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Publié par | Salamanca |
Nombre de lectures | 65 |
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Langue | Español |
Poids de l'ouvrage | 33 Mo |
Extrait
EFECTO
DE
LA
ABLACIÓN
RESTRINGIDA
DE
LA
CORTEZA
AUDITIVA
SOBRE
EL
COLÍCULO
INFERIOR
EN
LA
RATA
TESIS
DOCTORAL
Cheryl
Clarkson
Paredes
Instituto
de
Neurociencias
Castilla
y
León
EFECTO
DE
LA
ABLACIÓN
RESTRINGIDA
DE
LA
CORTEZA
AUDITIVA
SOBRE
EL
COLÍCULO
INFERIOR
EN
LA
RATA
Memoria
presentada
por
Cheryl
Clarkson
Paredes
para
optar
al
grado
de
Doctor
pot
la
Universidad
de
Salamanca
Director:
Prof.
Dr.
Miguel
Merchan
Cifuentes
Salamanca,
2009
Dr.
MIGUEL
MERCHÁN
CIFUENTES,
CATEDRÁTICO
DEL
DEPARTAMENTO
DE
BIOLOGÍA
CELULAR
Y
PATOLOGÍA
DE
LA
UNIVERSIDAD
DE
SALAMANCA
CERTIFICA
Que
la
tesis
doctoral
titulada:
EFECTO
DE
LA
ABLACIÓN
RESTRINGIDA
DE
LA
CORTEZA
AUDITIVA
SOBRE
EL
COLÍCULO
INFERIOR
EN
LA
RATA
Es
el
trabajo
de
investigación
realizado
por
Dña.
Cheryl
Clarkson
Paredes
bajo
mi
dirección
durante
los
últimos
cuatro
años.
La
memoria
de
este
estudio
recoge
un
análisis
exhaustivo
y
detallado
de
los
cambios
postlesionales
a
largo
plazo
en
el
Colículo
inferior
tras
ablación
de
la
corteza
auditiva.
Los
datos
presentados
en
esta
memoria
constituyen
una
aportación
original
y
han
permitido
un
avance
significativo
en
el
conocimiento
de
la
plasticidad
postlesional
en
el
sistema
auditivo
adulto.
Por
todo
ello,
consideró
que
esta
tesis
reúne
la
calidad
y
rigor
científicos
necesarios
para
que
sea
defendida
en
la
Universidad
de
Salamanca
como
requisito
para
que
Dña.
Cheryl
Clarkson
Paredes
opte
al
grado
de
Doctor
por
la
Universidad
de
Salamanca.
Y
para
que
así
conste,
firmo
el
presente
certificado
en
Salamanca
a
26
de
octubre
de
2009.
Prof.
Miguel
Merchán
Cifuentes
AGRADECIMIENTOS
A
mis
padres,
por
su
apoyo
incondicional
en
todas
mis
quimeras,
desplazamientos
e
ideas,
porque
nunca
me
han
cuestionado
de
forma
negativa
y
porque
siempre
han
sido
el
pilar
que
me
sostiene.
Aunque
en
estos
momentos
por
la
distancia
la
comunicación
es
menos
física,
siempre
están
presentes
para
mí,
y
cada
pequeño
logro
mío
es
un
gran
logro
para
ellos.
A
mis
hermanas
y
a
mi
sobrina,
porque
han
sido
mi
polo
a
tierra,
y
me
han
acompañado
en
cada
pasito
que
he
ido
dando
en
este
largo
camino
recorrido,
ayudándome
a
levantar
cuando
las
fuerzas
flaquearon.
A
mi
tutor
de
tesis
doctoral,
Dr.
Miguel
Merchán,
porque
me
ha
formado
como
investigadora,
y
porque
sus
pequeños
vicios
investigativos
serán
también
siempre
mis
investigativos.
Agradecerle
su
paciencia
y
tranquilidad
para
guiarme
por
el
camino
de
las
Nerurociencias
y
por
enseñarme
que
todavía
me
queda
mucho
por
aprender.
A
Nacho,
porque
además
de
ser
el
mejor
técnico
que
una
doctoranda
puede
desear,
es
el
mejor
psicólogo,
amigo
y
en
muchas
ocasiones
paño
de
lágrimas
que
alguien
con
mi
carácter
puede
tener.
A
Biviana
por
estar
ahí,
sea
de
día
o
de
noche,
de
lunes
a
domingo,
todo
el
mundo
necesita
una
verdadera
amiga
y
compañera
de
laboratorio
así,
sobre
todo
cuando
tenemos
lejos
a
nuestras
familias,
nos
convertimos
en
una
pequeña
familia,
por
tal
razón
también
le
agradezco
a
todos
aquellos
amigos
“salmantinos”
que
me
han
acompañado
a
lo
largo
de
estos
años,
a
Jonny,
a
Inés,
a
Melissa,
a
Mónica
y
a
Eve.
A
Lita,
por
ayudarme
siempre
en
todo
lo
que
he
necesitado,
no
solo
a
nivel
científico
sino
también
como
persona,
gracias
por
comprender
que
a
veces
se
necesita
el
toque
femenino.
A
todos
los
que
trabajan
en
el
Incyl
en
sistema
auditivo,
porque
son
las
personas
con
las
que
comparto
el
día
a
día
investigativo,
Flora,
Marco,
Manolo,
Olga,
Orlando,
Med,
Tao,
Auxi,
Verónica,
a
todos
los
integrantes
del
laboratorio
del
Dr.
López‐Poveda,
por
ayudarme
siempre
cuando
lo
necesite,
incluso
cuando
el
tiempo
apremiaba.
Al
Dr.
Arévalo
y
a
Javier
Herrero
por
su
invaluable
ayuda
profesional.
No
quiero
olvidarme
de
nadie,
por
eso
les
agradezco
infinitamente
a
todos
aquellos
que
de
forma
directa
o
indirectamente
hayan
aportado
un
granito
de
arena
para
que
yo
pudiese
cumplir
esta
meta.
GRACIAS!
ÍNDICE
PREÁMBULO...........................................................................................1
INTRODUCCIÓN
El
Colículo
Inferior:
Citoarquitectura
y
Conexiones......................................9
Vía
Auditiva
Ascendente
al
Colículo
inferior........................................................9
Vía
Auditiva
Descendente
al
colículo
inferior.....................................................12
Conexiones
comisurales
y
conexiones
intrínsecas
o
locales...............................15
Proyecciones
de
las
subdivisiones
del
Colículo
Inferior......................................16
Reflejo
Acústico
del
Sobresalto
e
Inhibición
Por
Estímulo
Previo................17
c‐Fos.....................................................................................................19
Calcio
y
Calretinina.................................................................................20
Receptores
Ionotrópicos
de
Glutamato....................................................22
Plasticidad
Neuronal
y
cambios
postlesionales
en
el
Colículo
Inferior..........25
HIPÓTESIS
Y
OBJETIVOS
Hipótesis
de
trabajo................................................................................35
Objetivos...............................................................................................35
MATERIALES
Y
MÉTODOS
Grupos
experimentales...........................................................................39
Procedimientos
Quirúrgicos....................................................................41
Lesión
de
las
Cortezas
Auditivas
(Áreas
primaria
y
secundarias)......................41
Lesión
en
Cortezas
no
auditivas........................................................................43
Inyección
del
Trazador
neuroanatómico...........................................................43
Extracción
de
los
Colículos
inferiores
para
las
técnicas
de
análisis
molecular
y
genómico.........................................................................................................43
Respuestas
auditivas
del
tronco
cerebral
(ABRs).......................................46
Tipo
de
estudio.................................................................................................46
Reflejo
Auditivo
del
Sobresalto
(RAS)
–
Inhibición
Por
Estímulo
Previo
(IPP).........47
Condiciones
iniciales.........................................................................................47
Sistema
de
medición
del
Reflejo
Auditivo
de
Sobresalto...................................47
Procedimiento
de
análisis
del
RAS/IPP..............................................................48
Análisis
estadístico
para
los
valores
del
RAS/IPP...............................................48
Estimulación
Auditiva.............................................................................50
Técnicas
Histológicas..............................................................................51
Procedimientos
de
Fijación
y
Corte...................................................................51
Métodos
de
Tinción..........................................................................................52
• Revelado
del
trazador
Neuroanatómico
Dextrano
Biotinado.................52
• Revelado
inmunohistoquímico
para
SMI‐32...........................................52
• Revelado
inmunohistoquímico
para
c‐Fos.............................................52
• Revelado
inmunohistoquímico
para
Calretinina....................................54
• Tinción
con
Nissl...................................................................................54
Métodos
de
Análisis................................................................................58
Análisis
Morfométrico
y
de
ubicación
de
las
lesiones
en
la
Corteza
Auditiva......58
Representación
gráfica
de
las
lesiones
en
cada
uno
de
los
casos
experimentales‐
Lesión
corteza
auditiva
y
regiones
no‐auditivas................................................60
Análisis
de
la
inmunotinción
para
c‐Fos............................................................60
• Cálculo
del
número
de
núcleos
c‐Fos
positivos
(estereología)................60
• Morfometría
y
densitometría
para
c‐