III) Protéines recombinantes en système hétérologue

Maried

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• Publié par: awobucyk
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Extrait

III) Protéines recombinantes en système hétérologue

Définition

Protéines recombinantes =

protéines produites par des cellules dont l'ADN a été modifié par recombinaison génétique

•

•

Facteurs importants pour la production

Intérêt de produire des protéines recombinantes / protéines natives?

 

ADN

introns

ARN transcription

ARNm

protéine

traduction

Eucaryotes 

ADN

ARN

ARN

transcription

protéine traduction

Procaryotes (bactéries)

Différence euc/proc : chez eucaryotes : présence dintrons Pour cloner lADN eucaryote : pas possible dutiliser lADN génomique

  

Pour le clonage en vue de lobtention dune protéine recombinante on doit utiliser lARNm

Si la protéine nest exprimée que dans certains tissus : on doit récupérer lARNm à partir de ces cellules

Conversion ARNm en ADN : Utilisation de la technique de RT-PCR

amorce

’ 5

ADN à cloner

Sites de restrictions pour des enzymes (intégrés grâce aux amorces de PCR)

’ …ATCGGGTTTAAGGCCC …. 3

GAATTCATCGGGTTTAACCGGG

’ 3

…TAGCCCAAATTGGCCC …. 5 ’