon chien"

Plan de Thèse 1ére Partie : Enoncé du problème A) Qu'est ce que la congélation ? : Notions de cryobiologie  Oùl’on voit la nécessité d’une cryoprotection. B) Etat des travaux antérieurs Résultats et particularités décelés pour l’espèce équine. 2éme Partie : Résolution du problème A) Expérience 1 : Etude de la toxicité du glycérol B) Expérience 2 : Confirmation de la seconde hypothèse de l’expérience 1 C)Expérience 3 : Où l’on cherche à se débarrasser d’une capsule devenue gênante. ème 3 Partie: Application A) Protocole justifié pour la congélation des embryons équins Où l’on voit poindre les conséquences découlant des découvertes précédentes. B) Expérience 4 : Mise en œuvre du protocole exposé dans cette thèse Où l’on rassurera les derniers sceptiques.

T ABLE DES M ATIERES Introduction ........................................................................................................................... 31 1ére PartieEnoncé du Problème I Qu'est ce que lacongélation ? Notions de cryobiologie "où l'on voit la nécessité d'une cryoprotection !" A) La congélation ou le secret de la longévité................................................................... 36 B) Les trois épreuves à franchir(et réussir) pour l'embryon (ou la cellule) en quête d'immortalité....................................................................................................................... 38 1) L'épreuve de l'absence de cristallisation intracellulaire......................................... 38 2) Le pic de surfusion (épreuve dite du réchauffement de la solution lors du refroidissement)..................................................................................................................... 41 3) La déshydratation extrême d'un organisme vivant et désirant le rester (ou effet de solution)................................................................................................................................. 42 C) Pour éviter ces trois épreuves, l'embryologiste dispose de plusieurs stratégies....... 44 1) Induction de la cristallisation ................................................................................ 44 2) Vitesse de refroidissement .................................................................................... 45 3) Emploi d’un cryoprotecteur................................................................................... 46 Conclusion :................................................................84.......................................................... II Etats des travaux antérieurs "Résultats et particularités décelés pour l'espèce équine" A) 1982 Le temps de la découverte.................................................................................... 52 1) YAMAMOTO, OGURI, TSUTSUMI, et HACHINOHE 1982........................................ 52 B) 1984 - 1989 : Le temps de l'amélioration du matériel et du protocole....................... 54 2) TAKEDA, ELSDEN, et SQUIRES 1984 ......................................................................... 54 3) SLADE, TAKEDA, SQUIRES, et ELSDEN 1984........................................................... 55 3 bis) SLADE, TAKEDA, SQUIRES, ELSDEN, et SEIDEL 1985. .................................... 56 4) CZLONKOWSKA, BOYLE et ALLEN 1985.................................................................. 57 5) WILSON, KRAEMER, POTTER, WELSH 1986............................................................ 58 6) WILSON, CACECI, POTTER, et KRAEMER 1987....................................................... 58 7) GUAY et POITRAS 1989................................................................................................. 59 C) 1991 - 1997 : Le temps de la recherche en vue de l'utilisation commerciale............. 61  C1 La piste de l'impossibilité de congeler de gros embryons, plus âgés et de stade développé................................................................................................................................ 61 8) LAGNEAUX et PALMER 1991 ...................................................................................... 61 9)SKIDMORE, BOYLE, et ALLEN 1991 .......................................................................... 62 10) RIEGER, BRUYAS, LAGNEAUX, BEZARD, PALMER 1991................................... 63  C2 La piste de la toxicité et de l'inefficacité du glycérol, et la recherche d'autres cryoprotecteur......................................................................................................................... 64 11) JULIEN 1991 .................................................................................................................. 64 12) MEIRA, ALVARENGA, PAPA, OBA, LANDIM, ALVARENGA 1993..................... 65 13) DAY, EVANS, VOGELSANG, KRAEMER, et VOELKEL 1993................................ 66 14) PFAFF, SEIDEL, et SQUIRES 1994.............................................................................. 67

15) PELLARIN 1994............................................................................................................. 68 16) POL 1994........................................................................................................................ 69 17) MARTINS FERREIRA 1995 ......................................................................................... 70 18) MARCHAND 1995 ........................................................................................................ 71 19) BOTREL 1997................................................................................................................ 72 2ème partieRésolution I Expérience 1 Étude de la toxicité du glycérol "où l'on découvre le rôle déterminant de la capsule" A) MATERIEL ET METHODES.....................................................................................79 1) Animaux ............................................................................................................... 79 2) Suivis gynécologiques et reproduction.................................................................. 80 3) Récoltes d'embryons.............................................................................................. 81 a) Âge des embryons b) Technique de récolte 4) Traitement expérimental ....................................................................................... 85 a) LOT 1 Préparation pour l'histologie .............................................................. 88 b) LOT 2 c) LOT 3 Mode opératoire pour la congélation ................................................. 91 5) Collecte des données............................................................................................. 92  Lanotation de la capsule.................................................................... 97  Classificationdes noyaux. ................................................................. 98 6) Traitement statistique............................................................................................ 100 B) RESULTATS..................................................................................................................101 1) Bilan des récoltes .................................................................................................. 101 2) Caractéristiques des embryons collectés............................................................... 102 a) Age des embryons. b) Stade des embryons. c) Taille des embryons d) Relation entre la taille de l'embryon et son âge. 3) Résultats histologiques.......................................................................................... 105 a) Perte d'embryons b) Aspects des embryons c) Nombre de cellules estimées. d) Relation entre le nombre de cellules et la taille de l’embryon. e) Relation entre le nombre de cellules etl’âge des embryons. f) Taux de mitoses par embryon. g) Caractéristiques des cellules expulsées. 4) Comparaison entre les lots. ................................................................................... 109 a) Taux de nécrose. b) Répartition des cellules nécrotiques dans le trophoblaste ou dans la masse cellulaire interne.