Cloning and targeted deletion of the mouse histidine-rich glycoprotein gene and functional characterization of HRG in mice [Elektronische Ressource] / vorgelegt von Nobuko Tsuchida-Straeten

Description

Cloning and targeted deletion of the mouse histidine-rich glycoprotein gene and functional characterization of HRG in mice Von der Fakultät für Mathematik, Informatik und Naturwissenschaften der Rheinisch-Westfälischen Technischen Hochschule Aachen zur Erlangung des akademischen Grades einer Doktorin der Naturwissenschaften genehmigte Dissertation vorgelegt von Master of Science Nobuko Tsuchida-Straeten aus Sanda (Japan) Berichter: Univ.-Prof. Dr. rer. nat. Willi Jahnen-Dechent Univ.-Prof. Dr. rer. nat. Fritz Kreuzaler Tag der mündlichen Prüfung: 7. November 2005 Diese Dissertation ist auf den Internetseiten der Hochschulbibliothek online verfügbar. Partsoftheworkdescribedinthisthesishasbeenpublishedin:Tsuchida StraetenN , Ensslen S, Schäfer C, Wöltje M, Denecke B, Moser M, Gräber S,WakabayashiS,KoideT,Jahnen DechentW.Enhancedbloodcoagulationandfibrinolysisinmicelackinghistidine richglycoprotein(HRG)J·rombHaemost.(2005)3,865 872ContentsListofFigures vListofTables viiAbstract 11 Introduction 31.1 Histidine richglycoprotein(HRG) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31.1.1 LocalizationofHRG . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31.1.2 StructureofHRGprotein . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31.1.3 StructureofHRGgene . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51.1.4 FunctionofHRG . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61.1.5 ClinicalreportsofHRG . . . . . . . . . . . .

Sujets

• Gesundheit

Informations

• Publié par: rheinisch-westfalischen_technischen_hochschule_-rwth-_aachen
• Publié le: 01 janvier 2005
• Nombre de lectures: 21
• Langue: Deutsch
• Poids de l'ouvrage: 6 Mo

Extrait

 

 

Cloning and targeted deletion of the mouse

histidine-rich glycoprotein gene

and functional characterization of HRG in mice

   Von der Fakultät für Mathematik, Informatik und Naturwissenschaften der

Rheinisch-Westfälischen Technischen Hochschule Aachen zur Erlangung

des akademischen Grades einer Doktorin der Naturwissenschaften

Berichter:

genehmigte Dissertation

 

 

vorgelegt vonMaster of Science

Nobuko Tsuchida-Straeten

 

aus Sanda (Japan)

 

 

Univ.-Prof. Dr. rer. nat. Willi Jahnen-Dechent

Univ.-Prof. Dr. rer. nat. Fritz Kreuzaler

Tag der mündlichen Prüfung:  

 

 

7. November 2005

Diese Dissertation ist auf den Internetseiten der Hochschulbibliothek online verfügbar. 

Parts of the work described in this thesis has been published in:

Tsuchida-Straeten N, Ensslen S, Schäfer C, Wöltje M, Denecke B, Moser M, Gräber S, Wakabayashi S, Koide T, Jahnen-Dechent W.

Enhanced blood coagulation and fibrinolysis in mice lacking histidine-rich glycoprotein (HRG)

J ´romb Haemost. (2005)3, 865-872

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Function of HRG . . . .

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Clinical reports of HRG .

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1.2.1

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´e coagulation cascade . . . . . . . .

1.2

Blood coagulation and fibrinolysis . . . .

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´rombophilia . . . .

´e fibrinolytic system . . . . . . . . .

1.2.2

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12

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Platelet signaling . . .

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1.2.3

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1.2.4

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Introduction

Abstract

List of Tables

List of Figures

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Histidine-rich glycoprotein (HRG)

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Localization of HRG . . .

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Structure ofHRG .gene .

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Structure of HRG protein

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1.1.2

1.1.1

i

Contents

2.2.4

2.2.5

2.2.2

2.2.3

19

2.2.1

22

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Blastocyst Injections

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DNA Analysis . . .

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2.2

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Construction of the gene targeting vector

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2.1.2 Mouse RPCI21 genomic library . . . .

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Gene targeting . . . . . . . . . . . . . . . . .

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2.1

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2.1.1 Mouse 129/SvJ genomic library (cloning

19

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and sequencing)

1.3

1.1.5

1.1.4

1.1.3

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Aims of this study . . . . . .

mouseHrggene

Cloning and sequencing of the

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1.1

vii

v

1

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Gene Targeting in ES Cells

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Establishment of a southern strategy

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Materials and Methods

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21

2

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20

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Contents

3

4

ii

2.3

2.2.6 Genotyping . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Analysis of HRG-deficient mice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3.1 Immunoblot analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3.2 Hematological analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3.3 Platelet aggregation analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3.4 Whole blood clot lysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3.5 NuPAGE TM . . . . . . . . . . . . . . .electrophoresis analysis . . . 2.3.6 Bleeding time . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3.7 Induction of skin wounds . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3.8 Immunoblot analysis of platelet HRG . . . . . . . . . . . . . . . . .

Results 3.1 Cloning and sequencing of the mouseHrggene . . . . . . . . . . . . . . . . 3.1.1 Characterization of the upstream region of the mouseHrggene . . . . 3.1.2Subcloning and sequencing of the upstream region of the mouseHrggene 3.1.3 Structural characterization and nucleotide sequence of mouseHrggene 3.1.4 Repeat sequences of mouseHrggene .. . . . . . . . . . . . . . . . . 3.1.5 HarrPlot analysis of human and mouseHrggenes .. . . . . . . . . . 3.1.6Predicted transcription factor binding sequences and comparison of humanHRGgene and mouseHrg . . . . .gene in the promoter region 3.2 Generation of HRG null mutant mice (Hrg “j“ ) . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.2.1 Construction of the gene targeting vector . . . . . . . . . . . . . . . 3.2.2 Establishment of a southern strategy for the screening of theHrgalleles 3.2.3 Gene targeting in ES cell . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.2.4 Generation of HRG null mutant mice (Hrg “j“ . . . . . . . .) . . . . . 3.3 Analysis of HRG-deficient mice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3.1 Immunoblot analysis of serum HRG expression . . . . . . . . . . . . 3.3.2 Hematological analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3.3 Blood coagulation factors . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3.4 Effect on fibrinolysis of HRG . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3.5 Effect on Haemostasis: Bleeding Time Measurement . . . . . . . . . . 3.3.6 Skin wound model . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3.7 Influence of HRG on platelet function . . . . . . . . . . . . . . . . .

Discussion 4.1 Structural characterization of the murine histidine-rich glycoprotein gene

. . .

23 24 24 24 25 26 26 26 26 27

29 29 29 29 32 36 37

38 39 39 40 41 42 44 44 45 46 48 49 50 52

55 55

4.2.3

4.2.4

4.2.5

4.2.6

4.1.1

Predicted promoter

binding sequence

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References

56

73

63

75

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Contents

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57

Analysis of HRG-deficient mice

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4.2.2

4.2.1

4.2

57

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on

HRG

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blood coagulation system

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57

Effect of HRG on hematology .

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Fibrinolytic system

on

HRG

of

Effect

59

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Effect

of

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59

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60

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platelet aggregation activity

on

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Effect

of

HRG

on

Bleeding time

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61

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of

Effect

on

HRG

of

HRG

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Effect

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inflammation

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Curriculum vitae

Acknowledgements

iii

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Outlook

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Conclusion

and

Abbreviations

4.3

Contents

iv