1UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG I

Emeline Umbrecht - Jenck

Description

Niveau: Supérieur, Doctorat, Bac+8

• redaction

1UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG I Ecole Doctorale des Sciences de la Vie et de la Santé THESE Discipline : Sciences du vivant Spécialité : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie Présentée par Emeline Umbrecht-Jenck en vue d'obtenir le grade de Docteur de l'Université Louis Pasteur de Strasbourg Soutenue publiquement le 23 Novembre 2007 devant le jury composé de : Rapporteur interne : Mr le Pr. Jan De Mey, Professeur de l'Université Louis Pasteur de Strasbourg Rapporteurs externes : Mr le Dr. Frank Lafont, Directeur de Recherche CNRS Mr le Dr. François Darchen, Directeur de recherche INSERM Directrice de thèse : Mme le Dr. Sylvette Chasserot-Golaz, Chargée de Recherche INSERM, HDR Implication de l'annexine A2 lors de l'assemblage des sites d'exocytose dans les cellules chromaffines.

• assemblage des sites d'exocytose dans les cellules chromaffines


• site opener


• mitogen activated protein


• ecole doctorale des sciences de la vie et de la santé

Sujets

• Redaction
• Louis Pasteur University
• Lafont
• Ulrich

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• Publié par: profil-feym-2012
• Publié le: 01 novembre 2007
• Nombre de lectures: 64
• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 14 Mo

Extrait

UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG I
Ecole Doctorale des Sciences de la Vie et de la Santé
THESE
Discipline : Sciences du vivant
Spécialité : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Présentée par
Emeline Umbrecht-Jenck
en vue d’obtenir le grade de Docteur de l’Université Louis Pasteur de Strasbourg
Implication de l’annexine A2 lors de l’assemblage
des sites d’exocytose dans les cellules chromaffines.
Soutenue publiquement le 23 Novembre 2007 devant le jury composé de :
Rapporteur interne :
Mr le Pr. Jan De Mey, Professeur de l’Université Louis Pasteur de Strasbourg
Rapporteurs externes :
Mr le Dr. Frank Lafont, Directeur de Recherche CNRS
Mr le Dr. François Darchen, Directeur de recherche INSERM
Directrice de thèse :
Mme le Dr. Sylvette Chasserot-Golaz, Chargée de Recherche INSERM, HDR
12Remerciements
Le travail présenté dans ce manuscrit a été effectué à l’Institut de Neurosciences
Cellulaires et Intégratives, ULP/CNRS UMR 7168, dans le département « Neurotransmission
et Sécrétion Neuroendocrine » dirigé par le Dr. Marie-France Bader.
Je tiens à remercier particulièrement le Pr. Jan De Mey, le Dr. Frank Lafont et le Dr.
François Darchen, qui ont généreusement accepté de faire partie de mon jury et de consacrer
une partie de leur temps à évaluer mon travail de thèse.
Merci à Marie-France Bader de m’avoir accueillie au sein de son équipe et d’avoir ainsi
fait de ces trois années de thèse un moment riche et instructif.
Un grand merci également à Sylvette Chasserot-Golaz, ma directrice de thèse, sans qui ce
manuscrit n’aurait peut-être jamais vu le jour. Elle a su m’encadrer sans être trop directive, ce
qui m’a permis d’apprendre beaucoup de choses sur la Science et sur moi-même. Nos
discussions ont toujours été enrichissantes en tous points, et je lui sais gré de la patience
qu’elle a conservée jusqu’au bout, même si, il faut bien le dire, je lui ai sûrement donné bien
du fil à retordre !
Je remercie aussi Valérie Calco, qui m’a initiée à la biologie moléculaire dans la joie et la
bonne humeur et pour qui les relectures de manuscrit n’ont plus de secrets. Merci d’avoir
toujours été là pour répondre à mes questions, me remontrer le moral quand il était trop bas,
ou tout simplement partager un moment agréable !
Mes remerciements également à Valérie Demais, pour sa grande compétence en
microscopie électronique. Elle m’a appris à faire ces fameuses analyses statistiques de Ripley,
et je ne compte plus les heures passées côte à côte avec elle à cliquer les billes une à une…
Merci à Nicolas Vitale, Stéphane Gasman, Jaroslava Ciesielski-Treska, Maria Zeniou-
Meyer et Mara Ceridono, avec qui les discussions scientifiques ont été nombreuses et
fructueuses, et qui ont su faire régner une ambiance de travail agréable au sein de l’équipe…
Un remerciement tout spécial à Nancy Grant, pour sa gentillesse, ses conseils techniques
avisés et son aide précieuse en anglais.
Merci aussi à Gaby Ulrich, pour son aide technique toujours appréciable et sans qui la
gestion des stocks et les commandes de produits seraient une véritable catastrophe, et à Tam
Tahouly, responsable de l’indispensable culture de cellules chromaffines.
Je n’oublie pas bien sûr tous mes compagnons de paillasse et de bureau, avec qui travailler
est un vrai bonheur : Petra Tryoen-Toth et Magali Malacombe, dont la présence dans le
3bureau a mis une animation agréable ; Elodie Fourcaudot et Renaud Thiébaut, avec qui la
rédaction d’une thèse devient un moment de plaisir, surtout avec du thé et du chocolat ;
Aurélie Béglé, Aurore Niemiec, Fanny Momboisse, et Matthias Corrotte, avec qui il est aussi
facile de discuter de sciences que d’une foule d’autres choses intéressantes ; sans compter
tous ceux qui, de près ou de loin, ont participé au bon déroulement de ces quatre années de
thèse, que je n’ai pas cités, mais que je remercie de tout cœur.
Finalement, je souhaite remercier chaleureusement ma maman et Bernard d’avoir fait en
sorte que je puisse poursuivre mes études dans les meilleures des conditions qui soient, et de
m’avoir toujours soutenue dans mes choix. Merci aussi à mes frères et sœurs adorés : Florine,
Diane, Renaud et Gauthier, pour leur affection et pour tous les moments partagés qui
permettent de laisser de côté les soucis pendant un temps. Pour finir, un merci tout spécial à
Anthony, pour son amour et son soutien de tous les instants.
Merci à tous…
4Abréviations
Par ordre alphabétique :
5HT : 5-HydroxyTryptamine
ABC : ATP Binding Cassette
Actine-F : Actine Filamenteuse
Actine-G : Actine monomérique
ADP : Adénosine DiPhosphate
AMP : Adénosine MonoPhosphate
ATP : Adénosine TriPhosphate
ARF : ADP Ribosylation Factor
ARNO : ARF Nucleotide binding site Opener
BCR : B-Cell Receptor
BHK : Baby Hamster Kidney
BoNT : Botulinum NeuroToxin
BSA : Bovine Serum Albumin
2+Ca : ions calcium
C-ter : extrémité Carboxy-terminale
DBH: Dopamine--Hydroxylase
DMEM : Dulbecco’s Modified Eagle Medium
DRM : Detergent-Resistant Membrane
ECL : Enhanced ChemiLuminescence
EGF : Epidermal Growth Factor
FCS : Fluorescence Correlation Spectroscopy
FRET : Fluorescence Resonance Energy Transfer
GAP : GTPase Activating Protein
GDP : Guanosine DiPhosphate
GEEC : GPI-enriched Early Endosomal Compartment
GFP : Green Fluorescent Protein
GIT1 : G protein-coupled receptor kinase InTeractor
GPI : Glycosyl-Phosphatidyl-Inositol
GST : Glutathion S-Transférase
GTP : Guanosine TriPhosphate
GTPase : Guanosine TriPhosphatase
IP3 : Inositol triPhosphate
MAPK : Mitogen-Activated Protein Kinase
MDCK : Madin-Darby Canine Kidney
MET : Microscopie Electronique à Transmission
5MuSK : Muscle Specific receptor tyrosine Kinase
NSF : N-ethylmaleimide-Sensitive Factor
N-ter : extrémité amino-terminale
N-WASP : Neuronal Wiskott-Aldrich Syndrome Protein
PA : Acide Phosphatidique
PBS : Phosphate Buffer Saline
PC : Phosphatidyl-Choline
PE : Phosphatidyl-Ethanolamine
PH : Pleckstrin Homology
PI : Phosphatidyl-Inositol
PI3K : Phosphatidyl-Inositol 3-Kinase
PI4K : Phosphatidyl-Inositol 4-Kinase
PIP2 : Phosphatidyl-Inositol (4,5) diPhosphate
PIP3 : Phosphatidyl-Inositol (3,4,5) triPhosphate
PKC : Protéine Kinase C
PLC : Phospholipase C
PLD1 : Phospholipase D1
PNMT : Phényl-N-Méthyl-Transférase
PS : Phosphatidyl-Sérine
RGS : Regulator of G-protein Signaling
RRP : Readily-Releasable-Pool
SNAP-25 : SyNaptosomal Associated Protein of 25 kD
SNAP : Soluble NSF Attachment Protein
SNARE : SNAP REceptor
SPT : Single Particle Tracking
SRP : Slowly-Releasable-Pool
STED : STimulation Emission Depletion microscopy
T3SS : Type III Secretion System
+TASK1 : Two-pore Acid-Sensitive K channel 1
TBS : Tris Buffer Saline
TCA : TriChloroAcétic acid
TCR : T-cell receptor
TeNT : NeuroToxine Tetanique
TGN : Trans-Golgi Network
TIRFM : Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy
tPA : tissue Plasminogen Activator
TRPV5 : Transient Receptor Potential V5
t-SNARE : target-SNARE
v-SNARE : vesicular-SNARE
VAMP : Vesicular-Associated Membrane Protein
VIH : Virus de l’Immunodéficience Humaine
WT : phénotype sauvage (Wild-Type)
6Table des matières
AVANT-PROPOS .................................................................................................................. 11
PREMIERE PARTIE : INTRODUCTION GENERALE………………….13
A. L’EXOCYTOSE DANS LES CELLULES SECRETRICES........................................ 13
1) Introduction........................................................................................................................................ 13
2) Un modèle de cellule sécrétrice : la cellule chromaffine ................................................................... 15
3) La biogenèse et la maturation des granules de sécrétion.................................................................... 17
4) Les étapes de l’exocytose régulée ...................................................................................................... 19
a) Le déclenchement de l’exocytose .................................................................................................. 20
b) Le recrutement des granules de sécrétion..................................................................................... 21
c) L’arrimage et l’amorçage ....................................