UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG

Magali Malacombe

Description

Niveau: Supérieur, Doctorat, Bac+8

• redaction

UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG Ecole doctorale des Sciences de la Vie et de la Santé THESE présentée par Magali Malacombe En vue d'obtenir le grade de Docteur de l'Université Louis Pasteur de Strasbourg I Discipline : Sciences du vivant Spécialité : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie Dynamique du cytosquelette d'actine au cours de l'exocytose régulée dans les cellules neuroendocrines : étude des voies effectrice et régulatrice de la protéine Cdc42 Soutenue publiquement le 29 Novembre 2006 devant le jury composé de : Mme le Dr. Barbara Winsor (Rapporteur interne) Mr. le Dr Thierry Galli (Rapporteur externe) Mr. le Dr. Pierre Chardin (Rapporteur externe) Mr le Pr. Olivier Rohr (Examinateur) Mr. le Dr. Stéphane Gasman (Directeur de Thèse)

• moment inoubliable d' échanges scientifiques


• ecole doctorale des sciences de la vie et de la santé


• cellules neuroendocrines


• hèses concernant les mécanismes moléculaires


• vie au labo


• mécanismes d'exocytose dans les cellules neuroendocrines


• actine


• modèle cellulaire


• étapes tardives de l'exocytose

Sujets

• Redaction
• Ulrich
• Winsor
• Chardin
• Alsace
• Gambino

Informations

• Publié par: profil-feym-2012
• Publié le: 01 novembre 2006
• Nombre de lectures: 100
• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 19 Mo

Extrait

UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG

Ecole doctorale des Sciences de la Vie et de la Santé




THESE

présentée par


Magali Malacombe


En vue d’obtenir le grade de Docteur de l’Université Louis Pasteur de Strasbourg I

Discipline :
Sciences du vivant

Spécialité :
Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie




Dynamique du cytosquelette d’actine au cours de l’exocytose
régulée dans les cellules neuroendocrines : étude des voies
effectrice et régulatrice de la protéine Cdc42





Soutenue publiquement le 29 Novembre 2006 devant le jury composé de :


Mme le Dr. Barbara Winsor (Rapporteur interne)
Mr. le Dr Thierry Galli (Rapporteur externe)
Mr. le Dr. Pierre Chardin (Rapporteur externe)
Mr le Pr. Olivier Rohr (Examinateur)
Mr. le Dr. Stéphane Gasman (Directeur de Thèse) Je tiens à remercier:

Marie-France Bader, pour m'avoir accueillie au sein de son groupe lors de mon
DEA. Elle m'a donné l'occasion d'intégrer une équipe dynamique et motivée, qui m'a donné
envie de continuer en thèse.

Olivier Rohr, Barbara Winsor, Pierre Chardin et Thierry Galli, mes membres du
jury, pour avoir fait de cette soutenance un moment inoubliable d'échanges scientifiques qui a,
au final, été beaucoup moins stressant que ce que je le pensais. Je leur suis reconnaissante des
discussions concernant le manuscrit, des modifications à lui apporter et du temps qu'ils m'ont
consacré à l'occasion de cette soutenance.

Stéphane Gasman, mon directeur de thèse, dont je sais que l'encadrement scientifique
rigoureux m'a permis de profiter et de rentabiliser au maximum ces trois années de thèse, avec
un petit avant-goût en DEA. Merci de ta bonne humeur, de ta patience et je sais que malgré
mes boulettes toujours différentes d'une semaine à l'autre, tu as toujours autant de cheveux
qu'au jour de mon arrivée en 2002…

Valérie Calco, qui m'a encadrée avec beaucoup de patience (et un franc-parler bien à
elle) pour m'apprendre tout ce que je sais de la bio. mol., du clonage et autres joyeusetés
relatives à nos amis les plasmides. Les séances de travail étaient régulièrement ponctuées de
fous-rires qui donnaient l'impression que nous étions ailleurs que dans un labo…

Nicolas Vitale (comme la carte); dont je partageas le bureau et auquel j'arrivais à
soutirer quelques informations scientifiques au milieu de toutes les taquineries qu'il pouvait
me dire… Nos échanges vifs se terminaient régulièrement par une blague… Mais
heureusement que Maria Zeniou-Meyer était là pour tempérer les facéties de Nicles et
redonner un peu de sérieux et de calme à ce bureau bien agité. Merci du temps que tu as passé
à me ré-expliquer ce que je ne comprenais pas ou que j'avais oublié…

Nancy Grant pour m'avoir aidé sur beaucoup de points, tant scientifiques que
personnels. Je te suis très reconnaissante de m'avoir guidée quand j'étais seule au Canada et
pour t'être si bien occupée de moi.

Mara Ceridono pour notre collaboration sur le projet intersectine mais aussi pour les
discussions au cours de la préparation de cette thèse. Je sais que c'est dur d'être une fille du
sud et de vivre en Alsace, on se comprenait bien lors des hivers interminables et pluvieux…

Jaroslava Ciesielski-Treska pour sa bonne humeur permanente et communicative,
Sylvette Chasserot-Golaz pour sa gentillesse et ses conseils en imagerie, Gaby Ulrich pour
sa grande rigueur qui m'a permis de travailler dans de bonnes conditions.

Yann Humeau et Frédéric Doussau qui ont su, à l'instar de Bernard Poulain, me
parler des SNARE et me fournir une aide précieuse pour l'écriture de ce chapitre. Je dois
avouer que sans eux, j'aurais eu du mal à faire le point sur ce sujet épineux. Merci beaucoup à
vous deux pour votre contribution en images (c.f thèse de Yann…) à ce manuscrit.

Mes compagnons de paillasse ou d'étage, sans qui la vie au labo aurait été bien triste…
Emeline et Stella, avec lesquelles j'ai beaucoup partagé, et qui m'ont énormément aidée dans
les derniers moments de ma rédaction; Fanny, Matthias, Aurélie, les filles de l'équipe èmePfrieger, Isa, Aurore et Céline S, Céline M et ses accolytes du 3 étage, mais aussi ceux
qui sont arrivés plus récemment et que je n'ai pas eu le temps de mieux connaître, comme
Frédéric Gambino, Etienne Lonchamp ou Pétra, nouvelle recrue de la Vitale team.

Mes amis de Strasbourg et d'ailleurs, qui m'ont soutenue au cours de ces derniers mois.
Merci à Steeve pour les moments de détente lors du marathon de la rédaction, à Sandrine et
Bérengère pour les longues conversations au téléphone dans les moments de déprime, à
Adeline qui savait ce que je vivais pour l'avoir passé quelques mois auparavant, mais aussi
Carole, Maryem, et Yves, qui m'a beaucoup encouragée dans la dernière ligne droite de la
préparation de la soutenance.

Merci à ceux qui ont, de près ou de loin, aidée au cours de cette thèse.

Un grand merci à mes parents, qui m'ont toujours aidée et soutenue dans mes choix,
avec une pensée spéciale pour ma grand'mère qui a contribué à ma réussite en me poussant à
étudier. Avant-propos

Le cytosquelette d'actine est un élément crucial à la survie cellulaire. En effet, il est
certes responsable de la morphologie de la cellule et de son maintien, mais il est aussi
impliqué dans des fonctions beaucoup plus dynamiques telles que le transport intra-cellulaire,
la mobilité ou les phénomènes de division cellulaire. D'un point de vue morphologique,
l'actine des cellules neuroendocrines forme un réseau dense sous la membrane plasmique qui
présente la particularité de se restructurer lors des phénomènes de sécrétion. L’équipe du
Dr Marie-France Bader s'est intéressée à la dynamique de l’actine et à sa régulation au cours
du processus d’exocytose dans les cellules neuroendocrines. Lors de mon arrivée en DEA, le
Dr Stéphane Gasman avait déjà démontré le rôle de RhoA dans la stabilisation de l’actine
corticale et venait de suggérer l’implication éventuelle de Cdc42 au cours de la sécrétion dans
les cellules neuroendocrines. Le but de mon projet de thèse fut alors d'étudier le rôle et la
régulation de Cdc42. Afin de comprendre un peu mieux le fonctionnement de cet interrupteur
moléculaire, je me suis focalisée sur la mise en évidence de ses voies effectrices et
activatrices.

Ce manuscrit s’articule en quatre grandes parties. Dans la première partie, je décrirai le
processus d’exocytose en général, en me focalisant sur le système neuroendocrine et en
faisant quelques parallèles avec le système nerveux. J'inclurai dans ce chapitre une partie
concernant les modèles cellulaires utilisés pour étudier la sécrétion neuroendocrine, à savoir
les cellules chromaffines et les cellules PC12. J’en profiterai également pour traiter le cycle de
vie du granule, étape par étape, depuis sa biogenèse dans l’appareil de Golgi jusqu’à son
endocytose, en présentant les différentes hypothèses concernant les mécanismes moléculaires
impliqués.
La seconde partie traitera de l’actine, élément crucial pour le bon déroulement de
nombreux processus cellulaires. J'aborderai son organisation générale et les principaux
facteurs de nucléation responsables de sa régulation. Parmi les régulateurs connus de la
dynamique de l'actine se trouvent les protéines G de la famille Rho. Je leur ai consacré un
chapitre, afin de présenter leur mode de fonctionnement et surtout de faire le lien entre ces
protéines, l'actine et les processus de trafics membranaire et vésiculaire. Ce chapitre sur le
trafic me permettra de présenter les rôles des protéines Rho et de l'actine au cours de
l'exocytose, mais surtout de poser la question de sa fonction lors de ce processus, qui est
encore mal définie à l'heure actuelle. C'est dans cette partie que je présenterai les résultats de
1ma première publication, qui met en évidence une cascade moléculaire impliquant Cdc42, N-
WASP et Arp2/3 dans la synthèse d’actine lors des ét