VARIABILIDAD DE CÉLULAS SANGUÍNEAS MEDIANTE LECTINAS FLUORESCENTES EN LA RAZA CANINA EUSKAL ARTZAIN TXACURRA (VARIABILITY OF BLOOD CELLS BY FLUORESCENT LECTINS IN THE CANINE BREED EUSKAL ARTZAIN TXACURRA)

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Resumen
Se han estudiado las diferencias existentes en los residuos glicoproteicos de las células de la línea roja y blanca de las dos variedades de la raza canina Euskal Artzain Txakurra, Iletsua y Gorbeiakoa, mediante el empleo de nueve lectinas fluorescentes: Helix pomatia, Phaseolus vulgare, Triticum vulgare, Glicine maxima, Pisum sativum, Phytolacca americana, Canavalia ensiformis, Arachis hypogaea, y Erythrina cristagalli. No se encontraron diferencias significativas en la membrana plasmática de las células de la línea roja, mientras que para las lectinas Glycine maxima y Phytolacca americana reflejan diferencias significativas (p<0,01) en la unión con los restos glucídicos de las células de la línea blanca entre las dos poblaciones analizadas.
Abstract
Blood cells, erythrocytes and lymphocytes, from two different groups of the canine breed Euskal Artzain txakurra were analyzed by nine FITC-labeled lectins: Helix pomatia, Phaseolus vulgare, Triticum vulgare, Glicine maxima, Pisum sativum, Phytolacca americana, Canavalia ensiformis, Arachis hypogaea, and Erythrina cristagalli. The binding of lectins to cell membrane was estimated by observation with an epifluorescence microscope. There were no differences in the binding activity of the nine lectins with erythrocytes between the two populations, while the fluorescence level showed by limphocytes for Glycine maxima and Phytolacca americana was significantly different (p<0,01) between Iletsua and Gorbeiakoa populations.

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Publié le 01 janvier 1998
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COMUNICACIÓN
VARIABILIDAD DE CÉLULAS SANGUÍNEAS MEDIANTE
LECTINAS FLUORESCENTES EN LA RAZA CANINA EUSKAL
ARTZAIN TXACURRA
VARIABILITY OF BLOOD CELLS BY FLUORESCENT LECTINS IN THE CANINE BREED
EUSKAL ARTZAIN TXACURRA
1 2 2Gómez, M., E. González Txabarri y W.J. Ávila
1Servicio de Ganadería. Diputación Foral de Bizkaia. Avda. Lehendakari Agirre nº 9 2º. 48014 Bilbao.
España.
2Departamento Producción Animal. Facultad de Veterinaria U.C. Madrid. Avda. Puerta de Hierro, s/n
28040. Madrid. España.
PALABRAS CLAVE ADICIONALES ADDITIONAL KEYWORDS
Lectinas. Razas caninas. Glicoproteínas. Lectines. Canine breeds. Glycoproteins.
RESUMEN
Se han estudiado las diferencias existentes Euskal Artzain txakurra were analyzed by nine
en los residuos glicoproteicos de las células de la FITC labeled lectins: Helix pomatia, Phaseolus
línea roja y blanca de las dos variedades de la vulgare, Triticum vulgare, Glicine maxima, Pisum
raza canina Euskal Artzain Txakurra, Iletsua y sativum, Phytolacca americana, Canavalia
Gorbeiakoa, mediante el empleo de nueve lecti ensiformis, Arachis hypogaea, and Erythrina
nas fluorescentes: Helix pomatia, Phaseolus cristagalli. The binding of lectins to cell membrane
vulgare, Triticum vulgare, Glicine maxima, Pisum was estimated by observation with an epifluores
sativum, Phytolacca americana, Canavalia cence microscope. There were no differences in
ensiformis, Arachis hypogaea, y Erythrina the binding activity of the nine lectins with
cristagalli. No se encontraron diferencias signifi erythrocytes between the two populations, while
cativas en la membrana plasmática de las célu the fluorescence level showed by limphocytes for
las de la línea roja, mientras que para las lectinasGlycine maxima and Phytolacca americana was
Glycine maxima y Phytolacca americana reflejan significantly different (p<0,01) between Iletsua
diferencias significativas (p<0,01) en la unión and Gorbeiakoa populations.
con los restos glucídicos de las células de la línea
blanca entre las dos poblaciones analizadas.
INTRODUCCIÓN
SUMMARY Aunque hay unas 400 razas caninas
reconocidas oficialmente en el mun
Blood cells, erythrocytes and lymphocytes, do, año tras año se va incrementando
from two different groups of the canine breed el estudio de agrupaciones raciales
Arch. Zootec. 47: 439 443. 1998.GÓMEZ, GONZÁLEZ TXABARRI Y ÁVILA
locales, con el fin de evitar la desapa En este trabajo se ha pretendido com
rición de una parte de nuestro patrimo probar si se pueden diferenciar las
nio genético para mantener la biodi variedades existentes del EAT, Iletsua
versidad. En la clasificación y dife y Gorbeiakoa mediante el empleo de
renciación de razas o subrazas se han lectinas fluorescentes.
utilizado tradicionalmente diversos
métodos, básicamente estudios zoo
MATERIAL Y MÉTODOSmétricos y más recientemente técnicas
más modernas (ADN, etc). El empleo
A partir de una población censadade técnicas de aplicación frecuente en
de 526 perros de raza EAT en la Co otros campos puede ayudarnos en el
munidad Autónoma Vasca (CAV), to estudio y diferenciación de las razas
dos con edad superior a 15 meses, secaninas. Por ejemplo, cada día se está
muestrearon 110 animales, 55 de laconcediendo mayor importancia a los
variedad Iletsua y 55 de la variedadresiduos glicoproteicos y glicopro
Gorbeiakoa. Se obtuvieron muestrasteínas constituyentes de la membrana
de sangre de cada individuo, que seplasmática de los organismos vivos
conservaron en tubos con EDTA (áci (Drikamer y Carver, 1992), pudiendo
do etileno diaminotetracético) y con detectarse la presencia de un glúcido
gelados a 30ºC hasta su procesado.determinado en la membrana plasmá
Se dispuso de una batería de 9tica de la célula mediante la especifi
lectinas marcadas con isotiocianato decidad de unión de las lectinas con ellos
fluoresceína (FITC) (Ingelheim Diag (Slifkin y Doyle, 1990).
nostica y Tecnología, S.A. Barcelona,Así, las subpoblaciones de leucoci
1993), cuya especificidad se relacionatos humanos pueden diferenciarse me
en la tabla I . Todas ellas se emplearondiante el empleo de lectinas fluores
a una concentración de 100 g/ml.centes (Lee et al., 1987) y lectinas
Cada muestra de sangre se diluyó al 70marcadas con oro coloidal (Eguchi et
p.100 en suero fisiológico, y se prepa al., 1989; Nakajima et al., 1988). Tam
raron 9 alícuotas de 90 l de cadabién se han empleado para tipificar
muestra de sangre para combinarlaseritrocitos (Issitt, 1985; Bird, 1977).
con 10 l de cada una de las lectinas.Se han utilizado lectinas para el estu
Una vez selladas, las preparaciones sedio de las diferentes células sanguí
incubaron en cámara oscura a tempe neas, por ejemplo, en la caracteriza
ratura ambiente durante 30 minutos yción de linfocitos sanguíneos en la
se observaron en un fotomicroscopioespecie canina (Shifrine et al., 1980;
Zeiss 11 con filtro FITC (filtro 48770Krakowka y Ringler, 1986) y también
para 450 490 mm) para detectar laen la bovina (Johansson y Morein,
presencia de fluorescencia en los re 1981).
ceptores glucídicos de la membranaEl Euskal Artzain Txakurra o perro
tanto de eritrocitos como de linfocitos.de pastor vasco, con sus dos varieda
des Iletsua y Gorbeiakoa ha sido re Los resultados se trataron mediante
2cientemente reconocido como raza por una con el paquete estadístico Sta
la Real Sociedad Canina (Enero, 1996). tistical Graphic System (STSC, 1986).
Archivos de zootecnia vol. 47, núm. 178 179, p. 440.
mcmmVARIABILIDAD EN LA RAZA CANINA EUSKAL ARTZAIN TXACURRA
poblaciones analizadas respecto a los
Tabla I. Datos referentes a las lectinas
receptores glucídicos afines a las lec
utilizadas. (Data concerning lectins used).
tinas estudiadas (tabla II). La ausen
cia de fluorescencia en los eritrocitosLectinas Abreviatura Especificidad
cuando se añadían las lectinas deFelix pomatia HPA Gal n Ac,
Canavalia eusiformis (Con A), ArachisGle N Ac, Gal
Phaseolus vulgare PHA Complex hypogaea (PNA) y Erythrina crista
Triticum vulgare WGA Gic N Ac galli (ECA) refleja en principio que
Glicine maxima SBA Gal N Ac, Gal estas células carecen de restos
Pisum sativum PEA Man glucídicos correspondientes a ellas.
Phytolacca americana PWN Gic N Ac La mayoría de las muestras anali
Canavalia ensiformis Con A Man, Glc
zadas en ambas variedades presenta
Arachis hypogaea PNA Gal, Gal NH
ron fluorescencia frente a las lectinas
Erythrina cristagalli ECA Gal, Gal N Ac
de Phaseolus vulgaris (PHA), Pisum
sativum (PEA), Phytolacca america Las especificidades no reflejan la contribución de
na (PWN), y en menor grado, frente alos penúltimos residuos o péptidos (Slifkin y
Doyle, 1990). Gal= Galactosa , Glc= Glucosa , Triticum vulgaris (WGA), sin que se
Man= Manosa . Gal N Ac= N acetilgalactosamina; encontrasen diferencias estadística
Glc N Ac= N acetilglucosamina mente significativas (p>0,05), mien
tras que se unieron en un bajo porcen
taje a Glycine maxima (SBA) y Helix
pomatia WA). Sin embargo, el númeroRESULTADOS Y DISCUSIÓN
de células que presentaron fluorescen
Los resultados obtenidos para las cia no fue igual para todas las lectinas,
células de la serie roja reflejan una sino que oscilaron desde el 100 p.100
relativa homogeneidad entre ambas de las mismas (PHA) hasta el 23,6
Tabla II. Respuesta de células de la serie roja y blanca de EAT a las lectinas, expresado en
porcentaje. (Response of EA T erithrocytes and while blood cells to FITC labeled lectins).
Eritrocitos Eritrocitos significación S. blanca S. blanca significación
Iletsua Gorbeiakoa Iletsua Gorbeiakoa
HPA 34,5 29,1 n.s. 65,5 70,9 n.s.
PHA 100 100 n.s. 0 0 n.s.
WGA 67,3 69,1 n.s. 16,4 12,7 n.s.
SBA 23,6 32,7 n.s. 34,5 12,7 **
PEA 83,6 83,6 n.s. 16,4 0 -
PWN 72,7 85,5 n.s. 27,3 0 **
Con A 0 0 - 63,6 52,7 n.s.
PNA 0 0 - 18,2 21,8 n.s.
ECA 0 0 - 0 0 -
n.s.: no significativo, ** p<0,01.
Archivos de zootecnia vol. 47, núm. 178 179, p. 441.GÓMEZ, GONZÁLEZ TXABARRI Y ÁVILA
p.100 (SBA). Las diferentes respues lectina SBA, lo que diferenciaría a
tas de los eritrocitos frente a algunas estas poblaciones es la frecuencia de
lectinas podrían atribuirse en princi presentación de los residuos N acetil
pio a la existencia de distintos grupos galactosamina y/o galactosa, que es
sanguíneos, pero en el caso de la espe mayor en el Iletsua. Sin embargo, los
cie canina no se ha encontrado corres bajos porcentajes de fluorescencia
pondencia entre los grupos sanguíneos detectados en ambas poblaciones para
caninos y la respuesta a la lectinas estas dos lectinas recomiendan repetir
(Andrews et al., 1992 a y b). En defi los análisis sobre una muestra de ma
nitiva, ninguna de ellas nos permite yor tamaño.
detectar de forma concluyente dife Ninguna de las dos variedades re
rencias en la membrana plasmática de acciona con las lectinas Erythrina
las células de la serie roja entre las dos cristagalli (ECA) y Phaseolus vulgaris
variedades del EAT. (PHA). El resto de las lectinas Helix
En el caso de las células de la líneapomatia (UPA), Triticum vulgaris
blanca, los resultados son más alenta (WGA), Canavalia ensiformis (Con
dores, ya que hemos encontrado dos A) y Arachis hypogaea (PNA), se unie
lectinas, Glycine maxima (SBA) y ron a receptores glucídicos de la mem
Phytolacca americana (PWN), que branas plasmáticas de las células de la
presentan unos niveles de fluorescen serie blanca, pero sin presentar dife
cia significativamente (p<0,01) dife rencias estadísticamente significativas
rentes entre las dos poblaciones cani (p>0,05) entre ambas poblaciones. La
nas sometidas a estudio. Así, SBA se unión de la lectina Con A a los
une al 35 p.100 de los linfocitos en lalinfocitos T caninos ya ha sido refleja
agrupación Lanas, frente al 13 p.100 da por otros autores (Krakowka y
de la variedad Gorbeiakoa. Para la Ringler, 1986).
lectina PWN ninguna de las células de Aunque las diferencias detectadas
la serie blanca de la primera agrupa entre ambas poblaciones caninas no
ción presentó fluorescencia frente a sean totalmente concluyentes, sí pare
esta lectina, mientras que el 27 p.100 cen existir pequeñas diferencias en la
de las células de Iletsua se unieron a constitución de la membrana plasmá
ella. tica de los linfocitos, y que es posible
Este hecho parece sugerir que exis que sea extensible a otros tipos celula
ten diferentes frecuencias en los res res. Aunque la variabilidad morfoló
tos glucídicos de la membrana plas gica del perro doméstico Canis
mática de los linfocitos entre estas dosfamiliaris es muy elevada, se puede
poblaciones. Según estos resultados, considerar genéticamente muy homo
la variedad Gorbeiakoa, al no unirse a géneo (Wayne, 1986), y de hecho se
la lectina PWN, carecería de residuos han analizado razas caninas españolas
de N acetil Glucosamina en las cade sin encontrar correlación significativa
nas glicoproteicas o glicolipídicas de entre las distancias morfológicas y las
las membranas de los linfocitos, mien enzimáticas (Jordana et al., 1992). Sin
tras que sí estarían presentes en la embargo, pueden existir diferencias
agrupación Iletsua. En lo referente a laentre frecuencias fenotípicas referen
Archivos de zootecnia vol. 47, núm. 178 179, p. 442.VARIABILIDAD EN LA RAZA CANINA EUSKAL ARTZAIN TXACURRA
tes a los carbohidratos de la superficiepoblaciones como parecen indicar los
de las células sanguíneas entre dos resultados.
BIBLIOGRAFÍA
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