THÈSE DE DOCTORAT DE L'ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SORBONNE

Olivier Morales

Description

Niveau: Supérieur, Doctorat, Bac+8
THÈSE DE DOCTORAT DE L'ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SORBONNE Sciences de la Vie et de la Terre Mention Systèmes Intégrés, Environnement et Biodiversité Discipline : Immunologie Présentée par Olivier MORALES Pour obtenir le grade de Docteur de l'EPHE-Sorbonne STRATÉGIE D'IMMUNOTHÉRAPIE DES PATHOLOGIES MALIGNES ASSOCIÉES À LA LATENCE DE TYPE II DU VIRUS D'EPSTEIN-BARR Soutenue le 11 Décembre 2009 Devant le jury composé de Pr. Jean-François JEANNIN Président Pr. Bruno QUESNEL Rapporteur Dr. Pierre BUSSON Rapporteur Pr. Jean ROMELAERE Examinateur Dr. Nadira DELHEM Examinateur Dr. Véronique PANCRE Directeur de thèse Pr. Bruno CANQUE Directeur d'étude EPHE Laboratoire EPHE d'Immunologie cellulaire et Immunopathologie Institut Universitaire d'Hématologie, Centre Hayem, Hopital St Louis 1, avenue Claude Vellefaux 75475 Paris Cedex 10 Laboratoire d'Immunorégulation des Cancers Viro-Induits de l'Institut de Biologie de Lille UMR 8161 CNRS-Institut Pasteur de Lille-Université Lille II & Lille I 1, rue du Pr Calmette 59021 Lille Cedex. , , STRATÉGIE D'IMMUNOTHÉRAPIE DES PATHOLOGIES MALIGNES ASSOCIÉES À LA LATENCE DE TYPE II DU VIRUS D'EPSTEIN-BARR Résumé EPHE Banque de Monographies SVT 1

• cibles cellulaires


• perte d'expression des antigènes de surface


• immunogénicité du cocktail


• latences virales


• infection primaire


• ebv


• laboratoire d'immunorégulation des cancers viro-induits de l'institut de biologie de lille umr


• ebv dans les cibles cellulaires


• pathologies de l'hôte immunocompétent

Sujets

• Moralès
• Institut Pasteur
• Jeannin
• Stratégies
• Quesnel
• Busson

Informations

• Publié par: profil-zyak-2012
• Publié le: 01 décembre 2009
• Nombre de lectures: 171
• Langue: Français

Extrait

THÈSE DE DOCTORAT
DE L’ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SORBONNE

Sciences de la Vie et de la Terre
Mention Systèmes Intégrés, Environnement et Biodiversité
Discipline : Immunologie


Présentée par

Olivier MORALES


Pour obtenir le grade de

Docteur de l’EPHE-Sorbonne

STRATÉGIE D’IMMUNOTHÉRAPIE DES PATHOLOGIES MALIGNES ASSOCIÉES À LA
LATENCE DE TYPE II DU VIRUS D’EPSTEIN-BARR


Soutenue le 11 Décembre 2009

Devant le jury composé de

Pr. Jean-François JEANNIN Président
Pr. Bruno QUESNEL Rapporteur
Dr. Pierre BUSSON R
Pr. Jean ROMELAERE Examinateur
Dr. Nadira DELHEM E
Dr. Véronique PANCRE Directeur de thèse
Pr. Bruno CANQUE D d'étude EPHE

Laboratoire EPHE d’Immunologie cellulaire et Immunopathologie
Institut Universitaire d’Hématologie, Centre Hayem, Hopital St Louis
1, avenue Claude Vellefaux 75475 Paris Cedex 10
[e-mail]

Laboratoire d’Immunorégulation des Cancers Viro-Induits de l’Institut de Biologie de Lille UMR 8161
CNRS-Institut Pasteur de Lille-Université Lille II & Lille I
1, rue du Pr Calmette 59021 Lille Cedex.
[e-mail], [e-mail], [e-mail]
STRATÉGIE D’IMMUNOTHÉRAPIE DES PATHOLOGIES MALIGNES ASSOCIÉES À LA
LATENCE DE TYPE II DU VIRUS D’EPSTEIN-BARR

Résumé

EPHE Banque de Monographies SVT 1Le virus d’Epstein-Barr (EBV) est impliqué dans différentes pathologies tumorales que l'on peut distinguer
par le type de latence virale exprimée. La latence de type II, où s’expriment 2 protéines de latence
membranaires (LMP1 et LMP2) et 1 antigène nucléaire (EBNA1), est ainsi plus particulièrement associée au
lymphome de Hodgkin, au carcinome du nasopharynx et au lymphome NK/T. De nombreuses études
+confirment aujourd’hui le rôle essentiel des lymphocytes T CD4 dans le contrôle des cancers, notamment
ceux associés à l’EBV. Les travaux que nous avons développé au sein du laboratoire se sont alors articulés
autour de l’élaboration d’une vaccination peptidique, ou d’un protocole de thérapie cellulaire, qui
+reposeraient sur le développement d’une réponse des lymphocytes T CD4 EBV-spécifiques directe ou
générée ex-vivo, à partir d’un cocktail de peptides dérivés des antigènes de latence de type II d’EBV et
promiscuous pour les molécules HLA de classe II.
Validée dans le modèle de souris A β°-DR1, l’immunogénicité du cocktail a ensuite été étudiée chez un
ensemble de donneurs sains et de patients atteints de la maladie de Hodgkin. Afin de confirmer nos résultats
+et dans le but de mieux caractériser la réponse TCD4 obtenue, nous avons développé un ensemble de
lignées spécifiques des peptides et du cocktail. Nous avons ainsi confirmé l’orientation spécifique vers la
voie Th1 ainsi que le potentiel cytotoxique des lignées générées ex-vivo, notamment contre différentes
lignées cellulaires EBV+ spécifiques de la latence de type II.
Cependant, la préexistence d’un contexte environnemental très défavorable à la réponse immune mais
favorable au développement des cancers, notamment ceux associés à l’EBV, nous impose la plus grande
prudence quant au d’un protocole thérapeutique. Nous avons donc isolé des lymphocytes
+ +TCD4 CD25 régulateurs et confirmé que ni les peptides ni le cocktail n’exacerbait leur potentiel
immunosuppressif.
En conclusion, ce cocktail peptidique pourrait être utilisé dans des approches d’immunothérapie active ou
adoptive appliquée aux traitements des cancers associés à l’EBV. Dans le but de contrôler la maladie
résiduelle et de prévenir les risque de rechutes, après les traitements classiques.

+Mots clés : EBV, Lymphocytes T CD4 , peptides, vaccins, Lymphocytes T régulateurs












EPHE Banque de Monographies SVT 2








SOMMAIRE



















INTRODUCTION.. 10
VIRUS D’EPSTEIN-BARR ET PATHOLOGIES ASSOCIEES. 11
I-HISTORIQUE. 11
II-TAXONOMIE. 11
III-DONNEES EPIDEMIOLOGIQUES. 12
IV-STRUCTURE DU VIRION. 12
V-ORGANISATION DU GENOME VIRAL. 13
VI-LES LATENCES VIRALES. 14
1-Les différents programmes de latence. 15
2-Description des différents produits de gènes de latence. 16
2.1-La famille des EBNAs. 16
EPHE Banque de Monographies SVT 32.1.2-EBNA2 et EBNA-LP.. 17
2.1.3-Les EBNA3.. 18
2.2-La famille des LMPs. 19
2.2.1-LMP1.. 19
2.2.2-Les LMP2.. 19
2.3-Les ARN viraux EBER et BART.. 20
VII-LE CYCLE LYTIQUE. 21
VIII-PHYSIOPATHOLOGIE DE L’INFECTION PAR L’EBV. 23
1-Déroulement de l’infection.. 23
1.1-Cellules cibles du virus. 23
1.1.1-Cibles cellulaires classiques. 23
1.1.1.1-Les lymphocytes B.. 23
1.1.1.2-Les cellules épithéliales. 24
1.1.2-Cibles cellulaires non conventionnelles. 25
1.1.2.1-Les lymphocytes T.. 25
1.1.2.2-Les monocytes. 26
1.2-Etapes cellulaires de l’infection.. 26
1.3-Déroulement de l’infection dans l’organisme de l’hôte. 28
IX-PATHOLOGIES ASSOCIÉES À L’EBV. 30
1-Infection primaire et pathologies. 30
2-Infection persistante et tumorales. 32
2.1-Pathologies de l’hôte immunodéprimé. 32
2.1.1-Désordres Lymphoprolifératifs Post-Transplantation (PTLD). 32
2.1.2-Lymphomes associés à l’EBV chez le malade du SIDA.. 34
2.1.2.1-Leïomyosarcomes liés à l’Immunodéficience. 35
2.1.2.2-Leucoplasie orale chevelue. 35
2.2-Pathologies de l’hôte immunocompétent. 36
2.2.1-Lymphome de Burkitt (LB). 36
2.2.2-Lymphome de Hodgkin (LH). 38
2.2.2.1-Données épidémiologiques. 38
2.2.2.2-Hypothèses pathogéniques. 39
2.2.2.3-Valeur pronostique de l’association avec l’EBV, intérêt de la mesure de la charge virale. 40
2.2.3-Carcinome du Nasopharynx.. 41
2.2.4-Maladies associées à l’EBV dans les cibles cellulaires non-conventionnelles. 43
2.2.4.1-Carcinome gastrique et carcinome de type lymphoépithéliome. 43
2.2.4.2-Maladies lymphoproliferatives à cellules T.. 44
2.2.4.3-Pseudotumeurs inflammatoires de type Tumeurs des cellules dendritiques folliculaires (CDF) 45
2.2.4.4-Cancer du sein et du foie. 45
3-EBV et pathologies auto-immunes. 46
EBV, REPONSE IMMUNITAIRE ET STRATEGIES D’ECHAPPEMENT. 47
I-CARACTERISTIQUES DE LA REPONSE IMMUNITAIRE DIRIGEE CONTRE L’EBV. 47
1-La réponse humorale a l’EBV.. 47
1.1-Réponse à l’infection primaire. 47
1.2-Réponse humorale durant la phase de latence. 49
2. Analyse de la réponse immune cellulaire à l’EBV.. 50
2.1-Réponse immune cellulaire innée. 50
2.2-Réponse adaptative. 51
+2.2.1-Réponse cellulaire T-CD8 . 51
2.2.2-Réponse T-CD4+.. 54
II-MECANISMES D’ECHAPPEMENT TUMORal 57
1-Altération de l’expression des molécules du CMH.. 57
2-Variation ou perte d’expression des antigènes de surface. 58
3-Inhibition de l’apoptose induite par les lymphocytes T spécifiques. 59
3.1-Inhibition directe. 59
EPHE Banque de Monographies SVT 43.2-Inhibition indirecte. 60
4- Molécules immunosuppressives. 62
5-Défaut d’activation lymphocytaire. 65
6-Les cellules T régulatrices (T ). 66REG
+ +6.1-Définition des LT suppresseurs CD4 CD25 . 67
6.2-Caractérisation phénotypique. 68
6.3-Mécanismes de suppression.. 70
6.3.1-Contact- ou cytokine-dépendant. 70
6.3.1.1-Rôle des molécules de surface. 70
6.3.1.2-Rôle des cytokines solubles. 72
6.4-T et immunité tumorale. 74REG
III- MECANISMES D’ECHAPPEMENT AU SYSTEME IMMUNITAIRE INDUITS PAR L’EBV. 76
1-Stratégies moléculaires. 76
1.1-Protéines de latences. 76
1.2-Protéines du cycle lytique. 79
2-Interaction entre l’EBV et son environnement. 81
2.1-Manipulation de la réponse immune à l’EBV et coinfections. 81
2.1.1-Cas des lymphomes associés au VIH.. 81
2.1.2-Lymphome de Burkitt endémique. 82
+3-Microenvironnement tumoral conditionné par les tumeurs EBV . 84
3.1-Carcinome du Nasopharynx.. 84
3.2-Le lymphome de Hodgkin.. 85
IMMUNOTHERAPIE DES PATHOLOGIES MALIGNES ASSOCIEES A L’EBV. 89
I-Tumeurs de latence de type III 90
1-Immonothérapie passive. 90
2-Immunothérapie Adoptive : thérapie cellulaire. 92
2.1-Infusion de lymphocytes du donneurs (non-manipulées) (DLI, Donnor Lymphocytes Infusion). 92
2.2-Utilisation de lymphocytes T EBV-spécifiques. 92
2.2.1-Cas des PTLDs post-greffe de CSH.. 92
2.2.2-Cas des PTLDs post-transplantation d’organe solide. 94
2.2.3-Utilisation de lymphocytes NK activés. 96
II-Tumeur d