MINISTERE DE L'ÉDUCATION NATIONALE

Jean - Luc Vayssière - Président

Description

Niveau: Supérieur

• mémoire

MINISTERE DE L'ÉDUCATION NATIONALE ÉCOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre MÉMOIRE Présenté par GAËLLE LE DEZ pour l'obtention du diplôme de l'École Pratique des Hautes Études. RECHERCHE DE GÈNES EXPRIMÉS DE FAÇON DIFFÉRENTIELLE APRÈS TRAITEMENT PAR DE NOUVELLES MOLÉCULES ET IMPLIQUÉS DANS L'ARRÊT DE LA PROLIFÉRATION DES CELLULES CRISTALLINIENNES SRA 01/04. Soutenu le 05/07/2002 à 15 h devant le jury suivant : Monsieur Jean- Luc Vayssière - Président. Madame Sylvie Demignot - Rapporteur. Madame Patricia LASSIAZ - Examinateur. Monsieur Jean Claude JANNY - Examinateur. Laboratoire EPHE : Dr Sylvie DEMIGNOT INSERM U 505 Laboratoire de pharmacologie cellulaire et moléculaire Centre de recherches biomédicales des cordeliers 15 rue de l'école de médecine 75006 Paris e-mail Laboratoire d'accueil : Dr ROUSSAKIS Faculté des Sciences et Techniques ISOMER Laboratoire de Pharmacologie Marine. 2, rue de la Houssinière 44 000 Nantes e. mail : EPHE Banque de Monographies SVT 1

• traitement


• dependent kinase


• arn acide ribonucléique


• placenta humain


• prolifération des cellules épithéliales


• polymerase chain


• cycle cellulaire


• pco opacification de la capsule postérieure

Sujets

• Mémoire
• Institut national de la santé et de la recherche médicale

Informations

• Publié par: profil-nechor-2012
• Nombre de lectures: 52
• Langue: Français

Extrait

MINISTERE DE L’ÉDUCATION NATIONALE

ÉCOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES
Sciences de la Vie et de la Terre

MÉMOIRE
Présenté par
GAËLLE LE DEZ
pour l’obtention du diplôme de l’École Pratique des Hautes Études.

RECHERCHE DE GÈNES EXPRIMÉS DE FAÇON
DIFFÉRENTIELLE APRÈS TRAITEMENT PAR DE
NOUVELLES MOLÉCULES ET IMPLIQUÉS DANS
L’ARRÊT DE LA PROLIFÉRATION DES CELLULES
CRISTALLINIENNES SRA 01/04.


Soutenu le 05/07/2002 à 15 h devant le jury suivant :

Monsieur Jean- Luc Vayssière - Président. Madame Sylvie Demignot - Rapporteur. Patricia LASSIAZ - Examinateur. Monsieur Jean Claude JANNY -

Laboratoire EPHE :
Dr Sylvie DEMIGNOT
INSERM U 505
Laboratoire de pharmacologie cellulaire et moléculaire
Centre de recherches biomédicales des cordeliers
15 rue de l'école de médecine
75006 Paris
e-mail [e-mail]
Laboratoire d’accueil :
Dr ROUSSAKIS
Faculté des Sciences et Techniques
ISOMER
Laboratoire de Pharmacologie Marine.
2, rue de la Houssinière
44 000 Nantes
e. mail : [e-mail]
EPHE Banque de Monographies SVT 1

ÉCOLE PRATIQUE DE HAUTES ÉTUDES - Sciences de la Vie et de la Terre
Département Biologie Cellulaire et Moléculaire - Laboratoire de Pharmacologie Cellulaire et Moléculaire.
RECHERCHE DE GÈNES EXPRIMÉS DE FAÇON DIFFÉRENTIELLE APRÈS
TRAITEMENT PAR DE NOUVELLES MOLÉCULES ET IMPLIQUÉS DANS
L’ARRÊT DE LA PROLIFÉRATION DES CELLULES CRISTALLINIENNES SRA
01/04.

Gaëlle Le Dez
RÉSUMÉ
Le cristallin, lentille naturelle de l’œil, est normalement transparent. Mais, le plus souvent avec l’âge,
il s’opacifie entraînant une diminution de l’acuité visuelle. C’est la cataracte. Le seul traitement
véritablement efficace passe par la chirurgie avec aspiration du contenu du sac cristallinien. Après
cette intervention, dans près de 50% des cas, une nouvelle opacification est observée, elle intéresse la
capsule postérieure, c’est la cataracte secondaire. Celle-ci est due à la prolifération de cellules
épithéliales restées après chirurgie. Le traitement actuel de référence pour la cataracte secondaire est
la dislocation des tissus au laser. Malheureusement, cette seconde intervention entraîne de
nombreuses complications et n’interrompt pas la prolifération des cellules épithéliales cristalliniennes.
Actuellement, seuls certains anticancéreux sont capables d’arrêter cette prolifération cellulaire comme
la daunomycine, la mitomycine C. Mais, ces molécules présentent une forte toxicité et entraînent de
nombreux effets secondaires. Pour développer de nouvelles thérapeutiques plus spécifiques des
cellules cristalliniennes, notre laboratoire s’intéresse à l’activité de nouvelles substances non
cytotoxiques. Nous avons recherché l'effet d’une molécule sur la prolifération de cellules épithéliales
de cristallin humain (Lignée SRA 01/04). Après criblage, nous avons établi son profil d'action
cellulaire qui est exprimé par la CI50, des tests cinétiques et par la cytométrie en flux. Cette molécule
s’est avérée très intéressante car elle a un effet de type cytostatique et induit un blocage des cellules
en phase G1 du cycle cellulaire. Ce travail a aussi permis d’évaluer les conséquences moléculaires de
l’activité de cette molécule. Pour l’analyse des variations génétiques, nous avons utilisé le
« differential display » pour caractériser de nouvelles cibles moléculaires différentiellement exprimées
lors du traitement. Plusieurs messagers ont été sélectionnés. Après séquençage et comparaison aux
banques de données, l’un des fragments s’est révélé être un clone ARNm IMAGE (isolé lors du
découpage du génome humain) de fonction inconnue et l’autre présente des homologies avec deux
protéines ribosomiques S21 et L12. La fonction de ces deux protéines reste encore mal connue, elles
seraient impliquées dans la progression du cycle cellulaire.
Ces nouvelles cibles moléculaires permettent d’envisager des traitements plus spécifiques de la cellule
cristallinienne et le développement d’une thérapie génique.

MOTS CLES : Cristallin, cataracte, capsule postérieure, cycle cellulaire, différenciation terminale
(DT), « differential display ».

EPHE Banque de Monographies SVT 2Table des matières.
Abréviations

1. Le cristallin
1.1. Localisation et fonction
1.1.1. L’œil 1.1.2. Le cristallin
1.2. Structure du cristallin
1.2.1. La capsule 1.2.2. L’épithélium
1.2.3. Le cortex 1.2.4. Le « noyau » cristallinien
1.3. Les fibres cristalliniennes
1.3.1. Structure 1.3.2. « Nutrition »
1.3.3. Transparence
2. La cataracte
2.1. Définition
2.1.1. Histologie 2.1.2. Anatomie
2.1.3. Étiologie
2.2. Traitement chirurgical
3. La cataracte secondaire
3.1. Définition
3.1.1. Histologie
3.1.1.1. Type fibreux 3.1.1.2. Type perle
3.1.2. Étiologie
3.1.2.1. Mécanismes de l’opacification 3.1.2.2. Facteurs influençant la PCO
3.2. Traitement de l’opacification
3.3.Prévention de la PCO
3.3.1. Techniques chirurgicales 3.3.2. Implants intraoculaires (IOL)
3.3.3. Moyens pharmacologiques
3.3.3.1. Antimétabolites 3.3.3.2. Immunotoxines 3.3.3.3. Thérapie génique
4. Prolifération, différenciation et mort cellulaire.
EPHE Banque de Monographies SVT 3 4.1. Le cycle cellulaire.
4.1.1. Déroulement. 4.1.2. Les « acteurs » du cycle cellulaire.
4.2. La différenciation
4.2.1. Définition : circonstance de la différenciation cellulaire. 4.2.2. L’état de différenciation terminale
4.2.3. Les « acteurs » de la différenciation.
4.3. La mort cellulaire programmée.
4.3.1. Comparaison apoptose/nécrose.
4.3.1.1. Aspect de la chromatine
4.3.1.2. Morphologie de l’apoptose
4.3.1.3. Morphologie de la nécrose
4.3.2. Les étapes de l’apoptose.
4.3.2.1. La phase d'initiation ou le signal de mort.
4.3.2.2. La phase de décision.
4.3.2.3. La phase de dégradation.
4.3.3. Régulation de l’apoptose.
5. Facteurs génétiques de la cataracte
5.1. Anomalies chromosomiques
5.2. Cristallines
5.3. Facteurs de transcription
5.4. Facteurs de croissance
5.5. Protéines.
5.5.1. Protéines de membrane.
5.5.2. Les protéines du cytosquelette.
5.5.3. Cellular retinoic acid-binding protein I (CRABPI).
Abréviations.
ADN Acide désoxyribonucléique.
ADNc Acide désoxyribonucléique complémentaire.
AHo acrylique hydrophobe.
ARN Acide ribonucléique.
ARNm ARN messagers
ATP Adénosine TriPhosphate
Bcl-2 « B cell Lymphoma 2 »
BrEt Bromure d’éthidium.
CDK Cyclin Kinase Dependent
EPHE Banque de Monographies SVT 4CI50 Concentration inhibitrice 50%.
CKI Cyclin Dependent Kinase Inhibitor
CO Dioxyde de carbone2
CRABPI « Cellular Retinoic Acid-Binding Protein I »
DD Differential Display
ddNTP Didéoxynucléotide triphosphate.
DMEM Dulbecco’s modified Eagle’s medium.
DNAse Déoxyribonucléase
dNTP Désoxy nucléotide triphosphate.
DO Densité Optique.
DTT Dithiothréitol.
EDTA Ethylenediaminetetra-acetic acid.
FGF Fibroblast Growth Factor
IOL Implant intraoculaire.
IPTG Isopropyl-1-thio-b-D-galactoside.
J / J Aucun jour de traitement / 72 heures de traitement.0 72
LB Luria Bertoni.
LEC cellules épithéliales cristalliniennes.
M Molaire.
mCi