ESTUDIOS PRELIMINARES EN LA CRIOCONSERVACIÓN DE ESPERMATOZOIDES PORCINOS DE RAZA CHATO MURCIANO (PRELIMINARY RESULTS ON THE CRIOPRESERVATION OF CHATO MURCIANO BOAR SPERM)

Peinado B.

Description

Resumen
La aplicación de la técnica de crioconservación espermática podría ayudar a la conservación del material genético durante largos periodos de tiempo. En este trabajo se han realizado una serie de estudios preliminares sobre la posibilidades de crioconservación de los eyaculados de verracos de la raza porcina autóctona Chato Murciano, que en la actualidad se encuentra en peligro de extinción. A partir de los eyaculados, obtenidos con frecuencia semanal, las dosis seminales fueron sometidas a congelación (Westendorf et al., 1975), envasadas en maxipajuelas de 5 ml y posteriormente almacenadas en nitrógeno líquido. La evaluación de las muestras se realizó tras la descongelación de las mismas, analizándose los siguientes parámetros: motilidad y calidad de movimiento, integridad estructural de membrana (tinción eosina/nigrosina), estado del acrosoma e integridad funcional de membrana (test diacetato de carboxifluoresceína). Los resultados obtenidos muestran que se deben seguir haciendo estudios para intentar mejorar la calidad del semen congelado descongelado para que esta técnica pueda ser utilizada como una herramienta útil en los planes de recuperación y de conservación de especies y razas.
Abstract
The use of sperm crioconservation technique would help to the preservation of genetic material for long term. This work was carried out in order to develop preliminary studies regarding boar sperm crioconservation in the autochthonous pig breed Chato Murciano nearly extincted at present. The seminal doses were obtained from ejaculates of these boars and criopreserved weekly (Westendorf et al.,1975), the sperm was stored in liquid nitrogen in maxi-straws. Postthawing semen analyses were carried out on every sample, and the parameters studied were: sperm motility, quality of movement, normal apical ridge (NAR), viability with eosin-nigrosin stain and functional membrane integrity (with carboxifluorescein diacetate, DCF). The results showed that further studies are needed to improve the quaiity of frozen-thawed sperm to make this technique a useful tool in the field of breed and species preservation.

Sujets

• Sus scrofa domestica
• Pig
• Semen quality

Informations

• Publié par: erevistas
• Publié le: 01 janvier 1998
• Nombre de lectures: 13
• Langue: Español

Extrait

COMUNICACIÓN
ESTUDIOS PRELIMINARES EN LA CRIOCONSERVACIÓN DE
ESPERMATOZOIDES PORCINOS DE RAZA CHATO MURCIANO*
PRELIMINARY RESULTS ON THE CRIOPRESERVATION
OF CHATO MURCIANO BOAR SPERM*
1 1 2 2Peinado, B., A. Poto, J.Gadea y S. Ruíz
1Centro de Investigación y Desarrollo Agroalimentario. La Alberca. 30150 Murcia. España.
2Departamento de Biología Animal (Fisiología Animal). Facultad de Veterinaria. Universidad de Murcia.
30071 Murcia. España.
PALABRAS CLAVE ADICIONALES ADDITIONAL KEYWORDS
Porcino. Semen congelado. Calidad seminal. Pig. Frozen sperm. Semen quality.
RESUMEN
La aplicación de la técnica de crioconserva diacetato de carboxifluoresceína). Los resulta
ción espermática podría ayudar a la conserva dos obtenidos muestran que se deben seguir
ción del material genético durante largos perio haciendo estudios para intentar mejorar la cali
dos de tiempo. En este trabajo se han realizado dad del semen congelado descongelado para
una serie de estudios preliminares sobre la posi que esta técnica pueda ser utilizada como una
bilidades de crioconservación de los eyaculados herramienta útil en los planes de recuperación y
de verracos de la raza porcina autóctona Chato de conservación de especies y razas.
Murciano, que en la actualidad se encuentra en
peligro de extinción.
A partir de los eyaculados, obtenidos con SUMMARY
frecuencia semanal, las dosis seminales fueron
sometidas a congelación (Westendorf et al., The use of sperm crioconservation technique
1975), envasadas en maxipajuelas de 5 ml y would help to the preservation of genetic material
posteriormente almacenadas en nitrógeno líqui for long term. This work was carried out in order
do. La evaluación de las muestras se realizó tras to develop preliminary studies regarding boar
la descongelación de las mismas, analizándose sperm crioconservation in the autochthonous pig
los siguientes parámetros: motilidad y calidad de breed Chato Murciano nearly extincted at present.
movimiento, integridad estructural de membrana The seminal doses were obtained from
(tinción eosina/nigrosina), estado del acrosoma ejaculates of these boars and criopreserved
e integridad funcional de membrana (test weekly (Westendorf et al.,1975), the sperm was
stored in liquid nitrogen in maxi straws. Post
thawing semen analyses were carried out on
*Este trabajo ha sido financiado por la Comisión
every sample, and the parameters studied were:Interministerial de Ciencia y Tecnología (CICYT).
Proyecto AGF96 1069. sperm motility, quality of movement, normal apical
Arch. Zootec. 47: 305 310. 1998.PEINADO ET AL.
ridge (NAR), viability with eosin nigrosin stain Por otro lado, la comercialización de
and functional membrane integrity (with su carne podría presentar posibilida
carboxifluorescein diacetate, DCF). The results des en el mercado debido a sus carac
showed that further studies are needed to improve terísticas organolépticas específicas.
the quaiity of frozen thawed sperm to make this Este hecho, unido a su gran poder
technique a useful tool in the field of breed and transformador de subproductos de la
species preservation. huerta en carne (pueden alcanzar los
220 kg de peso en adultos), tipifican a
los Chatos murcianos como un pro
INTRODUCCIÓN
ducto regional de especial valor.
Entre las posibles pautas a seguir
Con los nuevos planteamientos in
para la recuperación de esta raza se
dustriales y los cambios producidos en
encuentra la creación de un banco de
la alimentación y forma de vida rural
semen congelado que garantice en todo
surgidos en la mitad de la década de
momento la disponibilidad de gametos
los 60, la raza porcina Chato Murciano
masculinos para fecundar a las hem
fue literalmente barrida del panorama
bras de esta raza. Al margen de las
ganadero de la Región de Murcia
ventajas que ofrece la crioconserva
(Herranz, 1987). En la actualidad exis
ción de semen por sí misma en cual
ten escasos ejemplares (siete machos,
quier explotación porcina (Bwanga,
doce hembras y varios lechones) dis
1991), en el caso del Chato murciano ,
tribuidos principalmente en dos nú
en grave riesgo de extinción, la posibi
cleos de la región (el Centro de Ca
lidad de contar siempre con esperma
pacitación Agraria de Lorca y en la
tozoides de los escasos ejemplares que
pedanía murciana de Beniaján), ade
quedan garantizaría la viabilidad de
más de otros dos machos y tres hem
cualquier plan de recuperación ante
bras recientemente localizados en nú eventuales contratiempos como la en
cleos aislados. fermedad o la muerte de algún repro
El interés que hoy día puede tener ductor.
la recuperación de esta raza radica no
sólo en la conservación del patrimonio
genético regional sino también en al MATERIAL Y MÉTODOS
gunas peculiaridades de la misma que
la hacen atractiva. Por una parte, se haRECOGIDA DE SEMEN Y CONGELACIÓN
comprobado la mayor resistencia que Se ha trabajado con 3 verracos de
presentan estos animales a enfermeda raza Chato Murciano y 1 verraco de
des como la rinitis o la neumonía raza Blanco Belga ubicados en el Cen
enzoótica, que causan numerosas pér tro de Capacitación y Experiencias
didas económicas al cabo del año en Agrarias de Lorca (Murcia). La obten
las diferentes explotaciones, junto con ción de semen se realizó con una fre
una perfecta aclimatación a las duras cuencia semanal mediante método
manual. Del eyaculado solamente secondiciones estivales del sureste es
utilizó para su procesado la fracciónpañol que las razas comúnmente ex
rica en espermatozoides.plotadas soportan con gran dificultad.
Archivos de zootecnia vol. 47, núm. 178 179, p. 306.CRIOCONSERVACIÓN DE ESPERMATOZOIDES DEL CERDO CHATO MURCIANO
La técnica empleada para la conge observación en un microscopio de cam
lación de la muestras seminales po claro a 100 aumentos de una doble
(Westendorf et al., 1975) consiste en muestra de 10 ml de semen depositado
la recogida del semen sobre termo sobre un portaobjetos precalentado en
atemperado (37°C) con 100 ml de di una placa termostatizada a 39°C Se
luyente comercial y descenso térmico valoró el porcentaje de espermatozoi
de 37°C a 23°C en un periodo de 1 h,des con movimiento (0 100) y el tipo
cuando la temperatura alcanza 32°C de movimiento rectilíneo, progresivo
se completa la dilución seminal hasta y rápido de 0 a 5.
el grado 1:2. Previamente, se realiza el El estado del acrosoma de las célu
estudio de la calidad y concentración las espermáticas se analizó en una
espermática, calculándose el número muestra fijada, para lo que se diluyó
9de dosis a 5 x 10 espermatozoides. A un volumen de 250 l de semen en 1 ml
continuación, las muestras se centri de una solución al 2 p.100 de glutaral
fugan (800g 10 min, 15°C) y se resus dehído en PBS. Se observó una mues
pende el sedimento, hasta 3 ml/dosis, tra de 10 l en un microscopio de
con el diluyente nº l (lactosa 11 p.100,contraste de fases a 1000 aumentos
con objetivo de inmersión. Se visuali yema de huevo 20 p.100 y OEP 0,3
zaron al menos 200 espermatozoides,p.100). Se hace descender la tempera
clasificando como acrosomas norma tura de 23 a 15°C en 1 h y se equilibran
les aquellos que presentaban esperma las muestras a 15°C durante 2,5 h con
tozoides con bordes apicales bien de un nuevo descenso térmico de 15°C a
finidos y nítidos en forma de semiluna5°C en 30 min. Finalmente, se comple
oscura (Pursel y Johnson, 1974). Losta hasta 5 ml/dosis, a 5°C, con diluyen
resultados se expresaron en porcenta te nº 2 (lactosa 11 p.100, yema de
je de acrosomas normales.huevo 20 p.100, OEP 0,3 p.100 y gli
Se estimó la vitalidad espermáticacerol 2 p.100). El proceso termina con
mediante la tinción de eosina nigrosinael envasado de las dosis seminales en
(EN) descrita por Eliasson y Treichlmaxipajuelas de 5 ml, exposición a
(1971). Una muestra de semen y unvapores de nitrógeno líquido (3 5 cm
volumen igual de una solución dede altura) durante 20 min, congelación
eosina nigrosina (5 p.100 (p/v) de eosi y conservación en tanque de nitrógeno
na amarilla, 10 p.100 (p/v) de nigrosinalíquido.
en solución salina) fueron deposita
dos sobre un portaobjetos, se homoge DESCONGELACIÓN Y EVALUACIÓN DEL
neizó la mezcla y se prepararon exten SEMEN
siones en capa fina. Tras el secado alLas pajuelas de semen congelado
aire de la extensión, se examinaronfueron introducidas, para proceder a
bajo microscopía de campo claro asu descongelación, en baño atempera
400 aumentos al menos 200 células,do a 42°C durante 45 segundos. Poste
diferenciando aquellas que estabanriormente, se diluyeron 1:20 en un
parcial o totalmente teñidas de las quediluyente comercial para