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NOTA BREVE
AGUA DE COCO, OPUNTIA SP., LECHE Y SUS COMBINACIONES
PARA CRIOPRESERVAR SEMEN OVINO
COCONUT MILK, OPUNTIA SP., MILK AND THEIR COMBINATIONS FOR
CRYOPRESERVATION OF OVINE SEMEN
1 1 1 1Gutiérrez, A.J. , M.M. Palacios , C.J.A. Jiménez y G.J.A. Ramírez
1Facultad de Zootecnia. UACH. Apdo. Postal 4-28. C.P. 31031 Chihuahua, Chih. México.
Correo electrónico: jagual2208@hotmail.com
PALABRAS CLAVE ADICIONALES ADDITIONAL KEYWORDS
Congelamiento. Espermas vivos. Motilidad pro- Freezing. Spermatozoa live. Progressive motility.
gresiva. Blackbelly. Blackbelly.
RESUMEN
Se evaluó el agua de coco (AC), (Cocus coconut milk (Cocus nucifera) combinated with
nucifera) con leche de vaca (L) o nopal (N), cow milk (L) or Opuntia sp. (N), for cryopre-
(Opuntia sp.) para la criopreservación de semen servation of semen of a Blackbelly ram. Base
de un ovino Blackbelly. El diluyente base fue diluent was 50 percent coconut milk (AC) and 50
AC:citrato de sodio (2,9 p.100), 1:1, con 10, 20, percent sodium citrate (2.9 percent) added with
30, 40, 50, 60 ó 70 p.100 de L o N. Los tratamien- either 10, 20, 30, 40, 50, 60 and 70 percent SFB
tos fueron evaluados al diluir el semen a 35ºC, or AV. Fourteen treatments and a control were
finalizado el equilibramiento, al final de la conge- used. The progressive motility (MP) and live
lación y a las 48 h y 90 d poscongelación. Se sperm (EV) percentages were evaluated at se-
midieron la motilidad progresiva (MP) y men dilution, equilibrium time, immediately after
espermatozoides vivos (EV) p.100. Los datos se freezing and 48 h and 90 d after freezing. A
analizaron con un modelo de regresión múltiple multiple regression model was used for data
con intercepto cero. La MP para el tratamiento analysis. Treatment AC-L (10-70) had 70 percent
AC-L en proporción 10-70 a los 90 d fue de 70 of MP at 90 d, thus it was the best combination for
p.100 siendo esta combinación la mejor para este this extender. On the other hand, the best
diluyente. Respecto al N la mejor combinación fue combination for AC-N was 20-60 with 70 percent
20-60 (AC-N) con una MP de 70 p.100 a los 90 d. of MP at 90 d. In conclusion, long time semen
En conclusión, a menor cantidad de AC y mayor cryopreservation is feasible with the extenders
cantidad de diluyente (L o N) la MP es adecuada used.
para la preservación de semen a largo plazo.
INTRODUCCIÓN
SUMMARY
La preservación de semen a largo
The objective of this work was to evaluate plazo es una técnica importante en el
Arch. Zootec. 55 (209): 97-100. 2006.
12Notacriopreservacion1Gutierrez.p65 97 08/03/2006, 9:31GUTIÉRREZ, PALACIOS, JIMÉNEZ Y RAMÍREZ
mejoramiento genético de los rebaños. MATERIAL Y MÉTODOS
A través de los años se ha experimen-
tado con el agua de coco (Nunes, Lo trabajos se llevaron a cabo en
1986) sin poder establecer un protoco- Chihuahua, México. De un ovino
lo de congelamiento del todo eficiente, Blackbelly adulto se recolectaron 15
por lo que se planteó la posibilidad de eyaculaciones (una por tratamiento).
enriquecer ésta con la combinación Los valores mínimos para procesar las
con leche de vaca (L) o nopal (N), los muestras fueron: 1) Volumen ‡1 ml; 2)
cuales poseen una cantidad importante MP ‡80 p.100; 3) EV ‡85 p.100; 4)
de nutrientes (Salamon y Maxwell, Células anormales £15 p.100 y 5) pH
2000), además de otras características entre 6,5 y 7,5. Se emplearon diluyentes
que les permiten comportarse como con 50 p.100 de AC y 50 p.100 de
diluyentes de semen. El objetivo de citrato de sodio al 2,9 p.100 en combi-
este estudio fue evaluar agua de coco, nación con L o N, éstos en concentra-
leche, nopal y los mejores niveles de ciones de 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70
sus combinaciones para la criopreser- p.100, además de 14 p.100 de yema de
vación de semen ovino para diseminar huevo (YH) y 7 p.100 de glicerol. Se
los recursos genéticos de esta raza. probaron 14 diluyentes y un testigo
Tabla I. Porcentajes de motilidad progresiva y espermatozoides vivos en cinco períodos de
evaluación. (Percentages of progressive motility and live sperm in five periods of evaluation).
Motilidad progresiva (p.100) Espermas vivos (p.100)
Tratamiento Combinación T0 TE TC 48 h 90 d T0 TE TC 48 h 90 d
1 80-0 (testigo) 80 50 40 40 40 80 60 40 40 40
2 70-10 L 80 60 60 60 60 85 80 60 60 60
3 60-20 L 90 60 50 40 40 90 90 60 40 40
4 50-30 L 90 90 70 40 40 90 90 70 50 40
5 40-40 L 90 80 55 50 40 90 80 55 50 40
6 30-50 L 90 50 50 50 50 90 60 60 60 60
7 20-60 L 90 80 70 65 65 95 95 70 65 65
8 10-70 L 95 95 70 70 70 95 95 70 70 70
9 70-10 N 90 70 40 40 30 90 80 50 50 40
10 60-20 N 90 80 80 70 50 90 80 80 80 50
11 50-30 N 70 60 60 40 40 80 75 65 40 60
12 40-40 N 85 70 60 50 50 85 80 60 50 50
13 30-50 N 80 70 30 30 30 80 70 30 30 30
14 20-60 N 80 80 80 80 70 80 80 80 80 70
15 10-70 N 80 80 70 60 50 80 80 70 60 50
T0= (semen más diluyente A a 35ºC), TE (finalizar el tiempo de equilibramiento), TC (concluido el proceso
de congelamiento), 48 h (48 h poscongelamiento) y 90 d (90 d poscongelamiento).
Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 98.
12Notacriopreservacion1Gutierrez.p65 98 08/03/2006, 9:31CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN OVINO CON AGUA DE COCO, OPUNTIA Y LECHE
Tabla II. Modelos ajustados al porcentaje de motilidad progresiva y espermatozoides vivos
en cinco periodos de evaluación. (Fitted models to percentage of progressive motility and live sperm
in five periods of evaluation).
Motilidad progresiva (p.100) Espermas vivos (p.100)
Modelo: Y=b (AC)+b (L) Modelo: Y=b (AC)+b (L)
1 2 1 2
Parámetros estimados Parámetros estimados
2 2b b R b b R
1 2 1 2
Tiempo L
T0 0,81667 + 0,96429 0,9991 0,82917 + 0,97679 0,9995
TE 0,55000 + 0,90714 0,9950 0,72083 + 0,93036 0,9788
TC 0,47917 + 0,71250 0,9807 0,50417 + 0,73750 0,9879
48h 0,40417 + 0,66607 0,9757 0,42083 + 0,70179 0,9856
90d 0,39583 + 0,64821 0,9675 0,39583 + 0,67679 0,9701
Modelo: Y=b (AC)+b (N) Modelo: Y=b (AC)+b (N)
1 2 1 2
Parámetros estimados Parámetros estimados
2 2b b R b b R
1 2 1 2
Tiempo N
T0 0,84583 + 0,78393 0,9950 0,86250 + 0,79107 0,9980
TE 0,60000 + 0,82857 0,9886 0,70833 + 0,81706 0,9936
TC 0,46667 + 0,71429 0,9279 0,50833 + 0,70357 0,9321
48h 0,41667+ 0,63571 0,9233 0,47500 + 0,61786 0,9116
90d 0,39167 + 0,58214 0,9427 0,42500 + 0,56786 0,9526
(80-0), los cuales contenían 1 mg/ml de EV con aumentos de 400 y 100 diáme-
estreptomicina y 1000 UI/ml de penici- tros, respectivamente (Ax et al., 2002).
lina. Se usó D-fructosa a razón de 1,1 Se realizó una dilución fija de 1:9
y 2,5 g/100 ml para el testigo, L y N (semen:diluyente) para obtener una
respectivamente. El pH de los concentración aproximada de 120 mi-
diluyentes se mantuvo entre 6,5 y 7,5. llones de espermatozoides por pajilla
Se utilizaron cocos con no menos de 6 de 0,5 ml (Nunes y Fernández, 2001).
meses de edad y L descremada. El N, El diluyente se divide en dos fraccio-
se calentó en agua desionizada a 90°C, nes, A y B, a la fracción B se le agregó
para utilizar el extracto líquido, el cual 14 p.100 v/v de glicerol. El semen se
se enfrió a 35°C. Las muestras fueron mezcló con la fracción A y ambas
recolectadas con vagina artificial y fracciones pasaron de 35ºC a 5ºC en
con un tubo graduado en décimas de ml un tiempo de 120 min. A 5ºC se añadió
(Evans y Maxwell, 1990). Se evalua- al semen el diluyente B en cuatro por-
ron macroscópicamente (volumen y ciones (10, 20, 30 y 40 p.100), con 15
color). Cada muestra se colocó en min entre cada adición y con 3 h de
baño María a 35°C y de ahí con un equilibrio. Las pajillas se congelaron
microscopio de luz, se evaluaron MP y en nitrógeno líquido a -196ºC. Se des-
Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 99.
12Notacriopreservacion1Gutierrez.p65 99 08/03/2006, 9:31GUTIÉRREZ, PALACIOS, JIMÉNEZ Y RAMÍREZ
congelaron tres pajillas por tratamien- primera evaluación ß2 fue superior a
to, en agua a 37ºC durante 30 s y se ß1, esto debido a que el N presentó un
evaluaron inmediatamente. Se evalua- efecto positivo en el diluyente en los
ron MP y EV al diluir el semen a 35ºC, tiempos subsecuentes al T0.
finalizado el equilibramiento; conclui- Al realizar las evaluaciones de los
do el proceso de congelamiento, y a las tratamientos con L a 90 d la mayor MP
48 h y 90 d poscongelamiento. Para el fue para el 10-70 (AC-L) con una MP
análisis se utilizó un modelo de regre- de 70 p.100. En el trabajo realizado por
sión múltiple de paquete estadístico Madrid (2004) se observó que el mejor
SAS (Statistical Analysis System), diluyente con base en L y 20 p.100 YH,
1999. obtuvo una MP de 55 p.100 a los 90 d,
siendo estos valores menores a los
encontrados en la presente investiga-
RESULTADOS Y DISCUSIÓN ción. En los tratamientos AC-N a los
90 d, el tratamiento con mayor MP fue
En la tabla I se muestran los resul- el 20-60 con un 70 p.100 de MP. En
tados observados y en la tabla II los todos los diluyentes se refleja que a
modelos ajustados que se emplearon menor cantidad de AC adicionada, fue
para las variables. Se observa que ß2 mayor la MP y viceversa. Se concluye
fue superior a ß1 en los tratamientos que los diluyentes con AC-L o AC -N
con L, ya que los resultados para MP son medios adecuados para el conge-
y EV fueron mayores en los diluyentes lamiento de semen ovino, los mejores
con más cantidad de L, en todos los resultados se obtienen con cantidades
tiempos. Respecto a N, excepto en la bajas de AC.
BIBLIOGRAFÍA
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Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 100.
12Notacriopreservacion1Gutierrez.p65 100 08/03/2006, 9:31