MINISTERE DE LA JEUNESSE DE L'EDUCATION NATIONALE

Véronique Bajzik

Description

Niveau: Supérieur
MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L'EDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la vie et de la terre MEMOIRE Présenté par Véronique BAJZIK Pour l'obtention du diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes SUIVI IMMUNOLOGIQUE DES POPULATIONS LYMPHOCYTAIRES T SPECIFIQUES DU VIRUS D'EPSTEIN BARR APRES GREFFE DE CELLULES SOUCHES HEMATOPOIETIQUES ALLOGENIQUES Soutenu le 18 Décembre 2006 devant le jury suivant : Pr Jean-Claude Gluckman Président Pr Bruno Canque Rapporteur Dr Hélène Moins Tuteur scientifique Pr Antoine Toubert Examinateur Dr Guislaine Carcelain Examinateur Laboratoire d'Immunologie cellulaire et Immunopathologie Directeur : Pr JC Gluckman Sciences de la Vie et de la Terre Ecole Pratique des Hautes Etudes Laboratoire d'Immunologie et d'Histocompatibilité Chef de service : Pr D Charron Hôpital Saint Louis ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE SUIVI IMMUNOLOGIQUE DES POPULATIONS LYMPHOCYTAIRES T SPECIFIQUES DU VIRUS D'EPSTEIN BARR APRES GREFFE DE CELLULES SOUCHES HEMATOPOIETIQUES ALLOGENIQUES VÉRONIQUE BAJZIK RESUME Le virus d'Epstein Barr (EBV) est un virus dont le contrôle de la réactivation et l'ajustement EPHE Banque de Monographies SVT 1

• evaluation de la taille des molécules hla sur gel d'acrylamide


• donneur intra familial


• réactivations virales


• ebv


• greffe de cellules souches hématopoïétiques

Sujets

• Hélène

Informations

• Publié par: chaeh
• Publié le: 01 décembre 2006
• Nombre de lectures: 38
• Langue: Français

Extrait

MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L’EDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE   ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la vie et de la terre   MEMOIRE Présenté par Véronique BAJZIK ou l’obtention du diplôme de l’Ecole Pratique des Hautes Etudes P r

    SUIVI IMMUNOLOGIQUE DES POPULATIONS LYMPHOCYTAIRES T SPECIFIQUES DU VIRUS D’EPSTEIN BARR APRES GREFFE DE CELLULES SOUCHES HEMATOPOIETIQUES ALLOGENIQUES  

  Soutenu le 18 Décembre 2006 devant le jury suivant : Pr Jean-Claude Gluckman Président Pr Bruno Canque Rapporteur Dr Hélène Moins Tuteur scientifique Pr Antoine Toubert Examinateur Dr Guislaine Carcelain Examinateur   Laboratoire d’Immunologie cellulaire et Immunopathologie Directeur : Pr JC Gluckman Sciences de la Vie et de la Terre Ecole Pratique des Hautes Etudes   Laboratoire d’Immunologie et d’Histocompatibilité Chef de service : Pr D Charron Hôpital Saint Louis

ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE   SUIVI IMMUNOLOGIQUE DES POPULATIONS LYMPHOCYTAIRES T SPECIFIQUES DU VIRUS D’EPSTEIN BARR APRES GREFFE DE CELLULES SOUCHES HEMATOPOIETIQUES ALLOGENIQUES   VÉRONIQUE BAJZIK

RESUME Le virus d’Epstein Barr (EBV) est un virus dont le contrôle de la réactivation et l’ajustement

thérapeutique posent des problèmes en greffe de CSHA. Sa réactivation est une complication sérieuse qui, associée à certains facteurs de risque, peut conduire à un syndrome lymphoprolifératif (PTLD), mortel dans 92% des cas. Actuellement, le traitement par le Rituximab, un anticorps anti CD20 humanisé, est l’approche thérapeutique antitumorale la plus utilisée. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés au suivi de la réponse immunitaire T CD8+ dirigée contre le virus EBV. Nous avons pour cela utilisé des molécules HLA de classe I tétramériques présentant des peptides viraux et couplées à un fluorochrome, les « tétramères ». Le suivi immunologique par les tétramères a été réalisé simultanément à la recherche de la réactivation virale afin de mieux comprendre les mécanismes immunologiques mis en jeu et d’étudier la capacité des patients à répondre et à contrôler la prolifération virale. Les tétramères HLA A*0201, A*0301, A*1101, B*0702, B*0802 que nous avons produits, nous ont permis de suivre 56 patients greffés. Nos analyses et la détection du génome viral par PCR en temps réel, nous ont permis d’observer la cinétique de reconstitution immunitaire anti EBV face à la réactivation virale. En conclusion, la quantification de l’ADN viral dans les cellules, combinée à la numération de cellules T spécifiques de l’EBV par les tétramères HLA de classe I, fournit un diagnostic précoce du statut de la réactivation. Les résultats nous permettent de distinguer les patients capables de contrôler spontanément la réactivation virale, de ceux qui nécessitent un traitement spécifique précoce par Rituximab, en particulier les patients traités par ATG et les receveurs de sang de cordon. MOTS CLEFS : EBV, PTLD, Greffe de CSHA, reconstitution immune, tétramères, Rituximab.

LISTE DES ABRÉVIATIONS......................................................................................................... 5 LISTE DES TABLEAUX ET FIGURES............................................ I- INTRODUCTION......................................................................... 1) L A   GREFFE   DE   ESLLULCE   SSEUOHC   POÏOMÉTAHSUEIQÉT   NIGÉLOALSEUQ ................................................ 7 1-1) Historique.......................................................................................................................... 7 1-2) Le Complexe Majeur d’Histocompatibilité............................................................................... 9 1-3) Reconstitution immunitaire après greffe de CSHA................................................................... 10 1-4) Le rejet de greffe, GvL et GvHD........................................................................................... 14 2) R ISQUES   INFECTIEUX   APRÈS   GREFFE   DE   ECLLLUSE   SUOHCSE   ÉTOÏUEIQÉMHOPATS ................................... 17 2-1) Les infections bactériennes et fongiques................................................................................. 17 2-2) Les infections virales.......................................................................................................... 17 3) L E   SYNDRÔME   ARITIFLÉFPOORMYHPL   POST   GREFFE .......................................................................... 18 3-1) Le virus d’Epstein Barr...................................................................................................... 18 3-2) Définition et classification du PTLD..................................................................................... 22 3-3) Facteurs de risque et incidence du PTLD en greffe de CSH....................................................... 23 3-4) Traitements du syndrome lymphoprolifératif post greffe........................................................... 23 4) R ÉPONSE   IMMUNE   À   L ’ NOITCEFNI   PAR   L ’EBV................................................................................. 25 4-1) Mécanismes moléculaires de la reconnaissance du virus par les lymphocytes T CD8+................... 25 4-2) La réponse lymphocytaire T CD8+ anti-virale........................................................................ 27 4-3) La réponse lymphocytaire T CD8+ anti-EBV.......................................................................... 28 5) S UIVI   UQEGILONOMUIM   DE   LA   ÉRCAITVATION   DU   VIRUS EBV.......................................................... 29

5-1) Méthodes de détection des lymphocytes T CD8+ spécifiques d’un antigène................................... 29 5-2) Applications..................................................................................................................... 30 5-3) Choix des épitopes............................................................................................................. 31 II- OBJECTIFS DU TRAVAIL.......................................................... III- MATERIELS ET METHODES................................................... 1) C TEORHO   DES   ATPSNTIE ..................................................................... 1-1) Diagnostics................................................................................... 1-2) Age des patients............................................................................. 1-3) Conditionnements........................................................................... 1-4) Sérologies EBV des couples donneur-receveur...................................... 2) P OINRATARPÉ   DES   ULESCELL ............................................................... 3) L ES   MOLÉCULES HLA DE   CLASSE I RTÉTIQUEAMÉRS ................................ 3-1) Production de protéines recombinantes.............................................. 3-2) Repliement de la molécule HLA de classe I.......................................... 3-3) Purification de la protéine............................................................... 3-4) Tétramèrisation............................................................................. 4) D ÉTEOITCN   ET   ANAESYL   DES   OCPHESYTYML T CD8................................ 4-1) Détection des lymphocytes T CD8 spécifiques à l’aide des tétramères...... 4-2) Calcul des fréquences et quantification des populations T spécifiques de virus 4-3) Suivi virologique............................................................................ IV- RESULTATS............................................................................. 1) S ÉPIFÉCITIC   DES   ÉTMARTSERÈ   ET   DÉTECTION   DE   LA   ÉROPSNE EBV.............. 2) S UIVI   DE   LA   TIONTIVACAÉR EBV......................................................... 2-1) Facteurs de risque de la réactivation EBV.......................................... 2-2) Délais de réactivation..................................................................... 3) S UIVI   DE   LA   ITUTITSNNOCORE   DE   SPYMLOHYCET T YCOTTOXIQUES   ANTI EBV APRÈS   GREFFE 3-1) Reconstitution immune anti-EBV....................................................... 3-2) Reconstitution immune anti-EBV et réactivation virale.......................... 3-3) Cinétique de la réactivation EBV, réponse cellulaire T et traitement par Rituximab. V- DISCUSSION.............................................................................. VI- ANNEXES.................................................................................. A NNEXE 1: A RTICLE C LAVE   ET   COLL .T TIONANTANSPLAR (2004).................... A NNEXE 2 : P LOERTOCO   DE   ONPRÉPARATI   DES   PÉTORSENI   DE   CORPS   D ’ IOUSNSCLIN A NNEXE 3 : P ROCOTOEL   DE   DLOFGNIER HLA............................................ A NNEXE 4 : B NITOIIONYLAT   DE   LA   MOLÉCULE HLA................................... A NNEXE 5 : W ESTERN   BLOT ................................................................... A NNEXE 6 : T NÉRISATIOÉTRAM .............................................................. A NNEXE 7 : E LAAUVONTI   DE   LA   TAILLE   DES   MOLÉCULES HLA SUR   GEL   D ’ RYLAMIDECA A NNEXE 8 : P OTORELOC   MÈRARETÉT EBV................................................ Gestion des prélèvements........................................................................ Séparation des lymphocytes.................................................................... Congélation......................................................................................... Marquage des cellules........................................................................... A NNEXE 9 : S TULOSNOI   ET T APMNOS ....................................................... Solutions............................................................................................. Tampons............................................................................................. VII- REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES......................................