Normalización y evaluación del inmunoensayo ABICAP-BRU para el diagnóstico serológico de la Brucelosis Bovina

Eva

Description

El diagnóstico de la brucelosis bovina en los programas de control y erradicación de esta enfermedad se fundamenta en el pesquisaje serológico mediante pruebas convencionales e inmunoensayos que identifican diferentes isotipos de anticuerpos. En este trabajo se realizó la normalización y evaluación de un método rápido para la detección de anticuerpos contra Brucella en suero bovino, basado en la tecnología ABICAP. En la normalización se determinaron las concentraciones óptimas del antígeno (22 µg/mL), el conjugado (4,7 µg/mL) y
la dilución de los sueros controles (1:200) para conformar el sistema ABICAP-BRU. La sensibilidad analítica se
estableció en la dilución 1:128. Se estimaron la Repetibilidad intra e interensayo con el empleo de 3 sueros
(positivo alto, positivo débil y negativo) en 15 réplicas de cada uno en un mismo ensayo y en 15 ensayos diferentes, con la obtención de valores de absorbancia de los tres sueros entre 1,579 ± 0,04 y 0,139 ± 0,002 con un CV menor del 15 evaluación del primer inmunoensayo rápido con la tecnología ABICAP para el diagnóstico junto al animal de la brucelosis bovina en nuestro país. %. En la evaluación se investigaron 570 muestras de suero (213 sueros de animales infectados y 357 sueros de animales no infectados) y se determinaron los siguientes parámetros: el Valor de Corte (VC) en porcentaje de positividad (PP), la Sensibilidad y la Especificidad diagnósticas (Sd y Ed), los Valores Predictivos Positivos y Negativos (VPP y VPN), la Sensibilidad y la Especificad relativas (Sr y Er), el índice kappa (k) y la eficacia mediante el programa Win Episcope 2.0 con un nivel
de confianza del 95 %. El ABICAP-BRU presentó una Sd del 99,5 % y una Ed del 98,6 % en correspondencia con un VC de 30 PP. El VPP fue del 97,7 % y el VPN fue del 99,7 %. La Sr del ABICAP-BRU con las pruebas Rosa de Bengala (RB) y el ELISA DAVIH BRU2 fueron del 99,5 % y 97,7 %, respectivamente. La Er del sistema con RB fue de 98,6 % y de 98,5 % con el ELISA. El índice k del ABICAP-BRU/RB fue de 0,98 y del ABICAP-BRU/ELISA fue de 0,96.

Sujets

• Brucelosis bovina

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• Publié par: erevistas
• Publié le: 01 janvier 2007
• Nombre de lectures: 23
• Langue: Español

Extrait

REDVET. Revista electrónica de Veterinaria 1695-7504
2007 Volumen VIII Número 4

REDVET Rev. electrón. vet. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet
Vol. VIII, Nº 4, Abril/2007– http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n040407.html
Normalización y evaluación del inmunoensayo ABICAP-BRU para
el diagnóstico serológico de la Brucelosis Bovina

Eva E. Ortiz Losada MSc, Eladio Silva Cabrera Dr. C., Maricela Izquierdo
Marquéz MSc
Centro de Investigaciones Científicas de la Defensa Civil, Carretera de
Jamaica y Autopista Nacional, San José de Las Lajas, La Habana, Cuba


REDVET: 2007, Vol. VIII Nº 4

Recibido: 16.01.2007 / Referencia: 040712 / Aceptado: 30.01.2007 /Publicado: 01.04.2007

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RESUMEN %. En la evaluación se investigaron 570
muestras de suero (213 sueros de
El diagnóstico de la brucelosis bovina en animales infectados y 357 sueros de
los programas de control y erradicación animales no infectados) y se
de esta enfermedad se fundamenta en el determinaron los siguientes parámetros:
pesquisaje serológico mediante pruebas el Valor de Corte (VC) en porcentaje de
convencionales e inmunoensayos que positividad (PP), la Sensibilidad y la
identifican diferentes isotipos de Especificidad diagnósticas (Sd y Ed), los
anticuerpos. En este trabajo se realizó la Valores Predictivos Positivos y Negativos
normalización y evaluación de un (VPP y VPN), la Sensibilidad y la
método rápido para la detección de Especificad relativas (Sr y Er), el índice
anticuerpos contra Brucella en suero kappa (k) y la eficacia mediante el
bovino, basado en la tecnología ABICAP. programa Win Episcope 2.0 con un nivel
En la normalización se determinaron las de confianza del 95 %. El ABICAP-BRU
concentraciones óptimas del antígeno presentó una Sd del 99,5 % y una Ed
(22 µg/mL), el conjugado (4,7 µg/mL) y del 98,6 % en correspondencia con un
la dilución de los sueros controles VC de 30 PP. El VPP fue del 97,7 % y el
(1:200) para conformar el sistema VPN fue del 99,7 %. La Sr del
ABICAPABICAP-BRU. La sensibilidad analítica se BRU con las pruebas Rosa de Bengala
estableció en la dilución 1:128. Se (RB) y el ELISA DAVIH BRU2 fueron del
estimaron la Repetibilidad intra e 99,5 % y 97,7 %, respectivamente. La
interensayo con el empleo de 3 sueros Er del sistema con RB fue de 98,6 % y
(positivo alto, positivo débil y negativo) de 98,5 % con el ELISA. El índice k del
en 15 réplicas de cada uno en un mismo ABICAP-BRU/RB fue de 0,98 y del
ensayo y en 15 ensayos diferentes, con U/ELISA fue de 0,96. El
la obtención de valores de absorbancia sistema mostró una eficacia del 98,9 %.
de los tres sueros entre 1,579 ± 0,04 y Los resultados obtenidos permiten
0,139 ± 0,002 con un CV menor del 15 concluir que se logró la normalización y
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Normalización y evaluación del inmunoensayo ABICAP-BRU para el diagnóstico serológico de la
Brucelosis Bovina
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REDVET. Revista electrónica de Veterinaria 1695-7504
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evaluación del primer inmunoensayo
rápido con la tecnología ABICAP para el Palabras clave: brucelosis bovina |
diagnóstico junto al animal de la diagnóstico serológico | tecnología
brucelosis bovina en nuestro país. ABICAP |



SUMMARY screened. The performance parameters
were determined: the Cut-off value
The diagnosis of bovine brucellosis for expressed as percentage of positivity
the control and eradication of this (%P cut-off), the diagnostic sensitivity
disease is supported on the serological (D-Sn) and diagnostic specificity (D-Sp),
screening using conventional serological the predictive positive and negative
tests and immunoassays which identify values (PP, PN), the relative sensitivity
different antibody isotypes. This work and specificity (Sn and Sp), the Kappa
presents data on the standardization and index (k); efficacy was measured by
evaluation of a rapid method developed means of the Episcope 2.0 Software, at
for the detection of anti-Brucella 95 % accuracy level. The ABICAP-BRU
antibodies in bovine sera, based on the system showed a D-Sn of 99.5 % and a
ABICAP technology. When D-Sp of 98.6 % in correspondence with a
standardization was performed, the 30 %P cut-off value. The PP value was
optimum concentration of antigen 97.7 % and the PN one was 99,7%. The
(22µg/mL) and conjugate (4,7 µg/mL) relative Sn of the ABICAP-BRU system
was determined, as well as sera control when applied with the Bengale Rose test
dilution (1:200). The analytical (BR) and the DAVIH BRU2 ELISA was
sensitivity was established in the dilution 99.5 % and 97,7 % respectively, while it
1:128. The intra-and inter-assay showed a Sp value of 98,6 % with the
repeatability were estimated using three Bengal Rose test, and 98,5 % with the
sera (high positive, weak positive, and a ELISA. The k index ABICAP-BRU/Bengal
negative one). Each serum was tested Rose was 0.98 and the
ABICAPon 15 replicates of each of them, in a BRU/ELISA 0.96. The system showed an
single assay, and in 15 separate efficacy of 98,9 %. The results obtained
occasions. Absorbance values ranged allow us to conclude that the process of
from 1,579 ± 0,04 to 0,139 ± 0,002 standardization and evaluation of the
and the coefficient of variation (CV) was first rapid immunoassay based on the
less than 15 %. A total of 570 sera ABICAP technology for the diagnosis of
samples (213 from infected animals and bovine brucellosis under field conditions
357 from non-infected ones) were in our country was achieved.



INTRODUCCIÓN

La brucelosis es una enfermedad infectocontagiosa producida por bacterias del género
Brucella. Estas bacterias afectan a varias especies de animales domésticos y de vida
salvaje, además, se transmiten ocasionalmente al hombre. En la actualidad se considera
entre las principales zoonosis de distribución mundial, debido a su gran impacto en la
economía de los países y en la salud pública (Corbel, 1997; López, 2002).

En la industria pecuaria la brucelosis produce pérdidas económicas por abortos, muerte de
terneros y disminución de la producción de leche, entre otros. Además, la presencia de
esta zoonosis afecta el comercio internacional por la pérdida de los mercados. La
enfermedad en el hombre provoca gastos en medicamentos, una disminución en el
rendimiento físico e intelectual e incluso puede conllevar a la muerte (Chin y Ascher,
2001; Samartino, 2002).
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En el continente americano algunos países como Canadá y Belice han logrado la
erradicación de esta enfermedad por medio de programas de control y vacunación de los
animales domésticos (Suárez, 2002).

En nuestro país, en 1964, se estableció el Programa para el Control y la Erradicación de la
brucelosis. En un principio, con el propósito de disminuir la tasa de incidencia de esta
enfermedad en la masa bovina, se realizó el sacrificio de todos los animales positivos por
las pruebas serológicas y se procedió al saneamiento ambiental del área. A partir de 1980
se comenzaron a vacunar las hembras adultas con la dosis reducida de la vacuna de
Brucella abortus cepa 19 para mejorar el estado epizoótico de los rebaños y más adelante
se extendió la vacunación a todas las hembras sin tener en cuenta su estado reproductivo
(Cotrina y Fernández, 1991; Vera et al., 1999; Seoane y Toledo, 2004).

En los últimos años el programa se ha perfeccionado con el estudio bacteriológico de los
abortos y las placentas, de los animales procedentes de hatos libres en los que no esta
claro el origen del aborto y de esta forma se ha logrado el aislamiento de B. abortus biovar
1 y B. suis biovares 1 y 2 (Sánchez et al. 1989; Martín, 1997). La confirmación del
diagnóstico bacteriológico por su elevada sensibilidad se realiza mediante la prueba
biológica en curieles (Vera et al., 1999; Martín y Peñate, 200