Utilización del antisuero H-Y para sexar embriones bovinos en diferentes estadios del desarrollo embrionario, obtenidos por fertilización in vitro

Juan Carlos Gardón

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• Reproduccion animal

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• Publié le: 01 janvier 2003
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Extrait

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA





ón de antisuero H - Y para sexar embriones bovinos
en diferentes estadios del desarrollo embrionario, obtenidos
ón in vitro .











CÓRDOBA, DICIEMBRE 1999

ÓN UAN CARLOS GARD J
TESIS DOCTORAL
por fertilizaci
Utilizaci
FACULTAD DE VETERINARIA








A mis padres, Juan Carlos y Magdalena Beatriz.AGRADECIMIENTOS S
Agradecimientos















En lo personal, creo que este trabajo representa la concreción de mi labor
que como docente e investigador, he realizado en los últimos dieciocho años. Es
por ello, que deseo expresar mi profundo agradecimiento a todas aquellas
personas que de una u otra forma, contribuyeron en mi formación.

En especial, quiero puntualizar y agradecer muy especialmente a todos
aquellos que han tenido relación directa en la labor desempeñada en el presente
proyecto de tesis doctoral.

Al Prof. Dr. Francisc o Castejón Montijano y al Prof. Dr. Sergio Agüera
Carmona, directores de este trabajo, por su orientación, dedicación y por la
confianza que han depositado en mi.

Al Sr. Decano de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad
Nacional de Lomas de Za mora, Ing. Agr. Marcelo Yasky, por brindarme su
confianza y la oportunidad de realizar los estudios de doctorado.

Agradecimientos
A todas aquellas personas que integran el Departamento de Biología
Animal, de la Facultad de Veterinaria, Universidad de Córdoba por su amis tad,
apoyo y consejos brindados.

A los integrantes del Programa de Biotecnologías Aplicadas en
Reproducción Animal de la Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional
de Lomas de Zamora, por su apoyo y dedicación en las tareas realizadas.

ilia, quien ha apoyado mas que nadie el haber llegado hasta aquí.

A mi famÍNDICE
a Tem
R e r f c
fertilización
2.2.1.- Maduración in itro de ovocitos bovinos.
S
in itro de los
in itro de los
in itro de los
2.2.2.- Fertilización
sp m t ozoid s mótil s y no mótil
z
z
itroin v
2.3.- Desarrollo de cigotos y briones. em
itroin v
l i t m i s
Página1 8 de ovocitos. 2.1.- Consideraciones generales. 5 26 o22 24 33 21 30 19 7 o15 n2.2.- Maduración y18 o de ovocitos. 24 14 29 d20 17 13 o 25 35 271.- Introducción. 6 b19
. e r e y s g c s e
2.3.3.- Condiciones medioambientales para el cultivo
2.3.2.- Criterios de evaluación y cinética del desarrollo embrionario.
oviductales). EC (células O B 2.3.1.1.- Preparación de las células
embriones. y tos o g ci 2.3.1.- Sistemas de cultivo de
27 in vitro
2.2.2.3.- Criterios para determinar ación. la fertiliz
de los ovocitos con las células espermáticas.
2.2.2.2.3.- Condiciones medioambientales para el cocultivo
oides en el cocultivo. 2.2.2.2.2.- Relación ovocitos/espermato
cocultivo. tiempo de y 2.2.2.2.1.- Medios empleados
espermáticas. 2.2.2.2.- Cocultivo de los ovocitos con las células
oides. espermato 2.2.2.1.2.- Capacitación de los
s. e e e a r e e
2.2.2.1.1.- L a vado del semen y separación de
toro. 2.2.2.1.- Preparación del semen de
0 2 in vitro
maduración.
2.2.1.4.6.- Criterios empleados para determinar la
ovocitos. v
2.2.1.4.5.- Tiempo requerido para la maduración
cultivo. 2.2.1.4.4.- Otras condiciones en el
ovocitos. v maduración
2.2.1.4.3.- Condiciones medioambientales para la
cultivo. 2.2.1.4.2.- Suplementación de los medios de
cultivo. 2.2.1.4.1.- Medios de
ovocitos. v 2.2.1.4.- Maduración
1 ovocitos. lección de los e 2.2.1.3.-
ovocitos. 2.2.1.2.- Obtención de los
matadero. 2.2.1.1.- Recuperación de ovarios en
v
6 in vitro
5
. a i á og li b i b n ó i s i v - 2.
1
Índice a Tem
x
x
m i s
s í i m s m
z
s x tí
x
m m s
3.- Material y é
3.1.3.- Cultivo in itro
3.2.- Fertilización
3.3.- Desarrollo
l s t i t m i s
3.3.2.- Cocultivo itroin v
l l l i t l s
h46 d dbriones.Métodos b de presuntos cigotos y2.4.1.1.- o36 do de eo n 49 44 u56 o3.1.- Maduración u a o36 oh b42 o e5744 p o de ovocitos.53 54 47 vo ouo 2.4.- Sep de ovocitos.41 on Página n50 n o 39 n pdb2.4.1.2.- no 5855 52 3.4.- Cultivo in vitro de ebriones con antisuero H-Y.37 Métodos
9 5 m
. e a c s a cé s a
de presuntos cig tos yo embriones con
. e r e y s g c s e r s n c
3.3.1.- Preparación de células oviductales para cocultivar
7 5 briones. m in vitro
espermáticas. 3.2.2.- Cocultivo de los ovocitos con las células
toro. 3.2.1.- Preparación del semen de
5 5 in vitro
de ovocitos. v
ovocitos. clasificación de y 3.1.2.- Obtención
matadero. 3.1.1.- Recuperación de ovarios en
2 5 in vitro
2 5 todo. m
. a r e y s ac
2.4.1.2.3.- Diferencia de desarrollo entre embriones
embriones. do de a se para el
2.4.1.2.2.2.- Utilización de anticuerpos H-Y
H-Y. 2.4.1.2.2.1.- Producción de anticuerpos
. ) Y - H o e g a ( o e l e
2.4.1.2.2.- I entificación de antígd enos específicos
X. adas al cromosoma g li imas En 2.4.1.2.1.-
invasivos.
2.4.1.1.4.- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
. Y a r c l e a r a s ca f ec e
2.4.1.1.3.- Hibridación con sondas de ADN
nético. e g cito 2.4.1.1.2.- Análisis
. e r e e
2.4.1.1.1.- Toma de muestras para el sex a do
invasivos.
embriones. do de a se 2.4.1.- Métodos para el
5 3 m
Índice a Tem
x
3.6.- Material
z in itro
in itro
3.7.1.3.- Cultivo in itro
l de ia nc use o ai a cn se e n prdos eltivau s cionem bre
z
R e t
fertilización
4.2.- Desarrollo
x
D c
fertilización
5.2.- Desarrollo
x


y

a81 73 briones.68 63 5.3.- Se Se 3.5.- Determ re62 9.- Bibliografía. 5.1.- Maduración y 65 e 70 68 68 73 8.- Su P&