présentée la Faculté des Sciences de la Vie de l'Université Louis Pasteur STRASBOURG I

Monique Gangloff

Description

Niveau: Supérieur

• redaction

THESE présentée à la Faculté des Sciences de la Vie de l'Université Louis Pasteur - STRASBOURG I pour l'obtention du titre de DOCTEUR DE L'UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG Mention Biologie Structurale Par Monique GANGLOFF Étude de l'agonisme et de l'antagonisme dans le récepteur alpha des hormones œstrogènes par mutagenèse dirigée et cristallographie Soutenue le 13 Décembre 2000 devant la Commission d'Examen : Pr Marcel Hibert Rapporteur interne Pr Markus Grütter Rapporteur externe Dr Maria-Grazia Catelli Rapporteur externe Dr Hinrich Gronemeyer Examinateur Dr Marc Ruff Membre invité Dr Dino Moras Directeur de thèse

• merci au personnel des services communs de l'igbmc


• mention biologie


• merci


• directeurs de la recherche


• service de synthèse d'oligonucléotides


• cristallisation de la protéine triple mutante


• analyse de la liaison des ligands

Sujets

• Redaction
• Louis Pasteur University
• Lamour

Informations

• Publié par: profil-nechor-2012
• Publié le: 01 décembre 2000
• Nombre de lectures: 249
• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 16 Mo

Extrait

THESE

présentée à la Faculté des Sciences de la Vie
de l’Université Louis Pasteur - STRASBOURG I


pour l’obtention du titre de


DOCTEUR DE L’UNIVERSITE
LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG

Mention Biologie Structurale

Par

Monique GANGLOFF



Étude de l’agonisme et de l’antagonisme
dans le récepteur alpha des hormones œstrogènes
par mutagenèse dirigée et cristallographie


Soutenue le 13 Décembre 2000 devant la Commission d’Examen :

Pr Marcel Hibert Rapporteur interne
Pr Markus Grütter Rapporteur externe
Dr Maria-Grazia Catelli Rapporteur externe
Dr Hinrich Gronemeyer Examinateur
Dr Marc Ruff Membre invité
Dr Dino Moras Directeur de thèse































à Christophe J’adresse de vifs remerciements à M. Markus Grütter, Professeur à l’Université de
me
Zurich, à M. Marcel Hibert, Professeur à l’Université Louis Pasteur, M Maria-Grazia
Catelli et M. Hinrich Gronemeyer, Directeurs de Recherche à l’INSERM, pour l’honneur
qu’ils me font de juger ce travail

Je remercie M. Dino Moras de m’avoir accueilli dans son laboratoire et de m’avoir
permis de découvrir la biologie structurale. Ce fut une expérience très enrichissante de
bénéficier des nombreuses compétences que l’on trouve dans ce laboratoire, ainsi que dans
l’Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire dirigé par M. Pierre Chambon.

Le travail que je présente dans ce manuscrit est avant tout un travail d’équipe. Je tiens
donc à remercier tout particulièrement mon superviseur Marc Ruff, qui m’a initié aux
techniques de purification de protéines et de cristallographie des rayons X. Un grand merci à
Sylvia Eiler pour la mise au point de l’expression, de la purification et de la cristallisation de
la protéine sauvage. Je remercie Sylvie Duclaud, pour la cristallisation de la protéine triple
mutante et le criblage des ligands de synthèse. Merci à Jean-Marie Wurtz, pour son aide dans
l’analyse de la liaison des ligands. Ce travail a été initié en collaboration avec le soutien du
laboratoire pharmaceutique Schering AG (Berlin). Merci à André Mitschler, Alain Litt,
Raymond Ripp et Serge Uge, pour leur aide technique.

Ce document ne serait pas ce qu’il est sans l’aide d’une équipe de relecture, je tiens
donc à remercier Marc Ruff, Sylvia Eiler, Vincent Cura, Bruno Klaholz, Luc Moulinier,
Catherine Stehlin, Natacha Rochel et Jean-Paul Renaud, pour leurs conseils.

Un grand merci à mes compagnons de rédaction : Anne-Laure Gall et Nicolas Calimet,
ainsi qu’à mes camarades de paillasse et de bureau, que ce soit au premier étage ou au rez-de-
chaussée. Merci à Anass Jawhari pour sa constante bonne humeur, Gilbert Bey pour ses
marques de tendresse, Jérome Fagart pour son aide précieuse dans les Scatchard, Valérie
Lamour, Pascal Egea, William Bourguet, Natacha Rochel, Giuseppe Tocchini-Valentini,
Muriel Uhring, Denis Zeyer, Florence Zink, Sebastiaan Werten, Christophe Romier,
Bénédicte Delagoutte, Didier Busso, Sébastien Fribourg, Eduardo Howard, Fabrice Klein,
Alfredo Torres-Larios, Odile Lecompte, Olivier Poch, Sankaranarayanan Rajan, Jean
Cavarelli, Arnaud Poterszman, Anne-Catherine Dock-Bregeon, Christiane Rether et tous les
autres qui ont contribué à l’ambiance si chaleureuse du laboratoire.
Merci au personnel des services communs de l’IGBMC: le service de séquençage
(Serge Vicaire, Danièle Sommer), le service de synthèse d’oligonucléotides (Edouard
Troesch, Franck Ruffenach, Ingrid Colas), le service de synthèse de peptides et
microséquençage (Pascal Eberling et Adrien Staub).

Ce travail a été soutenu par le Ministère de la Recherche et de l’Enseignement ainsi
que l’Association de la Recherche contre le Cancer.









Table des matières Table des matières
PPPPrrrreeeemmmmiiiièèèèrrrreeee ppppaaaarrrrttttiiiieeee
I. INTRODUCTION ....................................................................................................................................... 1
ES RECEPTEURS NUCLEAIRESA. L ....................................................................................................................... 3
1. Fonctions biologiques et importance thérapeutique.................................................................................. 3
2. Organisation modulaire ............................................................................................................................ 5
3. Évolution des récepteurs nucléaires.......................................................................................................... 6
3.1 Définition de sous-familles................................................................................................................................... 6
3.2 Diversification par deux vagues successives ........................................................................................................ 6
3.3 Position phylogénétique, liaison de l’ADN et dimérisation.................................................................................. 8
4. Structure des domaines fonctionnels ......................................................................................................... 8
4.1 Le domaine N-terminal A/B ................................................................................................................................. 8
4.2 Le domaine C ....................................................................................................................................................... 9
4.2.1 Architecture générale ................................................................................................................................. 10
4.2.2 Les éléments de réponse hormonale........................................................................................................... 11
4.2.3 Liaison coopérative à l’ADN...................................................................................................................... 11
4.2.4 Éléments structuraux impliqués dans la liaison à l’ADN et la dimérisation............................................... 13
4.3 Le domaine charnière D ..................................................................................................................................... 15
4.4 Le domaine de liaison du ligand E...................................................................................................................... 16
4.4.1 Repliement canonique ................................................................................................................................ 16
4.4.2 Interface de dimérisation ............................................................................................................................ 20
4.4.3 La poche de fixation du ligand ................................................................................................................... 21
4.4.4 Les changements conformationnels induit par le ligand............................................................................. 21
(a) Le mécanisme de la souricière.................................................................................................................. 21
(b) Les bases moléculaires de l’agonisme et de l’antagonisme ...................................................................... 23
4.5 Le domaine C-terminal F.................................................................................................................................... 25
5. Localisation cellulaire des récepteurs nucléaires et mécanisme d’action................................................25
5.1 Localisation cytoplasmique ................................................................................................................................ 26
5.1.1 Le complexe récepteur-chaperons et mécanisme d’assemblage ................................................................. 26
5.1.2 Rôles potentiels du « chaperonage » .......................................................................................................... 28
5.2 Localisation nucléaire et contrôle de l’expression génique ................................................................................ 28
6. Régulation transcriptionnelle par les récepteurs nucléaires....................................................................28
6.1 Facteurs de transcription généraux ..................................................................................................................... 29
6.2 Coactivateurs ..........