Subversion of toll-like receptor 7/9 signaling by Measles virus - V holds the key [Elektronische Ressource] / Christian Karl Pfaller

Christian Karl Pfaller

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• Publié par: ludwig-maximilians-universitat_munchen
• Publié le: 01 janvier 2009
• Nombre de lectures: 35
• Langue: Deutsch
• Poids de l'ouvrage: 7 Mo

Extrait

Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades
der Fakultät für Chemie und Pharmazie
der Ludwig-Maximilians-Universität München


Subversion of Toll-like receptor 7/9 signaling
by Measles virus − V holds the key



Christian Karl Pfaller

aus
Berching

2009


Erklärung
Diese Dissertation wurde im Sinne von § 13 Abs. 4 der Promotionsordnung vom 29. Januar
1998 von Herrn Professor Dr. Karl-Klaus Conzelmann und von Herrn Professor Dr. Karl-
Peter Hopfner vor der Fakultät für Chemie und Pharmazie vertreten.



Ehrenwörtliche Versicherung
Diese Dissertation wurde selbständig, ohne unerlaubte Hilfe erarbeitet.

München, am 22.12.2009
…………………………………………………………………
Christian Karl Pfaller





Dissertation eingereicht am: 22.12.2009
1. Gutachter: Prof. Dr. Karl-Klaus Conzelmann
2. Gutachter: Prof. Dr. Karl-Peter Hopfner
Mündliche Prüfung am: 25.02.2010



"Thought alone is without profit;
It is much better to study."
Chinesisches Sprichwort



Danksagung
Allen voran danke ich Herrn Prof. Dr. Karl-Klaus Conzelmann, in dessen Labor
diese Arbeit entstanden ist. Er hat es in jeder Situation verstanden, mich und diese
Arbeit zum Ziel zu führen und hat mir stets Gelegenheit zur persönlichen
Entfaltung gegeben.
Ganz herzlich danke ich Herrn Prof. Dr. Karl-Peter Hopfner, der sich ohne zu
zögern bereit erklärt hat, diese Arbeit vor der Fakultät zu vertreten und als
Zweitgutachter aufzutreten.
Ich danke den Herren Prof. Dr. Roland Beckmann, Prof. Dr. Klaus Förstemann, Prof.
Dr. Patrick Cramer und Dr. Dietmar Martin für ihre Bereitschaft, die
Promotionskommission zu bilden.
Ich danke meiner Arbeitsgruppe für die aufregenden vier Jahre zwischen Humor
und Wahnsinn. Laetitia, hab‘ Dank für die exzellente Zusammenarbeit im
Autophagie-Projekt und die schönen Stunden mit „Wein und Käse“ aus Frankreich.
Merci bien! Anika, dir danke ich für die erbaulichen Busfahrtdiskussionen, die mich
immer wieder aufgerichtet haben, wenn’s mal nicht so gut war. Nadin, dir danke
ich für deine unersetzliche Kompetenz im Tollwut-Rescue und die viele Hilfe, die
du mir geboten hast. Alex, Kerstin, Lisa und Martina danke ich für die schöne
Atmosphäre im Labor. Ich danke auch allen, die uns in der Zwischenzeit verlassen
haben: Kris, Yvonne und Christine; sowie Adriane, die in der Zeit des Paper- und
Zusammenschreibens meine Leidensgenosin war. Dank auch an meine
„Praktikanten“ Konstantin und Dominik Z., die wichtige Teile zu dieser Arbeit
während ihrer Bachelorarbeit bzw. ihrem Praktikum beigetragen haben.
Ich danke den Jungs meiner DSA-Runde, Daniel, Ben, Benno und Konstantin, die
mich immer zur richtigen Zeit auf andere Gedanken gebracht haben. Besonders du,
Daniel, hast dich in den letzten Jahren zu einem wichtigen Freund entwickelt.
Schließlich danke ich meiner Mutter Elfriede, meinem Bruder Michael, sowie Horst
dafür, dass sie während der langen Zeit des Studiums bis heute immer für mich da
waren, mich allzeit unterstützt haben und stets ein offenes Ohr für meine
Probleme hatten, aber auch mit mir meine Freude geteilt haben. SUBVERSION OF TOLL-LIKE RECEPTOR 7/9 SIGNALING
BY MEASLES VIRUS − V HOLDS THE KEY




Contents
List of publications ......................................................................................................................................... viii
List of abbreviations .......................................................................... ix
List of figures and tables ................................................................ xii
1 Introduction .................................................................................. 1
1.1 Measles virus....................................................................................................................................... 1
1.1.1 Taxonomy and molecular basics of measles virus ..................................................... 1
1.1.2 Pathogenicity and control of measles virus .................................................................. 5
1.2 Immune response to measles virus infection ....................................................................... 7
1.2.1 The Interferon system of the innate immune response .......................................... 7
1.2.2 MV specific adaptive immune response ...................................................................... 13
1.2.3 Immunosuppression and immune antagonistic functions of MV .................... 15
1.3 Aims of this thesis ......................................................................................................16
2 Materials and Methods .......................................................... 17
2.1 Materials ............................................................................. 17
2.1.1 Chemicals ................................................................... 17
2.1.2 Kits ............................................................................................................................................... 19
2.1.3 Enzymes ..................................................................... 20
2.1.4 Recombinant proteins and peptides ............................................................................. 20
2.1.5 Antibodies ................................................................. 20
2.1.6 Oligonucleotides .................................................................................................................... 21
2.1.7 Cell lines and media .............................................. 24
2.1.8 Viruses ........................................................................ 25
2.1.9 Plasmids and bacteria .......................................... 26
2.1.10 Buffers and solutions ........................................................................................................... 29
2.1.11 Equipment ................................................................. 33
2.1.12 Miscellaneous .......................................................... 34
2.2 Methods .............................................................................................................................................. 36
v SUBVERSION OF TOLL-LIKE RECEPTOR 7/9 SIGNALING
BY MEASLES VIRUS − V HOLDS THE KEY

2.2.1 Molecular biological methods .......................................................................................... 3 6
2.2.1.1 Cloning and mutagenesis .......................... 3 6
2.2.1.2 Working with bacteria ............................... 39
2.2.1.3 Plasmid preparation ................................... 40
2.2.1.4 Sequencing ..................................................................................................................... 41
2.2.1.5 RNA isolation.................................................. 41
2.2.2 Cell biological and virological methods ....................................................................... 41
2.2.2.1 Cell culture ....................................................... 41
2.2.2.2 Isolation and cultivation of bone marrow derived cells (BMDCs) .......... 42
2.2.2.3 Transfection .......................................................................... 43
2.2.2.4 Infection assays .............................................. 43
2.2.2.5 Generation of MV stocks ........................................................................................... 43
2.2.2.6 Gof RV stocks .............................................................. 44
2.2.2.7 Generation of recombinant RV (helper virus free) ....................................... 44
2.2.2.8 Titration of virus stocks ........................................................................................... 45
2.2.3 Biochemical and immunological methods ................................................................. 46
2.2.3.1 Luciferase reporter gene assays ........................................................................... 46
2.2.3.2 Co-Immunoprecipitation ......................................................................................... 46
2.2.3.3 Denaturating Polyacrylamid (PAA)-gel electrophoresis ............................ 47
2.2.3.4 Western blot (Semi dry method) .......................................................................... 48
2.2.3.5 Immunodetection ........................................................................................................ 48
2.2.3.6 Immunofluorescence (IF) ........................................................................................ 49
2.2.3.7 Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ............................................. 50
2.2.3.8 Expression and Ni-NTA purification of recombinant proteins from
bacteria ............................................................................................................................ 50
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