UNIVERSITE LOUIS PASTEUR STRASBOURG I

Gilbert Laustriat

Description

Niveau: Supérieur
0 UNIVERSITE LOUIS PASTEUR – STRASBOURG I Institut Gilbert Laustriat UMR CNRS 7175-LC1 – Faculté de Pharmacie Thèse Pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Louis Pasteur Discipline : Sciences Pharmaceutiques Spécialité : Biochimie Présentée par Papa Madièye GUEYE « Phénotypes majeurs de l'haptoglobine humaine et stress oxydant induit par l'hémoglobine extra-érythrocytaire sur le globule rouge » soutenue publiquement le 31 janvier 2007 Membres du jury Docteur Guy DUPORTAIL, Strasbourg Président de jury Professeur Jean-Marc LESSINGER, Strasbourg Directeur de thèse Docteur Guy DUPORTAIL, Strasbourg Rapporteur interne Professeur Alain LEGRAND, Paris Rapporteur externe Professeur Jacques BIENVENU, Lyon Rapporteur externe Docteur Christian BOUDIER, Strasbourg Examinateur

• hémoglobine extra


• dosage de l'hémoglobine extraérythrocytaire


• préparation des globules rouges en suspension dans la solution sagm


• marqueurs de stress oxydant dans les membranes de globules rouges


• détermination des masses moléculaires


• conséquences cliniques du polymorphisme de l'haptoglobine


• solution de conservation


• polymorphisme de l'haptoglobine

Sujets

• Louis Lebègue Duportail
• Louis Pasteur University
• Boudier

Informations

• Publié par: profil-nechor-2012
• Publié le: 01 janvier 2007
• Nombre de lectures: 98
• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 2 Mo

Extrait

UNIVERSITE LOUIS PASTEUR – STRASBOURG I

Institut Gilbert Laustriat
UMR CNRS 7175-LC1 – Faculté de Pharmacie


Thèse

Pour obtenir le grade de
Docteur de l’Université Louis Pasteur
Discipline : Sciences Pharmaceutiques
Spécialité : Biochimie
Présentée par

Papa Madièye GUEYE


« Phénotypes majeurs de l’haptoglobine humaine et stress oxydant
induit par l’hémoglobine extra-érythrocytaire sur le globule rouge »

soutenue publiquement le 31 janvier 2007

Membres du jury

Docteur Guy DUPORTAIL, Strasbourg Président de jury

Professeur Jean-Marc LESSINGER, Strasbourg Directeur de thèse
Docteur Guy DUPORTAIL, Rapporteur interne
Professeur Alain LEGRAND, Paris externe Jacques BIENVENU, Lyon Rapporteur
Docteur Christian BOUDIER, Strasbourg Examinateur
0Sommaire

Pages
Remerciements ....................................................................................................... 6
Listes des abréviations et des principaux symboles ............................................... 8
Liste des figures et tableaux ................................................................................. 10

Introduction générale ........................................................................... 13

Première partie : Généralités sur le stress oxydant et ses marqueurs ... 15

I. Introduction ................................................................................................ 16
II. Systèmes oxydants et systèmes anti-oxydants ........................................... 17
II. 1. Radicaux libres Biologiques 17
II. 1. 1. Définition ............................................................................................................................... 17
II. 1. 2. Nature et sources cellulaires des espèces réactives de l’oxygène .......................................... 17
II. 2. Systèmes de défenses anti-oxydants .................................................................... 21
II. 2. 1. Systèmes enzymatiques ......................................................................................................... 21
II. 2. 2. es non enzymatiques .................................................................................................. 24
III. Le stress oxydant ........................................................................................ 26
III. 1. Définition du stress oxydant ................................................................................. 26
III. 2. Marqueurs biologiques du stress oxydant ............................................................ 27
III. 2. 1. Mesure des radicaux libres ..................................................................................................... 28
III. 2. 2. des systèmes anti-oxydants ....................................................................................... 29
III. 2. 3. Marqueurs de la peroxydation lipidique ................................................................................ 33
III. 2. 4. l’oxydation des protéines et des acides aminés ............................................... 40
III. 2. 5. l’oxydation des acides nucléiques ................................................................... 41
III. 2. 6. Quel est le meilleur marqueur pour évaluer le stress oxydant ? ............................................. 43
III. 3. Stress oxydant et maladies ................................................................................... 48
IV. Conclusion ................................................................................................. 50

Deuxième partie : généralités sur l’haptoglobine ................................ 52

I. Introduction ................................................................................................ 53
II. Structure de l’haptoglobine ........................................................................ 54
II. 1. Structure du gène de l’haptoglobine ..................................................................... 54
II. 2. Structure de la protéine ........................................................................................ 56
II. 2. 1. Structure primaire et structure secondaire............................................................................... 56
II. 2. 2. Analogies structurales de l’haptoglobine avec d’autres protéines .......................................... 60
III. Propriétés physicochimiques ..................................................................... 61
III. 1. Propriétés électrophorètiques ............................................................................... 61
III. 2. Solubilité .............................................................................................................. 62
III. 3. Composition en acides aminés ............................................................................. 62
III. 4. Masses moléculaires ............................................................................................. 64
IV. Synthèse de l’haptoglobine ........................................................................ 65
1V. Distribution géographique ......................................................................... 70
VI. Propriétés fonctionnelles de l’haptoglobine .............................................. 72
VI. 1. Fixation de l’hémoglobine ................................................................................... 72
VI. 2. Protection contre les radicaux libres .................................................................... 74
VI. 3. Influence sur le statut en fer ................................................................................. 75
VI. 4. Inhibition de l’activité vasoconstrictrice de l’hémoglobine ................................. 77
VI. 5. Inhibition de la synthèse des prostaglandines ...................................................... 78
VI. 6. Rôle de l’haptoglobine dans la modulation du système immunitaire .................. 79
VI. 7. Haptoglobine et angiogenèse ............................................................................... 81
VI. 8. Activité antibactérienne de l’Hp .......................................................................... 83
VII. Aspects cliniques de laboratoire ................................................................ 83
VII. 1. Détermination des concentrations d’haptoglobine ............................................... 84
VII. 2. ination des phénotypes d’haptoglobine .................................................... 85
VII. 3. Haptoglobine comme marqueur ........................................................................... 86
VIII. Conséquences cliniques du polymorphisme de l’haptoglobine ................. 88
VIII. 1. Maladies cardiovasculaires et polymorphisme de l’haptoglobine ....................... 88
VIII. 2. Diabètes et polymorphisme de l’haptoglobine ..................................................... 89
VIII. 3. Maladies infectieuses et polymorphisme de l’haptoglobine ................................ 90
VIII. 4. Polymorphisme de l’haptoglobine et autres pathologies ...................................... 91
IX. Conclusion ................................................................................................. 93

Troisième partie : Phénotypage et Purification de l’haptoglobine ...... 94

I. Introduction ................................................................................................ 95
II. Matériels et Méthodes ................................................................................ 97
II. 1. Spécimens ............................................................................................................. 97
II. 2. Phénotypage de l’haptoglobine ............................................................................ 98
II. 2. 1. Tampons ................... 98
II. 2. 2. Plaques de gel de polyacrylamide .......................................................................................... 98
II. 2. 3. Préparation des plasmas ......................................................................................................... 98
II. 2. 4. Migration ............................................................................................................................... 99
II. 2. 5. Révélation .......................................................................................................... 99
II. 3. Purification de l’haptoglobine humaine ............................................................... 99
II. 3. 1. Source utilisée pour la purification de l’haptoglobine humaine ............................................. 99
II. 3. 2. Choix de la matrice .............................................................................................................. 100
II. 3. 3. Quantification de l’Hp au cours de la purification ............................................................... 100
II. 3. 4. Protocole de pu