Etude comparative de différentes méthodes d'évaluation de la sensibilité aux antibiotiques des bactéries

A. Kamagate, D. Kone, N. T. Coulibaly, E. Brou, M. Sixou

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Extrait

ETUDE COMPARATIVE DE DIFFERENTES METHODES
D'EVALUATION DE LA SENSIBILITE AUX ANTIBIOTIQUES
DES BACTERIES ANAEROBIES STRICTES DE
LA FLORE SOUS-GINGIVALE
A. KAMAGATE *, D. KONE *, N. T. COULIBALY *, E. BROU *, M. SIXOU
I - INTRODUCTION vivo". Son calcul repose sur des techniques standardi-
sées selon des normes internationales qui facilitent les
L'antibiothérapie est indiquée dans le traitement d'une comparaisons des profils de sensibilité des espèces
parodontite quand celle-ci ne répond que peu ou pas à bactériennes. Le "National Commitee for Clinical Labo-
la thérapeutique mécanique habituelle. Le choix d'un ratory Standards" (NCCLS), en absence de consensus
antibiotique destiné au traitement d'une parodontite est sur les anaérobies, ne retient qu'une seule concentra-
délicat, en raison de la complexité de la flore en cause. tion critique par antibiotique. Il s'agit généralement de
En l'absence d'une analyse bactériologique de la flore la concentration critique la plus élevée retenue pour
pathogène, le clinicien prescrira un traitement antibio- les bactéries anaérobies facultatives. Toute souche dont
tique de façon empirique. La recherche de bactéries la C.M.I. est supérieur à cette concentration est consi-
pathogènes spécifiques responsables des destructions dérée comme résistante. Inversement, toute souche
parodontales et de la perte d'ancrage des dents est dont la C.M.I. est inférieur ou égale à cette concentra-
particulièrement difficile. La plupart des bactéries tion est considérée comme sensible.
directement impliquées dans ces pathologies sont diffi-
ciles à cultiver et à maintenir en vie lors des repiquages Les trois principales méthodes de détermination de la
successifs. Les principaux micro-organismes incriminés sensibilité aux antibiotiques sont :
dans les pathologie parodontales sont des bacilles à 1. L'antibiogramme par technique de diffusion en
Gram négatif anaérobies strictes et/ou capnophiles. milieu solide
Cette flore bactérienne associée aux parodontites, peut 2. La méthode de dilution en milieu liquide,
fortement varier d'un patient à l'autre et d'un site à 3. La galerie ATB ANA (bioMérieux).
l'autre chez un même sujet. Campylobacter rectus est L'objectif de cette étude est de comparer l'efficacité de
une bactérie microaérophile à Gram négatif qui est chacune de ces méthodes sur des bactéries anaérobies
isolé à partir de la flore de plusieurs formes de paro- strictes isolées dans la flore sousgingivale de patients
dontites de l'adulte. Porphyromonas gingivalis, Prevo- atteints de parodontites évolutives (parodontite à
tella intermedia, Fusobacterium nucleatum et Pepto- progression rapide, parodontite réfractaire, phase
streptococcus micros sont des bactéries anaérobies d'activité de parodontite de l'adulte).
strictes impliquées dans les formes évolutives de
parodontite. II - MATERIELS ET METHODE
L'analyse bactériologique et l'évaluation de la sensi- II - 1 - Les antibiotiques testés :
bilité aux différentes molécules d'antibiotique consti- - ampicilline (bêta-lactamine)
tuent donc une étape importante dans le choix d'un - amoxicilline (bêta-lactamine)
antibiotique. - tétracycline (tétracycline)
- érythromycine (macrolide)
La concentration minimale inhibitrice (C.M.I.) se définit - métronidazole (5-nitro-imidazole)
comme étant la plus faible concentration d'un antibio- D'autres antibiotiques ont été testés. Mais nous avons
tique inhibant totalement la prolifération d'un nombre choisi de comparer les effets de cinq molécules anti-
défini de bactéries. La détermination de la C.M.I. per- biotiques, représentatifs des prescriptions habituelles
met d'apprécier l'efficacité des agents antibactériens "in en odontologie.
II - 2 - Les bactéries étudiées sont :Département de Parodontologie, Unité de Formation et de Recherche
Porphyromonas gingivalis (P. g.) Prevotella intermediaen Odonto-Stomatologie de l'Université d'Abidjan, Côte d’Ivoire.Odonto-Stomatologie Tropicale 2001 - N°95
Etude comparative…
(R.i.) Fusobacterium nucleatum (F. n.) Campylobacter ques, on ensemence uniformément la surface de la
rectus (C. r. ) Peptostreptococcus micros (P. m.) gélose avec le micro-organisme à étudier. L'inoculum
doit être dense (opacité équivalente à 0,5 sur l'échelle
Les bactéries utilisées sont des souches cliniques iso- de Mac Farland ). Après une incubation de 24 à 72
lées chez des patients atteints de parodontite évolutive heures en anaérobiose à 37°, les disques apparaissent
au Laboratoire des Maladies infectieuses Bucco-dentai- entourés d'une zone d'inhibition dont le diamètre per-
res (Faculté de Chirurgie Dentaire - Toulouse). met de mesurer la C.M.I. (la culture s'arrête dans la
gélose, où il existe une concentration égale à la C.M.I.).
Le milieu de transport utilisé était le VGMA III (Möller, Le système disque-milieu de culture est étalonné au
1966). C'est un milieu semi-gélose qui préserve les préalable avec un grand nombre de souches de
m i c r o - o rganismes prélevés de l'oxygène de l'air. références de C.M.I. connues, déterminées par les
De plus, la présence d'éléments bactériostatiques dans méthodes de références, on trace ainsi la droite de
sa composition (acétate de phenyl mercure) permet de régression ou "courbe de concordance", donnant la
maintenir le ratio de chacune des populations bacté- correspondance entre les C.M.I. et les diamètres des
riennes dans le prélèvement. zones d'inhibition pour les disques et le milieu de
culture considérés. Après, on mesure les diamètres des
Après une série de dilution dans du bouillon Wilkins- zones d'inhition, puis on Les reporte sur le graphique
Chagren (W.C.), les prélèvements sont ensemencés sur pour déduire les C.M.I. Les résultats sont exprimés en
des milieux sélectifs et non sélectifs enrichis et placés souche sensible, intermédiaire ou résistante. Cette
dans des conditions d'anaérobiose à 37°c pendant méthode est la plus simple, la plus rapide et la plus
5 à 10 jours. utilisée. Le coût est faible. Mais elle est critiquée par
certain auteur en raison du manque de corrélation par-
Les tests d'identification des souches cliniques sont
fois entre les diamètres d'inhibition et les C.M.I. déter-
basés sur les critères du Bergey's Manuel (1994) :
minées par les méthodes de références.
- morphologie des colonies
- fluorescence à l'exposition au rayon UV long
La méthode de dilution en milieu liquide
- coloration de Gram complétée par la méthode au
Nous avons appliqué la méthode de macrodilution quiKOH
consiste à distribuer 5 ml de bouillon de culture régé-- mobilité
néré (Wilkins-Chagren) dans une série d'une dizaine de- tests biochimiques et enzymatiques
tube à hémolyse. Ensuite on distribue dans chaque. catalase
tube, à l'exception du premier qui servira de témoin. oxydase
positif, des quantités croissantes de l'antibiotique étu-. MUG
dié, réalisant ainsi une gamme de concentration en- galerie d'identification biochimique API 20A
progression géométrique de raison 2. La concentration- galerie d'identification enzymatique Rapid 32
finale en antibiotique dans chaque tube est calculée- métabolisme respiratoire (aéro-anaérobie, anaérobie
pour 1 ml. Les antibiotiques utilisés dans cette méthodestricte,…)
sont d'abord préparés en solution mères, puis congelés.
La suspension bactérienne est préparée de façon àLa résistance aux antibiotiques est testée à partir de
6obtenir un inoculum de 10 UFC/ml (UFC = unités for-cultures pures.
mant colonies). Après une incubation de 24 à 48 heu-
res à 37°, on observe les tubes visuellement. Dans unII - 3 - Méthodologies
certain nombre de tubes, la culture est positive. Un
trouble nettement visible est apparu dans ces tubes. AL'antibiogramme par technique de diffusion en gélose
partir d'une certaine concentration, il n'y a plus deElle consiste à déposer à la surface d'une gélose
culture visible. Le premier tube où il n'y a plus deWilkins-Chagren des disques de papier buvard impré-
gnés des différents antibiotiques testés. Chaque an