etude H1N1

Description

Efficacit€ virucide dun d€sinfectant pour usage sur les surfaces environnementales inanim€esVirus : Virus de la grippe A (H1N1)D€signation du Produit : Sanosil S010ATS Labs, Eagan MN 55121, USAMai 2009Sanosil Ltd. Eichtalstrasse 49 CH-8634 Hombrechtikon SuisseTél.: [phone] Fax: [phone] e-mail: [e-mail] T 261/en ‚ Sanosil 2009 Mai 20091285 Corporate Center Drive, Suite 110  Eagan MN 55121  877.287.8378 65.379.5510  Fax: [phone]RAPPORT D€ETUDE FINALTITRE DE L€ETUDEEfficacit virucide d€un dsinfectant pour usagesur les surfaces environnementales inanimesVirus : Virus de la grippe A (H1N1)DESIGNATION DU PRODUITSanosil S010Lot Z0905B8 et Lot Z2012B7EXIGENCES RELATIVES AUX DONNEESU.S. EPA 40 CFR Part 158,"Data Requirements for Registration"Directives pour l€valuation des pesticides - Subdivision G, 91-2(f)AUTEURKaren M. Ramm, B.A.Directeur d€EtudeDATE DE FIN DE L€ETUDE27 mai 2009LABORATOIRE EXECUTANTATS Labs1285 Corporate Center Drive, Suite 110Eagan, MN 55121PROMOTEUR Sanosil International, LLC100 Dean DriveNewark, DE 19711REPRESENTANT DU PROMOTEURLewis & Harrison, LLC122 C Street, NW, Suite 740Washington, DC 20001NUMERO DU PROJETA07680Page 1 / 231285 Corporate Center Drive, Suite 110  Eagan MN 55121  877.287.8378 65.379.5510  Fax: [phone]Projet N° A07680 Sanosil International, LLCProtocole N° : LEH06042909.SFLU Page 7 / 23RAPPORT D€ETUDEINFORMATIONS GENERALES SUR L€ETUDETitre de ...

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Extrait

Efficacit virucide d’un dsinfectant pour usage sur les surfaces environnementales inanimes

Virus

: Virus de la grippe A (H1N1)

Dsignation du Produit

: Sanosil S010

ATS Labs, Eagan MN 55121, USA Mai 2009

Sanosil Ltd. Eichtalstrasse 49 CH-8634 Hombrechtikon Suisse Tél.: [phone] Fax: [phone] e-mail: [e-mail]

Des T 261/en

 Sanosil 2009

Mai 2009

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RAPPORT D’ETUDE FINAL

TITRE DE L’ETUDE

Efficacit virucide d’un dsinfectant pour usage sur les surfaces environnementales inanimes

Virus : Virus de la grippe A (H1N1)

DESIGNATION DU PRODUIT

Sanosil S010 Lot Z0905B8 et Lot Z2012B7

EXIGENCES RELATIVES AUX DONNEES

U.S. EPA 40 CFR Part 158, "Data Requirements for Registration" Directives pour l’valuation des pesticides - Subdivision G, 91-2(f)

AUTEUR

Karen M. Ramm, B.A. Directeur d’Etude

DATE DE FIN DE L’ETUDE

27 mai 2009

LABORATOIRE EXECUTANT

ATS Labs 1285 Corporate Center Drive, Suite 110 Eagan, MN 55121

PROMOTEUR

Sanosil International, LLC 100 Dean Drive Newark, DE 19711

REPRESENTANT DU PROMOTEUR

Lewis & Harrison, LLC 122 C Street, NW, Suite 740 Washington, DC 20001

NUMERO DU PROJET

A07680

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Sanosil International, LLC 100 Dean Drive Newark, DE 19711

LEH06042909.SFLU

A07680

Efficacit virucide d’un dsinfectant pour usage sur les surfaces environnementales inanimes

ATS Labs 1285 Corporate Center Drive, Suite 110 Eagan, MN 55121

Lewis & Harrison, LLC 122 C Street, NW, Suite 740 Washington, DC 20001

INFORMATIONS GENERALES SUR L’ETUDE

1285 Corporate Center Drive, Suite 110Eagan MN 55121877.287.837865.379.5510Fax: [phone]

Cette tude avait pour but d’valuer l’efficacit virucide d’une substance exprimentale contre le virus de la grippe A (H1N1) selon des critres et mthodes d’essai valids par l’Agence de Protection de l’Environnement des Etats-Unis (U.S. EPA), pour l’enregistrement d’un produit comme virucide.

OBJECTIF

Sanosil International,

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RAPPORT D’ETUDE

Titre de l’tude :

Lot 20905B8 et Lot Z2012B7

Sanosil S010

Nom de la substance  l’essai :

IDENTITE DE LA SUBSTANCE A L’ESSAI

27 janvier 2009 1 er mai 2009 9 mai 2009 15 mai 2009 27 mai 2009

DATES DE L’ETUDE Date de rception de l’chantillon : Date de dbut de l’tude : Date de dbut des tests : Date de fin des tests : Date de fin de l’tude :

Lot(s) :

Caractrisation de la substance  l’essai La caractrisation de la substance  l’essai (teneur, stabilit, solubilit, conservation, etc.) est de la responsabilit du promoteur.

Projet N :

Protocole N :

LLC

Protocole N° : LEH06042909.SFLU

Reprsentant du promoteur :

Projet N° A07680

Promoteur :

Centre d’essais :

RESUME DES RESULTATS Substance  l’essai :Sanosil S010, Lot Z0905B8 et Lot Z201267 Dilution :Prt  l’emploi (PAE) Virus :Virus de la grippe A (H1 N1), ATCC VR-333, souche /503aw1/A/loe/inSw Temps d’exposition :Dix minutes Temprature d’exposition :Temprature ambiante (20,0C) Charge organique :Srum fœtal de bovin 1 % Rsultat d’efficacit :Deux lots de Sanosil S010 rpondaient aux critres d’essai spcifis dans le protocole d’tude. Les rsultats indiquent uneinactivation totaledu virus de la grippe A (H1N1) dans les conditions d’essai requises par l’U.S. EPA pour les revendications d’activit virucide.

SYSTEME EXPERIMENTAL

1

2.

3.

Virus La souche A/Swine/lowa/15/30 de virus de la grippe A (H1N1) utilise pour cette tude provient de l’American Type Culture Collection, Manassas, VA (ATCC VR-333). La solution-mre de virus a t prpare en recueillant le surnageant de culture des cellules infectes. Les cellules ont t lyses et les dbris cellulaires limins par centrifugation  environ 2000 t/min pendant 5 minutes  environ 4C. Le surnageant a t rparti en aliquotes et la solution-mre de virus,  haut titre, a t conserve  une temprature infrieure ou gale  -70C jusqu’au jour d’utilisation. Ce jour-l, une aliquote de solution-mre de virus (Lot SF-14, ATS Labs) a t prleve, dcongele et maintenue au rfrigrateur jusqu’au moment du dosage. Les cultures de solution-mre de virus contenaient 1% de srum fœtal de bovin comme charge organique. Le virus test a dmontr les effets cytopathiques (ECP) typiques des virus grippaux sur les cellules de rein de singe Rhsus (RMK).

Cultures cellulaires d’essai Les cellules RMK proviennent de ViroMed Laboratories, Inc., Division de Culture Cellulaire. Les cultures ont t maintenues et utilises  la densit approprie dans le matriel pour culture tissulaire du laboratoire,  36-38C, sous atmosphre humidifie  5-7 % de CO 2 .

Milieu d’essai Le milieu d’essai utilis dans cette tude tait le Milieu Essentiel Minimum (MEM) supplment avec 1 % de srum fœtal bovin (FBS) inactiv par chauffage, 10 g/ml de gentamicine, 100 U/ml de pnicilline et 2,54 g/ml d’amphotricine B.

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Le tableau suivant rpertorie les groupes d’essai et tmoins, les dilutions testes et le nombre de cultures utilises. Pour une explication plus dtaille, voir le texte du rapport.

NOMBRE DE DILUTIONS ET DE CULTURES POUR L’ETUDE D’EFFICACIT VIRUCIDE Groupe d’essai ou tmoin Dilutions testes Cultures par Nbre total de (log 10 ) dilution cultures Tmoin cellulaire N/ 4 4/ u Tmoin virus dshydrat -1,-2,-3,-4,-5, 6, 7 4 28 - - (Groupe A) Echantillon du lot n1 + vir  -1,-2,-3,-4,-5,-6,-7 4 28 us

(Groupe B)

Echantillon du lot n2 + virus (Groupe B)

Cytotoxicit du lot n1 (Groupe C)

Cytotoxicit du lot n2 (Groupe C)

Niveau non virucide – lot n1 (Groupe D)

Niveau non virucide – lot n2 (Groupe D)

METHODES

1.

2

3.

-1,-2,-3,-4,-5,-6,-7

-1,-2, 3,-4,-5,-6,-7 -

--1,-2,-3,-4,-5,-6, 7

-1,-2,-3,-4,-5,-6,-7

-1,-2,-3,-4,-5,-6,-7

4

4

4

4

4

28

28

28

28

28

Prparation de la substance  l’essai Deux lots de Sanosil S010 (Lot Z0905B8 et Lot Z2012B7) ont t utiliss purs, tels qu’envoys par le promoteur. A l’emploi, la substance  l’essai tait en solution comme dtermin par observation visuelle.

Prparation des films de virus Les films de virus ont t prpars en talant uniformment 0,2 ml d’inoculum viral sur le fond de trois botes de Ptri en verre, striles, de 100 x 15 mm. Les films de virus ont t schs  l’air libre  20,0C dans des conditions d’humidit relative de 50 %, jusqu’ ce qu’ils soient visiblement secs (20 minutes).

Filtration sur gel Sephadex Afin de rduire le niveau de cytotoxicit du mlange virus-substance  l’essai avant le dosage du virus et/ou de rduire l’activit virucide de la substance  l’essai, le virus a t spar de la substance  l’essai par filtration sur gel Sephadex. Des colonnes de Sephadex LH-20-100 ont t quilibres avec une solution physiologique tamponne au phosphate (tampon PBS) contenant 1 % d’albumine et centrifuges pendant trois minutes pour vider le volume mort. Les colonnes taient alors prtes  l’usage.

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4.

5.

6.

7.

8.

9.

Traitement des films de virus par la substance  l’essai (GROUPE B, TABLEAU 1) Pour chaque lot de substance  l’essai, un film de virus dshydrat a t individuellement expos  une aliquote de 2,00 ml de la dilution de substance  l’essai, pendant 10 minutes  temprature ambiante (20,0C). Les films de virus ont t entirement recouverts de substance  l’essai. Aprs le temps d’exposition, les plaques ont t grattes une  une avec un grattoir  cellules pour remettre en suspension le contenu et le mlange virus-substance  l’essai a t immdiatement chromatographi sur colonne de Sephadex en utilisant le piston de la seringue p uer l mlange. Le filtrat (dilution 10 -1 ) a ensuite t titr aprs dilutions en srie (au 1/10  o m u e  )ant en mesur qixotd re  l’infectivit et/ou la cytotoxicit.

Traitement du film tmoin de virus (GROUPE A, TABLEAU 1) Un film de virus a t prpar comme dcrit prcdemment (paragraphe 2). Le film tmoin a t expos  une aliquote de 2,00 ml de milieu d’essai pendant le mme temps d’exposition et  la mme temprature d’exposition que les films d’essai exposs  la substance d’essai (dix minutes  20,0C). Aprs exposition, le tmoin viral a t gratt avec un grattoir  cellules et le mlange viral a t immdiatement chromatographi sur colonne de Sephadex, de la mme manire que pour le virus d’essai (paragraphe 4). Le filtrat (dilution10 -1 ) a ensuite t titr aprs dilutions en srie (10 en 10) en mesurant l’infectivit.

Tmoin de cytotoxicit (GROUPE C, TABLEAU 2) Une aliquote de 2,00 ml de la dilution utilise de chaque lot de la substance  l’essai a t filtre sur colonne de Sephadex et le filtrat a t dilu en srie dans le milieu et inocul dans des cultures de cellules RMK. La cytotoxicit des cellules RMK en culture a t note en mme temps que celle des cultures de virus-substance  l’essai et des cultures tmoins.

Dtermination du seuil non virucide de la substance  l’essai (GROUPE D, TABLEAU 3) Chaque dilution de substance  l’essai filtre sur Sephadex (tmoin de cytotoxicit) a t mlange avec une aliquote de solution-mre de virus  faible titre, et les mlanges obtenus ont fait l’objet d’un test d’infectivit et/ou de cytotoxicit afin de dterminer la (les) dilution(s) de substance  l’essai conservant une activit virucide, le cas chant. Les dilutions qui prsentaient une activit virucide n’ont pas t prises en compte pour dterminer la rduction de l’infectivit par la substance  l’essai.

Mesures de l’infectivit La ligne cellulaire RMK, qui prsente un ECP en prsence du virus de la grippe A (H1N1), a t utilise comme ligne cellulaire indicatrice dans les tests d’infectivit. Les cellules en botes de culture multipuits ont t inocules, en quatre exemplaires, avec 0,1 ml des dilutions prpares  partir de tous les groupes d’essai et tmoins. Les cultures de cellules indicatrices non infectes (tmoins cellulaires) ont t inocules avec le milieu d’essai seul. Les cultures ont t incubes  36-38C sous atmosphre humidifie  5-7 % de CO 2 , dans du matriel de laboratoire strile  usage unique. Les cultures ont t values priodiquement pendant six jours pour vrifier l’absence ou la prsence d’un ECP, la cytotoxicit et la viabilit

Mthodes statistiques : Sans objet.

CHANGEMENTS DU PROTOCOLE

Amendements au protocole : Aucun amendement n’a t requis pendant cette tude.

Ecarts au protocole : Aucun cart au protocole n’a t observ pendant cette tude.

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ANALYSE DES DONNEES

Calcul des titres

Les titres viraux et de cytotoxicit sont exprims en -log 10 de la mi-titration pour l’infectivit (TCID 50 ) ou la cytotoxicit (TCD 50 ), respectivement, calcules par la mthode de Spearman-Karber.

- Log de la 1re dilution inocule -          crnepeuoSumoatdgmeid 001 hcnoitulormueaqdetlita     0.5   x(logarithme de la dilution)   

Calcul de la rduction logarithmique des titres

TCID 50 du virus dshydrat tmoin – TCID 50 de la substance  l’essai = Rduction logarithmique

CRITERES D’ACCEPTATION

Les conditions suivantes taient fixes pour que les tests soient valides : 1) qu’au moins 4 log 10 d’infectivit soient rcuprs avec le film tmoin de virus dshydrat; 2) que lorsqu’une cytotoxicit est visible, une rduction d’au moins 3 log du titre soit dmontre au-del du seuil cytotoxique ; 3) que les tmoins cellulaires soient ngatifs au plan de l’infectivit.Nota :Pour tre considr comme efficace, un produit doit entraner l’inactivation totale du virus  toutes les dilutions.

CONSERVATION

Conservation des dossiers Toutes les donnes brutes originales extraites exclusivement de cette tude seront archives chez ATS Labs, 1285 Corporate Center Drive, Suite 110, Eagan, MN 55121.Ces donnes originales sont notamment (liste non exhaustive) :

1.

2. 3. 4.

5. 6. 7.

Toutes les donnes brutes manuscrites pour la substance  l’essai et les tmoins, y compris, mais pas seulement, les cahiers de laboratoire, les fiches de donnes et les calculs. Toutes les notifications d’amendement/d’cart au protocole. Toutes les donnes mesures utilises pour formuler le rapport final. Les mmorandums, spcifications et autre correspondance spcifique de l’tude concernant l’interprtation et l’valuation des donnes, autres que les documents figurant dans le rapport d’tude final. Le protocole original, sign. Une copie certifie conforme du rapport d’tude final. Les carts aux POS spcifiques de l’tude constats pendant l’tude.

Conservation de la substance  l’essai La substance  l’essai sera limine au terme de l’tude, selon le protocole valid par le promoteur. Il est de la responsabilit du promoteur de conserver un chantillon du produit  l’essai.

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REFERENCES

1. Annual Book of ASTM Standards 2000, Section 11 Water and Environmental Technology Volume 11.05 Biological Effects and Environmental Fate: Biotechnology; Pesticides, E1053-97.

2. U.S. Environmental Protection Agency Pesticide Assessment Guidelines, Subdivision G: Product Performance, 91-2(f), November 1982.

3. U.S. Environmental Protection Agency, Registration Division, Office of Pesticide Programs, DIS/TSS-7, November 12, 1981.

4. Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial, and Chlamydial Infections. Schmidt, N.J. and Emmons, R.W. editors. Sixth edition, 1989. p. 18-20.

5. Blackwell, J.H., and J.H.S. Chen. 1970. Effects of various germicidal chemicals on HEP-2 cell culture and Herpes simplex virus. J. AOAC 53:1229-1236.

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RESULTATS DE L’ETUDE

Les Tableaux 1  3 prsentent les rsultats des tests effectus avec deux lots de Sanosil S010 (Lots Z0905B8 et Z2012B7), prts  l’emploi, exposs au virus de la grippe A (H1N1) en prsence de 1 % de srum fœtal bovin  temprature ambiante (20,0C) pendant dix minutes. Tous les tmoins cellulaires taient ngatifs pour l’infectivit du virus d’essai. Le titre du virus dshydrat tmoin tait de 4,75 log 10 . Aprs exposition, on a not une absence d’infectivit du virus d’essai dans le mlange virus-substance  l’essai, quels que soient le lot et la dilution tests. Absence de cytotoxicit de la substance  l’essai, quels que soient le lot et la dilution tests (0,5 log 10 ). Le contrle de neutralisation (niveau non virucide de la substance  l’essai) montre que la substance  l’essai est neutralise  un titre infrieur ou gal  0,5 log 10 les deux lots. Compte tenu des rsultats depour cytotoxicit et du contrle de neutralisation, la rduction du titre viral tait suprieure ou gale  4,25 log 10 pour les deux lots.

CONCLUSION DE L’ETUDE

Dans les conditions de cette tude et en prsence de 1 % de srum fœtal bovin, le produit Sanosil S010 (Lots Z0905B8 et Z2012B7), prt  l’emploi, entrane une inactivation totale du virus de la grippe A (H1N1) aprs dix minutes d’exposition  temprature ambiante (20,0C), rpondant ainsi aux exigences de l’U.S. EPA pour l’homologation comme virucide.

Selon le Directeur d’Etude, aucune circonstance n’a entach la qualit ou l’intgrit des donnes.

L’usage du nom, du logo ou de toute autre reprsentation d’ATS Labs est interdit sans l’autorisation crite d’ATS Labs. Par ailleurs, ATS Labs ne peut tre cit ou voqu dans un quelconque document promotionnel, communiqu de presse, publicit ou matriel similaire (que ce soit sous forme crite, orale ou lectronique) sans l’autorisation crite expresse d’ATS Labs.

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TABLEAU 1 : Rsultats pour le virus et le tmoin

Effets de Sanosil S010 (Lots Z0905B8 et Z2012B7) aprs dix minutes d’exposition au virus dshydrat de la grippe A (H1N1) sur une surface inanime

Dilution

Tmoin cellulaire 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 10 -5 10 -6 10 -7 TCID 50 ml

Dilution

Tmoin Virus dshydrat (GROUPE A)

0000 ++++ ++++ ++++ ++++ 0000 000+ 0000 10 ,

Virus de la grippe A (H1N1) + Lot Z0905B8 B 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 10 0,5

Virus de la grippe A (H1N1) + Lot Z2012B7 B 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 10 0,5

TABLEAU 2: Rsultats pour les tmoins de cytotoxicit Cytotoxicit de Sanosil S010 sur les cultures de cellules de rein de singe Rhsus (RMK)

Tmoin cellulaire 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 10 -5 10 -6 10 -7 TCID 50 /0,1 ml

Tmoin de cytotoxicit Lot Z0905B8 (GROUPE C) 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 <10 ,

(+) = Positif (prsence du virus d’essai) (0) = Absence de dtection du virus d’essai et/ou absence de cytotoxicit

Tmoin de cytotoxicit Lot Z2012B7 (GROUPE C) 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 10 0,5

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TABLEAU 3: Rsultats pour le contrle de neutralisation Niveau non virucide de la substance  l’essai (Contrle de neutralisation)

Dilution

Tmoin cellulaire 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 10 -5 10 -6 10 -7

Virus d’essai + Tmoin de cytotoxicit

Lot Z0905B8 (GROUPE D)

0000 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++

Virus d’essai + Tmoin de cytotoxicit Lot Z2012B7 (GROUPE D) 0000

++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++

(+) = Positif (prsence du virus d’essai) aprs addition de solution-mre de virus  faible titre (contrle de neutralisation)

(0) = Absence de dtection du virus d’essai et/ou absence de cytotoxicit

Les rsultats du contrle de niveau non virucide montrent que la substance  l’essai est neutralise  une TCID 50 infrieure ou gale  0,5 log 10 pour les deux lots.

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