a partir de aguas residuales

Gabriel

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• Aislamiento
• Bacteriofagos
• E. coli

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• Publié le: 01 janvier 2012
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Extrait

R2852ev.MVZ Córdoba 17(1):2852-2860, 2012.REVISTA MVZ CÓRDOBA • Volumen 17(1), Enero - Abril 2012
ORIGINAL
Técnica para aislamiento de bacteriófagos específcos
para E.coli DH5α a partir de aguas residuales
Bacteriophages specifc for DH5α strain of E. Coli from wastewater
isolation techniques
1 1 1Gabriel Gaviria A, Biól, María González de S, M.Sc, Jhon Castaño O, * Ph.D.
1Universidad del Quindío. Facultad Ciencias de la Salud. Centro de Investigaciones Biomédicas. Gru-
po de Inmunología Molecular (GYMOL). Carrera 15 Calle 12 Norte, Teléfono: [phone]. Arme-
nia, Colombia. *Correspondencia: [e-mail]
Recibido: Septiembre de 2010; Aceptado: Junio de 2011.
RESUMEN
Objetivo. Establecer una técnica para el aislamiento de bacteriófagos a partir de aguas residuales
específcos para E. coli DH5α. Materiales y métodos. Se tomó como base el método 1601 de la
Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos de América y un método de obtención de
enterovirus a partir de aguas residuales. En el desarrollo del protocolo se realizaron múltiples pruebas
utilizando como control positivo el bacteriófago T4 y los aislamientos de bacteriófagos obtenidos a
partir de aguas residuales. Resultados. Se observó la formación de unidades formadoras de placa
(UFP), se obtuvó la titulación de los bacteriófagos presentes en cada uno de los cultivos de E.coli
DH5α, se determinaron las relaciones que existen entre la cuantifcación de la formación de unidades
formadoras de placa (UFP) del tratamiento control y el tratamiento experimental y las respectivas
características de las en cada uno de los experimentos realizados. Conclusiones. Se logró
establecer un protocolo microbiológico para el aislamiento de bacteriófagos específcos para E. coli
DH5α.
Palabras clave: Aislamiento, bacteriófagos, E. coli (Fuente: CAB).
ABSTRACT
Objetive. To develop an isolation technique for DH5α E. coli specifc bacteriophages in wastewater.
Materials and methods. The 1601 method of the Environmental Protection Agency of the United
States of America and an wastewater enterovirus obtaining method were used as a reference. During
the development of the protocol, multiple tests were performed using the T4 bacteriophage as
positive control and the bacteriophage isolates obtained from wastewater. Results. Plaque-forming
units (PFU) were observed; tittering of bacteriophages present in each of the DH5α E. coli cultures
was obtained; the relationships between the quantifcation of PFU in the control and experimental
groups, and their corresponding PFU characteristics were determined for each of the experiments.
Conclusions. It was possible to establish a microbiological protocol for the isolation of bacteriophages
specifc for DH5α E. coli.
Key words: Bacteriophage, isolation, E. coli (Source: CAB).
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INTRODUCCIÓN lipídica que se deriva de la célula hospedera.
La conformación y organización proteica
de sus cápsides les confere la habilidad de Los bacteriófagos son virus que fueron
permanecer viables por largos períodos de descubiertos de forma independiente por los
tiempo en el ambiente en condiciones adversas, microbiólogos Frederick W. Twort (1) en 1915 y
Félix d’Hérelle (2) en 1917. Siendo esta la última como la exposición a ADN-asas, variaciones de
pH y temperatura (6). Los bacteriófagos han clase principal de virus en ser descubierta; este
sido tomados como modelo para el estudio de tipo de virus constituye un sistema simple y de
la genética bacteriana y los mecanismos de gran abundancia en la naturaleza. En esencia,
control de la expresión génica, debido a que los bacteriófagos se encuentran de manera
ubicua en el ambiente y en el lugar en que se los hospederos bacterianos son fácilmente
cultivables y manejables en el laboratorio (7).encuentre su célula huésped (3).

Los bacteriófagos, entre otras utilidades dentro Los bacteriófagos son virus que infectan y
de las ya conocidas, sirven como herramienta se multiplican en la bacteria, llevando a la
destrucción la célula hospedera con la liberación para la modifcación genómica bacteriana y para
la construcción de vacunas a nivel terapéutico. de que re-infectan otras bacterias.
Además, en terapias alternativas, para el trata-Los bacteriófagos fueron descubiertos en las
miento de infecciones producidas por bacterias; primeras décadas del siglo XX, pero su uso
dicha utilidad es sustentada por investigadores y clínico no se extendió en países occidentales
sino hasta la década del 80, debido a diferentes científcos a través de estudios rigurosos, donde
se han aislado bacteriófagos y posterior a esto se razones. A pesar de que se realizaron múltiples
han caracterizado de forma específca, siendo uti-esfuerzos para generalizar su uso como agentes
lizados respectivamente de acuerdo con el interés terapéuticos en las décadas de 1920 y 1930
investigativo. Algunos de estos trabajos han sido fueron cayendo en el olvido por la ciencia
de la época debido al descubrimiento de los realizados por varios autores (7-17). Debido a la
adaptación de patógenos multirresistentes a los antibióticos.
antibióticos se están retomando los estudios sobre
fagoterapia (7,18).Un papel muy importante jugó la Asociación
Médica Americana, la cual recomendó que se
debía dejar todo tipo de tratamiento a través de Se consideró importante el uso de aguas
residuales para este estudio debido a su bacteriófagos. Este rechazo se dio por razones
composición o naturaleza. Las aguas servidas como el desconocimiento de la biología de los
consisten de dos componentes: un efuente bacteriófagos para ese entonces, el diseño
líquido y un constituyente sólido en el que erróneo de los protocolos experimentales y la
falta de controles adecuados en los diferentes se asocian diferentes tipos de materiales
particulados como sedimentos de residuos experimentos realizados (2). Además, con el
biológicos, lodo y otras sustancias. A este tipo empleo generalizado de los antibióticos para
de material se asocian microorganismos como combatir infecciones, durante casi cuarenta
bacterias, hongos y virus, los cuales tienen años se abandonó en occidente cualquier tipo
de investigación sobre el uso de bacteriófagos como sustrato los contenidos de este tipo de
aguas (19).como agentes terapéuticos, aunque se usaron
de forma extensa para análisis genéticos y para
Debido a que, por el grado de contaminación que establecer las bases de la biología molecular.
presentan, en las aguas residuales se encuentra Posteriormente, para la década de 1980, de
nuevo se empezaron a usar los bacteriófagos gran cantidad de bacterias de diferentes especies
y se espera encontrar también los bacteriófagos en animales de experimentación en los países
que infectan estas mismas bacterias, ya que occidentales. En este sentido, los trabajos de
estos últimos constituyen un control biológico Smith y Huggins (4) en la década del 80 se
para las colonias bacterianas. La presencia de pueden considerar como un punto de infexión,
al retomar de nuevo la importancia de los bacteriófagos en aguas residuales se explica,
además, por el hecho de que en el agua dulce, bacteriófagos en la terapia animal, ya que
que constituye su base primaria, la abundancia de estos se habían obtenido resultados muy
de bacteriófagos es de 10 a 20 veces mayor que esperanzadores.
la de la cédula hospedera (20). Aunque en la
Los bacteriófagos se componen de un solo tipo actualidad en la región de estudio no se cuenta
con gran experiencia en las metodologías de de ácido nucleico (ARN o ADN) encapsulado por
aislamiento y no se han reportado obtenciones una cubierta proteica que exhibe los elementos
de bacteriófagos a partir de aguas negras, por lo estructurales necesarios para una infección
anterior se propone como objetivo estandarizar específca (5). Algunos presentan envoltura 2854 REVISTA MVZ CÓRDOBA • Volumen 17(1), Enero - Abril 2012
una técnica para el aislamiento de bacteriófagos el precipitado se pipeteó varias veces y,
específcos para E. coli DH5α a partir de aguas fnalmente, se obtuvieron aproximadamente
residuales. 6 mL de la muestra, la cual se almacenó en
tubos de vidrio y se le agregó medio volumen
de cloroformo (50% de la muestra y 50% de
cloroformo).MATERIALES Y METODOS
Esta solución se homogenizó utilizando un Vórtex Obtención de bacteriófagos. Para alcanzar los
a una velocidad media durante 3 minutos y se objetivos propuestos se desarrolló la siguiente
centrifugó a 1050 X g a 4ºC dur