The role of guanine nucleotide exchange factors in the regulation of immune cell signaling [Elektronische Ressource] / vorgelegt von Jessica Grell

Jessica Grell

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• Publié par: rheinische_friedrich-wilhelms-universitat_bonn
• Publié le: 01 janvier 2009
• Nombre de lectures: 25
• Langue: English
• Poids de l'ouvrage: 3 Mo

Extrait

 
The role of guanine nucleotide 
exchange factors in the regulation of 
immune cell signaling 



Dissertation 
 
zur Erlangung des Doktorgrades (Dr. rer. nat.) 
der Mathematisch‐Naturwissenschaftlichen Fakultät 
der Rheinischen Friedrich‐Wilhelms‐Universität Bonn 
 
vorgelegt von 
 
Jessica Grell 
aus Gifhorn 
 
Bonn, April 2009  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Angefertigt  mit  Genehmigung  der  Mathematisch‐Naturwissenschaftlichen 
Fakultät der Rheinischen Friedrich‐Wilhelms‐Universität Bonn. 



 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
1. Referent: Prof. Dr. rer. nat. W. Kolanus 
2. Referent: Prof. Dr. rer. nat. M. Hoch 
 
eingereicht am: 28.04.2009 
Tag der Promotion: 10.06.2009 
 
Diese  Dissertation  ist  auf  dem  Hochschulschriftenserver  der  ULB  Bonn 
http://hss.ulb.unibonn.de/diss_online elektronisch publiziert. 
 Erklärung 
Diese  Dissertation  wurde  im  Sinne von § 4 der Promotionsordnung  vom  7.1.2004  im 
Zeitraum Januar 2006 bis April 2009 von Herrn Prof. Dr. rer. nat. W. Kolanus betreut. 
 
 
Eidesstattliche Erklärung 
Hiermit  versichere  ich,  dass  ich  die  vorliegende  Arbeit  ohne  unzulässige Hilfe Dritter 
und ohne Benutzung anderer als der angegebenen Hilfsmittel angefertigt habe; die aus 
fremden  Quellen  direkt  oder  indirekt  übernommenen  Gedanken  sind als solche 
kenntlich gemacht (gemäß § 6 der Promotionsordnung vom 7.1.2004). 
 
 
Bonn, den 
 
Jessica Grell 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Ein  Teil  der  vorliegenden  Arbeit  wurde  in  folgender  Originalpublikation 
veröffentlicht: 
Quast, T., Tappertzhofen, B., Schild, C., Grell, J., Czeloth, N., Forster, R., Alon, R., Fraemohs, 
L., Dreck, K., Weber, C., Lämmermann, T., Sixt, M. and Kolanus, W. (2009). Cytohesin‐1 
controls  the  activation  of  RhoA  and  modulates  integrin‐dependent  adhesion  and 
migration of dendritic cells. Blood. 
 
Weitere Publikationen: 
Löer, B., Bauer, R., Bornheim, R., Grell, J., Kremmer, E., Kolanus, W. and Hoch M. (2008). 
The NHL‐domain protein Wech is crucial for the integrin‐cytoskeleton link. Nat Cell Biol 
10, 422 ‐ 428  
Grell, J., Paul, B., Windheim, M., Diehl, L., Beyer, M., Knolle, P., Famulok, M.,Schultze, J. and 
Kolanus, W. Cytohesin‐3 links B7H1 mediated Shut‐down of the PI3 Kinase Pathway to 
the Repression of IL‐2 Synthesis in Anergic T‐cells. manuscript in preparation. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 CONTENTS 
 
1.   Introduction ....................................................................................................................................... 1 
1.1   Immune cell signaling .................................................................................................................. 1 
1.2   T­cell receptor signal transduction ...................................................................................... 2 
1.2.1   T‐cell receptor complex .................................................................................................................. 3 
1.2.2   Signal transduction through the T‐cell receptor .................................................................. 6 
1.2.3   The guanine nucleotide exchange factor Vav‐1 ................................................................. 11 
1.2.4   Cytohesin‐1 functions as a novel signaling factor in T‐cell activation .................... 17 
1.3   Central signaling pathways in innate immunity ........................................................ 21 
1.3.1   The LPS signaling pathway ......................................................................................................... 23 
1.3.2   The pattern recognition receptor Dectin‐1 ......................................................................... 25 
1.3.3   The TNFalpha signaling pathway ............................. 27 
2.   Materials and Methods ................................................................................................. 32 
2.1   Materials ........................................................................................................................... 32 
2.1.1   Equipment ......................................................................................................................................... 32 
2.1.2   Consumables ...................................................................... 35 
2.1.3   Reagents .............................................................................. 36 
2.1.4    Kits ........................................................................................................................................................ 40 
2.1.5   Media, Sera and Buffer .................................................. 40 
2.1.6   Enzymes ............................................................................... 41 
2.1.7   Antibodies .......................................................................................................................................... 41 
2.1.8   Oligonucleotides and Plasmids .................................. 43 2.1.9   Bacteria strains ................................................................................................................................ 45 
2.1.10   Primary Cells ..................................................................... 45 
2.1.11   Cell lines ............................................................................... 46 
2.1.12   Mice ....................................................................................................................................................... 46 
2.2   Methods .............................................................................. 47 
2.2.1   Molecular cloning ............................................................ 47 
2.2.1.1   PCR ........................................................................................................................................................ 47 
2.2.1.2   DNA Precipitation ............................................................ 48 
2.2.1.3   Analysis of DNA by restriction digest .................................................................................... 48 
2.2.1.4   Purification of DNA fragments ................................... 48 
2.2.1.5