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Actividad antioxidante in vitro del extracto de metanol de los rizomas de Curculigo orchioides Gaertn (In vitro antioxidant activity of methanol extract of rhizomes of Curculigo orchioides Gaertn)

De
14 pages
g/ml) and in inhibition of lipid peroxidation (IC50 94.78 ìg/ml). Methanol extract showed different levels of antioxidant activities in tested models. It also supported anti oxidant activity by showing significant reducing power. Further HPTLC finger print profile of the methanol extract was established to facilitate its identification and characterization. Present study demonstrated antioxidant activity of methanol extract of Curculigo orchioides in-vitro.
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ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO DEL EXTRACTO DE METANOL DE LOS RIZOMAS DE CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN 125
IN VITRO ANTIOXIDANT ACTIVITY OF METHANOL EXTRACT OF RHIZOMES OF CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN
Actividad antioxidante in vitro del extracto
de metanol de los rizomas de Curculigo
orchioides Gaertn
In vitro antioxidant activity of methanol extract of rhizomes of Curculigo
orchioides Gaertn
BAFNA AR Y MISHRA SH*
Departamento de Farmacia, Facultad de Tecnología e Ingeniería,
The M.S.University of Baroda, Vadodara-390002, Gujarat, India
*Dirección para correspondencia: Dr.S.H.Mishra. Pharmacy department, Faculty of Technology
and Engineering, The M.S.University of Baroda, Vadodara-390002. Gujarat, India.
Correo electrónico:shmishra48@rediffmail.com
RESUMEN
Se analizó la actividad antioxidante in vitro del extracto de metanol de Curculigo orchioides mediante
ensayo DPPH, barrido de superóxido, barrido de óxido nítrico, determinación del poder reductor y
peroxidación lipídica in vitroin vitroin vitroin vitroin vitro.....
El extracto de metanol resultó ser extremadamente eficaz en el barrido del radical superóxido (IC 29.28
50
ìg/ml), mientras que la actividad fue moderada en el barrido del radical DPPH (IC 105.94 105.94 µg/ml), el
50
radical de óxido nítrico (IC 90.96 µg/ml) y la inhibición de la peroxidación lipídica (IC 94.78 µg/
50 50
ml). El extracto de metanol presentó distintos niveles de actividad antioxidante en los modelos anali-
zados. También apoyó la actividad antioxidante al presentar un poder reductor significativo. Para faci-
litar su identificación y caracterización, se estableció un perfil de huella de cromatografía de capa fina
de alto rendimiento (HPTLC) adicional del extracto de metanol.
El presente estudio ha demostrado la actividad antioxidante in vitro in vitro in vitro in vitro in vitro del extracto de metanol de Curculigo
orchioides.
PALABRAS CLAVE: Actividad antioxidante. DPPH. Superóxido. Poder reductor.
ABSTRACT
Methanol extract of Curculigo orchioides was screened for in- vitroin- vitroin- vitroin- vitroin- vitro antioxidant activity using DPPH
assay, superoxide scavenging, nitric oxide scavenging, determination of reducing power and in-vitro
lipid peroxidation.
Methanol extract was found to be extremely effective in scavenging superoxide radical (IC 29.28 29.28 µg/50
ml) whereas activity was moderate in scavenging DPPH radical (IC 105.94 µg/ml), nitric oxide radical
50
(IC 90.96 µg/ml) and in inhibition of lipid peroxidation (IC 94.78 ìg/ml). Methanol extract showed
50 50
different levels of antioxidant activities in tested models. It also supported anti oxidant activity by
showing significant reducing power. Further HPTLC finger print profile of the methanol extract was
established to facilitate its identification and characterization.
Present study demonstrated antioxidant activity of methanol extract of Curculigo orchioides in-vitro.
KEY WORDS: Antioxidant activity. DPPH. Superoxide. Reducing power.
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.BAFNA AR, MISHRA SH126
INTRODUCCIÓN INTRODUCTION
Las evidencias experimentales sugieren que Experimental evidence suggests that free
los radicales libres (RL) y las especies reacti- radicals (FR) and reactive oxygen species
vas de oxígeno (ERO) pueden estar relacio- (ROS) can be involved in high number of
1 1nadas con un gran número de enfermedades . diseases . As plant produce lot of chemical
Como las plantas producen gran cantidad de moieties as antioxidants to control oxidative
fracciones químicas que actúan como antioxi- stress caused by sunbeams and oxygen, these
dantes para controlar el estrés oxidativo cau- can serve as source of new antioxidant com-
sado por la radiación solar y el oxígeno, pue- pounds. Ayurveda, an ancient Indian system
den servir de fuente para la obtención de of medicine, follow in prevention and treat-
nuevos compuestos antioxidantes. En la me- ment of various diseases a group of large
dicina ayurveda, un antiguo sistema medici- number of medicinal plants which are consi-
nal indio, se utilizan, como una de las espe- dered active due to chemical constituents and
cialidades clínicas para la prevención y el are designated as ‘Rasayana’ as one of the
tratamiento de diversas enfermedades, un gran clinical specialties. Rasayana is not only a drug
número de plantas medicinales que se consi- therapy but is a specialized procedure practi-
deran activas debido a su composición quími- ced in the form of rejuvenating recipes, die-
ca y que se denominan ‘Rasayana’. Rasayana tary regimen promoting good habits. The purpose
no es sólo una terapia farmacológica, sino un of rasayana is two-fold: prevention of disease
procedimiento especializado que se practica and counteracting aging process, which result
2en forma de recetas rejuvenecedoras y regí- from optimization of homeostasis . Sharma
menes dietéticos que promueven buenos há- et al. reported the strong antioxidant activity
3bitos. La finalidad de rasayana es doble: pre- shown by rasayana drugs . Around 34 plants
venir la enfermedad y contrarrestar el proceso are identified as Rasayanas in the Ayurvedic
4de envejecimiento resultante de la optimiza- system of medicine . These plants are descri-
2ción de la homeostasis . Sharma et al. han bed to possess various pharmacological pro-
publicado la fuerte actividad antioxidante que perties such as Immunostimulant, Tonic, Neu-
3presentan los fármacos rasayana . En el sis- rostimulant, Anti-ageing, Anti-bacterial,
tema de medicina ayurvédica se han identifi- Anti-viral, Anti-rheumatic, Anti-cancer, Adap-
4cado como rasayanas unas 34 plantas . Setogenic, Anti-stress etc. Among these plants
han descrito diversas propiedades farmacoló- enlisted, some have been specifically investi-
gicas de estas plantas, inmunoestimulantes, gated for their well demonstrated antioxidant
tonificantes, neuroestimulantes, antienvejeci- activity.
miento, antibacterianas, antivirales, antirreu- Curculigo orchioides Gaertn. (Family:
máticas, anticancerígenas, adaptogénicas, anti Amaryllidaceae) is small herb found in India
estrés, etc. Algunas de estas plantas se han in the sub tropical Himalayas from Kumaon
investigado específicamente por su bien de- eastwards and in the western ghats from konkan
mostrada actividad antioxidante. southwards. Its tuberous roots are considered
Curculigo orchioides Gaertn (familia: Ama- tonic, alterative, demulcent, diuretic and res-
5ryllidaceae) es una pequeña hierba que crece torative . Dried rhizomes of C. orchioides are
en India en el Himalaya subtropical desde used in Chinese traditional medicine as a to-
Kumaon hacia el este y en las montañas Ghats nic agent for treatment of decline in physical
6occidentales desde Konkan hacia el sur. Sus strength . It has been reported to have many
raíces tuberosas se consideran tónicas, curati- medicinal uses, and rhizomes are a compo-
5 7vas, emolientes, diuréticas y reconstituyentes . nent of several Ayurvedic preparations . It is
En la medicina tradicional china se utilizan claimed to be a medical cure for piles, asth-
rizomas secos de C. orchioides como agente ma, jaundice, diarrhoea, colic, gonorrhoea and
8tonificante para el tratamiento del deterioro to be a aphrodisiac .
6de la fuerza física . Se ha publicado que tie- There is paucity of data available on in-
nen numerosos usos medicinales, y sus rizo- vitro antioxidant activity of methanol extract
mas son un componente de varias preparacio- of C. orchioides. Therefore present work aims
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO DEL EXTRACTO DE METANOL DE LOS RIZOMAS DE CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN 127
IN VITRO ANTIOXIDANT ACTIVITY OF METHANOL EXTRACT OF RHIZOMES OF CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN
7nes ayurvédicas . Se cree que es una cura at studying effect of methanol extract of C.
médica para las hemorroides, el asma, la icte- orchioides in different in-vitro antioxidant
ricia, la diarrea, los cólicos y la gonorrea, y models.
8se cree que es afrodisíaca .
Los datos disponibles sobre la actividad
antioxidante in vitro del extracto de metanol METHODS
de C. orchioides son escasos. Por ello, el objeto
del presente trabajo es el estudio del efecto Plant material
del extracto de metanol de C. orchioides en
distintos modelos antioxidantes in vitro. Dried rhizomes of C. orchioides were co-
llected from local market of Baroda city, Gujarat
and authenticated in Botany Department of
MÉTODOS M.S.University, Baroda. Maceration of dried,
powdered rhizomes of C. orchioides at room
Material de la planta temperature for 72 hours afforded methanol
extract in 6.65% (w/w) yield. Methanol ex-
Se recolectaron rizomas secos de C. or- tract showed presence of alkaloids, phenolics
chioides en el mercado local de la ciudad de and tannins, saponins, steroids on phytoche-
Baroda, Gujarat, India, y se autenticaron en el mical screening.
Departamento de Botánica de la Universidad
M.S. University de Baroda, India. La macera-
C. orchioi- TLC finger print profile of methanol extractción de rizomas secos molidos de
des a temperatura ambiente durante 72 horas
permitió obtener el extracto de metanol con TLC finger print profile was established for
un rendimiento del 6.65% (p/p). El análisis methanol extract of C.orchioides using HP-
fitoquímico reveló la presencia de alcaloides, TLC. A stock solution (1mg/ml) of extract was
fenoles y taninos, saponinas y esteroides en prepared in methanol. Suitably diluted stock
el extracto de metanol. solution was spotted on pre-coated Silica gel
G60 F254 TLC plates using CAMAG Linomat
V Automatic Sample Spotter and the plates
Perfil de huella de cromatografía de capa fina were developed in solvent systems of diffe-
(TLC) del extracto de metanol rent polarities to resolve polar and non-polar
components of the extract. The plates were
El perfil de huella de TLC del extracto de scanned using TLC Scanner 3 (CAMAG) at
metanol de C.orchioides se estableció mediante 254 nm (absorbance/reflectance mode) and 366
cromatografía de capa fina de alto rendimien- nm (fluorescence/reflectance mode) and Rf
to (HPTLC). Se preparó una solución de al- values, spectra, λ and peak areas of resol-max
macenamiento (1 mg/ml) de extracto en me- ved bands were recorded. Relative percenta-
tanol. Unas gotas de la solución de ge area of each of bands was calculated from
almacenamiento, diluida adecuadamente, se co- peak areas. Developed chromatograms in di-
locaron sobre placas de TLC G60 F254 pre- fferent solvent systems were then sprayed with
viamente recubiertas de gel de sílice utilizan- phosphomolybdic acid regent to detect phe-
do un detector CAMAG Linomat V Automatic nolic compounds.
Sample Spotter, y las placas se desarrollaron
en sistemas de disolventes de distintas polari-
dades para resolver los componentes polares In-vitro antioxidant activity:
y no polares del extracto. Las placas se ana-
lizaron en un escáner TLC Scanner 3 (CA- Assay for antiradical activity with DPPH
MAG) a 254 nm (modo de absorbencia/re-
flectancia) y a 366 nm (modo de fluorescencia/ Antiradical activity was measured by a
reflectancia), y se registraron los valores de decrease in absorbance at 516 nm of a metha-
Rf, espectros, λ y picos de las bandas re- nolic solution of colored 1, 1, diphenyl picrylmáx
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.BAFNA AR, MISHRA SH128
sueltas. El área porcentual relativa de cada hydrazine brought about by sample. A stock
una de las bandas se calculó a partir de las solution of DPPH was prepared by dissolving
áreas pico. A continuación, los cromatogra- 4.4 mg in 3.3 ml methanol. Test medium in-
mas desarrollados en distintos sistemas de cludes 150ml of DPPH solution along with
disolventes se pulverizaron con reactivo de different concentration of samples in 3 ml
ácido fosfomolíbdico, para detectar compues- methanol. Blank was performed in the same
tos fenólicos. way with no sample added. Decrease in ab-
sorbance, in presence of sample was noted
after 15 minutes. IC was calculated as 50%
50
Actividad antioxidante in vitro: reduction in absorbance brought about by
9sample compared with blank . Curcumin was
Estudio de la actividad antirradical con DPPH used as standard.
La actividad antirradical se midió mediante
el descenso en la absorbancia a 516 nm de Assay for superoxide radical scavenging acti-
una solución metanólica de 1, 1, difenil picril vity
hidracina provocado por la muestra. Se pre-
paró una solución de almacenamiento de DPPH The assay was based on capacity of the
sample to inhibit blue formazon formation bydisolviendo 4.4 mg en 3.3 ml de metanol. El
medio de análisis incluye 150 ml de solución scavenging the superoxide radicals generated
DPPH junto con distintas concentraciones de in riboflavin-light-nitro blue tetrazolium (NBT)
muestras en 3 ml de metanol. El blanco se system. The reaction medium contains phos-
realizó de la misma manera, sin añadir ningu- phate buffer (pH 7.6) 2.5 ml, 100µl riboflavin
(20µg), 200µl EDTA (12mM), 100µl NBT (0.1na muestra. Después de 15 minutos, se regis-
tró el descenso en la absorbancia en presen- mg) and different concentration of sample
cia de la muestra. El IC se calculó como una contained in 100ml of methanol. The reaction
50
reducción del 50% en la absorbencia ocasio- was started by illuminating the reaction mix-
nada por la muestra en comparación con el ture for 5 minutes. The absorbance was mea-
9 sured at 590 nm. Blank was performed in theblanco . Como estándar se utilizó curcumina.
same way with 100ml of methanol instead of
test substance. IC was calculated as 50%
50
Estudio de la actividad de barrido de radica- reduction in absorbance brought about by
10les de superóxido sample compared with blank . Ascorbic acid
was used as standard.
El estudio se basó en la capacidad de la
muestra para inhibir la formación de forma-
zon azul mediante el barrido de los radicales Assay for nitric oxide scavenging activity
superóxido generados en el sistema riboflavi-
Nitric oxide was generated from sodiumna-luz-azul de nitrotetrazolio (NBT). El medio
de reacción contenía 2.5 ml de tampón fosfato nitroprusside and measured by Griess reac-
(pH 7.6), 100 µl de riboflavina (20 µg), 200 µl tion. Sodium nitroprusside in aqueous solu-
de EDTA (12 mM), 100 µl de NBT (0.1 mg) tion at physiological pH spontaneously gene-
y distintas concentraciones de muestra en 100 rates nitric oxide which interacts with oxygen
to produce nitrite ions which can be estimatedµl de metanol. Para iniciar la reacción, se ilu-
minó la mezcla de reacción durante 5 minutos. by use of Griess reagent. Scavengers of nitric
La absorbencia se midió a 590 nm. El blanco oxide compete with oxygen leading to redu-
se realizó de la misma manera, pero con 100 ced production of nitric oxide. Sodium nitro-
l de metanol en lugar de la sustancia de aná- prusside (5mM) in phosphate buffered saline
was mixed with different concentrations of testlisis. El IC se calculó como una reducción del50
50% en la absorbencia ocasionada por la muestra extracts dissolved in methanol and incubated
10en comparación con el blanco . Como están- at room temperature for 150 minutes. Blank
dar se utilizó ácido ascórbico. without test extract but equivalent amount of
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO DEL EXTRACTO DE METANOL DE LOS RIZOMAS DE CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN 129
IN VITRO ANTIOXIDANT ACTIVITY OF METHANOL EXTRACT OF RHIZOMES OF CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN
Estudio de la actividad de barrido del óxido methanol was conducted in an identical man-
nítrico ner. After incubation solutions were removed
and equal amount of Griess reagent (1% sul-
El óxido nítrico se generó a partir de nitro- phanilamide, 2% H PO and 0.1% naphthyle-
3 4
prusiato de sodio y se midió mediante la re- hylenediamine dihydrochloride). The absorban-
acción de Griess. El nitroprusiato de sodio en ce of the chromophore formed was read at
solución acuosa con pH fisiológico genera 546nm. IC was calculated as 50% reduction
50
espontáneamente óxido nítrico, que reacciona in absorbance brought about by sample com-
11con el oxígeno produciendo iones de nitrito pared with blank . Standard used was Curcu-
que se pueden estimar mediante el reactivo min.
de Griess. Los barredores de óxido nítrico
compiten con el oxígeno, ocasionando una
reducción en la producción de óxido nítrico. Determination of reducing power
El nitroprusiato de sodio (5 mM) en solución
salina de tampón fosfato se mezcló con dis- The reducing power of ME was determi-
12tintas concentraciones de extractos de análisis ned according to the method of Oyaizu .
disueltas en metanol e incubadas a temperatu- Samples were mixed with 5 ml phosphate buffer
ra ambiente durante 150 minutos. Se realizó (2M, pH 6.6) and 5 ml potassium ferricyanide
0el mismo proceso con el blanco sin muestra (1%), the mixture was then incubated at 50 C
pero con la cantidad equivalente de metanol. for 20 minutes, 5 ml trichloroacetic acid (10%)
Después se retiraron las soluciones de incu- was added an the mixture was centrifuged at
bación y una cantidad igual de reactivo Griess 4000 rev./ min. The upper 5 ml solution was
(1% sulfanilamida, 2% H PO y 0.1% naftile- then mixed with 5 ml distilled water and 1 ml
3 4
tilendiamida). La lectura de absorbencia del ferric chloride (0.1%). The absorbance was
cromóforo formado se realizó a 546 nm. El measured at 700 nm. Increased absorbance of
IC se calculó como una reducción del 50% the reaction mixture indicated increased redu-
50
en la absorbencia ocasionada por la muestra cing power. Ascorbic acid (0.3 mg) was used
11en comparación con el blanco . El estándar as standard.
utilizado fue curcumina.
Measurement of effect on lipid peroxidation
Determinación del poder reductor on rat liver homogenate
El poder reductor del ME se determinó por Rat liver homogenate was prepared by
12el método de Oyaizu . Se mezclaron las homogenizing the tissue in chilled Tris buffer
muestras con 5 ml de tampón fosfato (2 M, (10mM, pH 7.4) at a concentration of 10% w/
pH 6.6) y 5 ml de ferrocianuro potásico (1%); v; peroxidation was induced in liver tissue by
0a continuación, se incubó la mezcla a 50 C Iron-ADP complex in the presence of ascor-
durante 20 minutos, se añadieron 5 ml de ácido bic acid. The incubation medium constituted
tricloroacético (10%) y se centrifugó la mez- 0.5 ml of the liver homogenate (10% w/v),
cla a 4000 r. p. m. Seguidamente, se mezcla- 100 µM FeCl , 1.7 µM ADP, 500 µM of as-
3
ron 5 ml de solución superior con 5 ml de corbate and different concentrations of sam-
agua destilada y 1 ml de cloruro férrico (0.1%). ples in 2 ml of total incubation medium. The
0La absorbencia se midió a 700 nm. El aumen- medium was incubated for 20 min. at 37 C.
to de absorbencia de la mezcla de reacción Extent of lipid peroxidation was measured by
indicó un aumento de poder reductor. Como estimation of malondialdehyde (MDA) con-
13estándar se utilizó ácido ascórbico (0.3 mg). tent . Results were expressed in terms of
decrease in MDA formation by the sample
extract. Ascorbic acid was used as positive
control.
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.BAFNA AR, MISHRA SH130
Medición del efecto en la peroxidación lipídi- RESULTS AND DISCUSSION
ca en homogeneizado de hígado de rata
The participation of reactive oxygen spe-
El homogeneizado de hígado de rata se cies in etiology and physiopathology of hu-
preparó homogeneizando el tejido en tampón man disease, such as neurodegenerative di-
Tris frío (10 mM, pH 7.4) en una concentra- sorders, inflammation, viral infection,
ción al 10% p/v; la peroxidación del tejido autoimmune pathologies and digestive system
hepático se indujo mediante complejo hierro- disorders such as gastrointestinal inflamma-
ADP en presencia de ácido ascórbico. El medio tion and gastric ulcers is already evident. To
de incubación constituía 0.5 ml del homoge- understand role of these reactive oxygen spe-
neizado de hígado (10% p/v), 100 µM de FeCl , cies in several disorders and potential antioxi-3
1.7 µM de ADP, 500 µM de ascorbato y dis- dant protective effect of natural compounds
tintas concentraciones de muestras en 2 ml de on affected tissues are topics of high current
medio de incubación total. El medio se incu- interest. Initially it is necessary to investigate
0bó durante 20 min. a 37 C. El grado de pe- in-vitro antioxidant properties of any natural
roxidación lipídica se midió mediante la esti- product or drug to consider it as an antioxi-
mación del contenido de malondialdehído dant substance, followed by evaluation of its
13 14(MDA) . Los resultados se expresaron en antioxidant function in biological systems .
términos de descenso en la formación de MDA In the present attempt therefore antioxidant
en el extracto de la muestra. Como control activity of the methanol extract of rhizomes
positivo se utilizó ácido ascórbico. of C.orchioides was first evaluated in-vitro.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN In-vitro antioxidant activity:
La participación de especies de oxígeno DPPH is a stable free radical in aqueous or
reactivas en la etiología y fisiopatología de ethanol solution and accepts an electron or
enfermedades humanas tales como trastornos hydrogen radical to become a stable diamag-
15neurodegenerativos, inflamación, infección viral, netic molecule . In order to evaluate antioxi-
patologías autoinmunes y trastornos del siste- dant potency through free radical scavenging
ma digestivo tales como inflamación gastro- with the test samples, the change in the opti-
intestinal y úlcera gástrica, es ya evidente. Para cal density of DPPH radicals is monitored.
comprender el papel de estas especies de Hence, DPPH· is usually used as a substrate
oxígeno reactivas en diversos trastornos y el to evaluate antioxidative activity of antioxi-
16posible efecto protector antioxidante de los dants . Methanol extract showed a concen-
compuestos naturales en los tejidos afectados tration dependent antiradical activity by inhi-
son cuestiones de gran interés en la actuali- value of 105.99biting DPPH radical with an IC50
dad. Inicialmente, es necesario investigar in ìg/ml (Table 1). It showed two times less in-
vitro las propiedades antioxidantes de cual- hibitory activity on DPPH stable radical than
quier fármaco o producto natural antes de standard Curcumin which showed IC at 52.71
50
considerarlo una sustancia antioxidante, y µg/ml.
realizar a continuación una evaluación de su
14función antioxidante en sistemas biológicos .
Por tanto, en el presente estudio se ha
evaluado primero la actividad antioxidante in
vitro del extracto de metanol de rizomas de
C.orchioides.
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO DEL EXTRACTO DE METANOL DE LOS RIZOMAS DE CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN 131
IN VITRO ANTIOXIDANT ACTIVITY OF METHANOL EXTRACT OF RHIZOMES OF CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN
Actividad antioxidante in vitro:
El DPPH es un radical libre estable en
solución acuosa o de etanol y acepta un elec-
trón o un radical hidrógeno para convertirse
15en una molécula diamagnética estable . Para
evaluar la potencia antioxidante mediante el
barrido de radicales en las muestras del aná-
lisis, se registra la densidad óptica de los ra-
dicales DPPH. Por ello, el DPPH se utiliza
habitualmente como sustrato para evaluar la
16actividad antioxidante de los antioxidantes .
El extracto de metanol presentó una actividad
antirradical dependiente de la concentración
inhibiendo el radical DPPH con un valor IC50
de 105.99 µg/ml (Tabla 1). Su actividad inhi-
bitoria fue dos veces menor en el radical DPPH
estable que el estándar de curcumina, que
presentó un IC de 52.71 µg/ml.50
TABLA 1: Actividad antirradical del extracto de metanol de C.orchioides observada con DPPH.
TABLE 1.TABLE 1. Antiradical activity of methanol extract of C.orchioides observed with DPPH.
Muestras Concentración (µm/ml) % de inhibición IC (µm/ml)
50
Samples Concentration (µg/ml) % inhibition IC (µg/ml)50
25 4.503 ± 1.353
50 15.613 ± 3.447
Extracto de metanol 75 41.963 ± 2.153 105.99
Methanol extract 100 67.563 ± 1.032
200 83.780 ± 0.341
Curcumina
Curcumin 52.71
Los valores son la media ± E.S.M. de tres análisis replicados.
Values are mean ± S.E.M. of three replicate analyses.
Se sabe que el radical superóxido es muy Superoxide radical is known to be very
perjudicial para los componentes celulares, harmful to cellular components as precursor
17como precursor de especies de oxígeno más of more reactive oxygen species . Methanol
17reactivas . El extracto de metanol demostró extract was found as scavenger of superoxide
ser un barredor del radical superóxido gene- radical generated in riboflavin-NBT-light sys-
rado en el sistema riboflavina-NBT-luz in vi- tem in-vitro. IC value was found 29.28 µg/
50
tro. El valor de IC registrado fue de 29.28 ml. Superoxide scavenging activity of extract50
µg/ml. La actividad barredora del superóxido was comparable with standard ascorbic acid
del extracto fue comparable a la del estándar which showed IC value 23.52 µg/ml (Table
50
de ácido ascórbico, que presentó un valor de 2).
IC de 23.52 µg/ml (Tabla 2).
50
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.BAFNA AR, MISHRA SH132
TABLA 2:TABLA 2:TABLA TABLA 2:TABLA 2: 2: Actividad de barrido del aniones superóxido del extracto de metanol de C.orchioides
observada con un sistema de riboflavina-luz-NTB.
TABLE 2.TABLE 2. Superoxide anion scavenging activity of methanol extract of C.orchioides observed
with a riboflavin-light-NBT system.
Muestras Concentración (µm/ml) % de inhibición IC (µm/ml)50
SamplesSamplesSamplesSamplesSamples Concentration (µµµµµg/ml)g/ml)g/ml)g/ml)g/ml) % inhibition% inhibition% inhibition% inhibition% inhibition ICICICICIC ( ( ( ( (µµµµµg/ml)g/ml)g/ml)g/ml)g/ml)
5050505050
10 23.13 ± 0.680
20 47.93 ± 0.527
Extracto de metanol 30 50.61 ± 0.236 29.28
Methanol extract 40 60.82 ± 1.244
50 71.43 ± 1.178
Ácido ascórbico
Ascorbic acid 23.52
Los valores son la media ± E.S.M. de tres análisis replicados.
Values are mean ± S.E.M. of three replicate analyses.
Además de las especies de oxígeno reacti- In addition to reactive oxygen species, ni-
vas, el óxido nítrico también está implicado tric oxide is also implicated in inflammation,
18.en condiciones de inflamación, cáncer y otras cancer and other pathological conditions
18patologías . El extracto de metanol presentó Methanol extract showed moderate activity in
una actividad moderada en el barrido del óxido scavenging nitric oxide compared to standard
nítrico, en comparación con el estándar de Curcumin (Table 3).
curcumina (Tabla 3).
TABLA 3:TABLA 3: Actividad de barrido del óxido nítrico del extracto de metanol de C.orchioides.
TABLE 3.TABLE 3. Nitric oxide scavenging activity of methanol extract of C.orchioides.
MuestrasMuestrasMuestrasMuestrasMuestras Concentración (µµµµµm/ml)m/ml)m/ml)m/ml)m/ml) % de inhibición ICICICICIC ( ( ( ( (µµµµµm/ml)50
Samples Concentration (µg/ml) % inhibition IC (µg/ml)
50
60 43.28 ± 2.21
80 47.40 ± 2.56
Extracto de metanol 100 50.69 ± 1.00 90.96
Methanol extract 120 56.68 ± 1.09
140 65.82 ± 1.20
Curcumina
Curcumin 21.59
Los valores son la media ± E.S.M. de tres análisis replicados.
Values are mean ± S.E.M. of three replicate analyses.
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO DEL EXTRACTO DE METANOL DE LOS RIZOMAS DE CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN 133
IN VITRO ANTIOXIDANT ACTIVITY OF METHANOL EXTRACT OF RHIZOMES OF CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN
La medición de la capacidad reductiva se The measurement of reductive ability was
realizó mediante transformación de Fe3+-Fe2+ done by Fe3+-Fe2+ transformation in the pre-
en presencia de extracto de metanol y de es- sence of methanol extract and standard an-
12 12tándar antioxidante, ácido ascórbico . El poder tioxidant, ascorbic acid . The reducing power
reductor se asocia a la actividad antioxidante. is associated with antioxidant activity. As shown
Como se indica en la Tabla 4, el extracto de in Table 4, methanol extract showed reducing
metanol presentó un poder reductor compara- power comparable with standard at higher
ble al estándar a una concentración más ele- concentration i.e. at 15 mg/ml.
vada, de 15 mg/ml.
TABLA 4:TABLA 4: Determinación del poder reductor de distintas concentraciones de extracto
de metanol de C.orchioides
TABLE 4.TABLE 4.TABLE TABLE 4.TABLE 4. 4. Reducing power determination of different concentrations of methanol
extract of C.orchioides
Muestra Poder reductor de distintas concentraciones (mg/ml)
Sample Reducing powers of different concentrations (mg/ml).
Extracto de metanol 0.0 5.0 10.0 15.0
Methanol extract 0.028 ± 0.01 0.105 ± 0.13 0.258 ± 0.26 0.363 ± 0.10
Los valores son la media ± E.S.M. de tres análisis replicados.
Como estándar se utilizó ácido ascórbico (0.3 mg), con una lectura de 0.430 a 700 nm.
Values are mean ± S.E.M. of three replicate analyses.
Ascorbic acid (0.3 mg) was used as standard, giving a reading of 0.430 at 700 nm.
La peroxidación lipídica se inicia con el Lipid peroxidation is initiated by radicals
ataque de los radicales libres a los ácidos grasos attacking unsaturated fatty acids, and propa-
19insaturados, y se propaga mediante un ciclo gated by a chain reaction cycle . Since unsa-
19de reacción en cadena . Como los ácidos grasos turated fatty acids are most important compo-
insaturados son los componentes más impor- nents of biological membranes and impart
tantes de las membranas biológicas y aportan desirable properties upon the fluidity of cellu-
propiedades deseables a la fluidez de la es- lar membrane structure, the peroxidation of
tructura de la membrana celular, la peroxida- unsaturated fatty acids in biological membra-
ción de los ácidos grasos insaturados en las nes leads to disruption of membrane structure
20 - .membranas biológicas lleva a la aparición de and function . In particular O and OH in-
2
trastornos en la estructura y el funcionamien- duce various injuries to the surrounding or-
20 -. En concreto, el O y elto de la membrana gans and play a vital role in some clinical2
. - .OH inducen diversos daños en los órganos disorders. Therefore removal of O and OH2
circundantes y desempeñan una papel esen- is the most effective defense of the living body
21cial en algunos trastornos clínicos. Por tanto, against disease . Any compound —natural or
- .la eliminación de O y OH es la defensa más synthetic— with antioxidant properties might
2
eficaz del organismo vivo contra la enferme- totally or partially alleviate this damage. In
21dad . Todos los compuestos, naturales o sin- the present study methanol extract showed
téticos, que tengan propiedades antioxidantes potent inhibition of lipid peroxidation indu-
pueden aliviar total o parcialmente estos da- ced by Iron/ADP/Ascorbate complex in rat liver
ños. En el presente estudio, el extracto de homogenate, IC value was 94.78 µg/ml. It
50
metanol demostró una fuerte inhibición de la showed dose dependent inhibition of lipid
peroxidación lipídica inducida por el comple- peroxidation. Standard ascorbic acid showed
jo hierro/ADP/ascorbato en homogeneizado de IC value 30.05 µg/ml (Table 5).50
hígado de rata. El valor de IC fue 94.78 µg/
50
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.BAFNA AR, MISHRA SH134
ml. La inhibición de la peroxidación lipídica
era dosisdependiente. El estándar de ácido
ascórbico presentó un valor de IC de 30.05
50
µg/ml (Tabla 5).
TABLA 5:TABLA 5: Inhibición con extracto de metanol de C.orchioides de la peroxidación lipídica inducida por
un sistema de hierro/ADP/ascorbato en homogeneizado de hígado de rata.
TABLE 5.TABLE 5.TABLE 5.TABLE TABLE 5. 5. Inhibition of lipid peroxidation induced by iron/ADP/ascorbate system in rat liver
homogenate by methanol extract of C.orchioides
Muestras Concentración (µm/ml) % de inhibición IC (µm/ml)
50
Samples Concentration (µg/ml) % inhibition IC (µg/ml)
50
25 14.24 ± 0.77
50 24.33 ± 0.75
Extracto de metanol 75 39.93 ± 0.42 94.78
Methanol extract 100 51.14 ± 1.06
125 67.57 ± 1.08
Ácido ascórbico
Ascorbic acid 30.05
Los valores son la media ± E.S.M. de tres análisis replicados.
Values are mean ± S.E.M. of three replicate analyses.
En los últimos años, la cromatografía de In the past few years high performance thin
capa fina de alto rendimiento se ha revelado layer chromatography has emerged as a po-
como una herramienta potencial para una tential tool for rapid and useful phytochemi-
22, 23, 24evaluación fitoquímica rápida y útil de los cal evaluation of herbal drugs . TLC
22,23,24fármacos herbales . Para caracterizar el fingerprint profile established for methanol
extracto de metanol se ha utilizado el perfil extract to characterize it. Three solvent syste-
de huella de TLC. Para resolver todos los ms of different polarities are used to resolute
componentes presentes en la fracción se han all components present in fraction (Table 6
utilizado tres sistemas de disolventes de dis- and Fig. 1).
tintas polaridades (Tabla 6 y Fig. 1).
Ars Pharm 2005; 46 (2): 125-138.