N° d'ordre:

Luciano Lucchetta

Description

Niveau: Supérieur, Doctorat, Bac+8
N° d'ordre: 2466 THÈSE Présentée pour l'obtention du titre de DOCTEUR DE L'INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE TOULOUSE École doctorale: Sciences Ecologiques, Vétérinaires, Agronomiques & Bioingénieries - SEVAB Spécialité: Qualité et Sécurité des Aliments TITRE CARACTERISATION DE MELONS TRANSGENIQUES ANTISENS ACC OXYDASE ET ETUDE BIOCHIMIQUE DES ALCOOL ACYLTRANSFERASES IMPLIQUEES DANS LA BIOGENESE D'AROMES par Luciano LUCCHETTA Soutenue le 16 Avril 2007 devant le jury composé de: M. Jean-Claude PECH (INP/ENSAT-Toulouse-France) Président M. Cesar Valmor ROMBALDI (FAEM/UFPel-Pelotas-Brasil) Co-directeur M. Alain LATCHÉ (INP/ENSAT-Toulouse-France) Co-directeur M. Odir DELLAGOSTIN (CENBIOT/UFPel-Pelotas-Brasil) Rapporteur M. Gilles FERON (INRA/ Dijon-France) Rapporteur M. Leonardo NORA (FAEM/UFPel-Pelotas-Brasil) Membre Universidade Federal de Pelotas/UFPEL – Facultade de Agronomia Eliseu Maciel Campus Universitario – CP 354 – 96.010.900 – Pelotas – RS - Brasil 1

• ufpel-pelotas-brasil


• universidade federal de pelotas


• acc oxidase


• maturação de frutos


• em casca


• oxidase de maçã em


• aos colegas de pós-graduação

Sujets

• Artigas
• Institut national polytechnique de Toulouse
• Latche
• Médina
• Guerra
• Antunes

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• Publié le: 01 avril 2007
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Extrait

N° d’ordre: 2466
THÈSE

Présentée pour l’obtention du titre de

DOCTEUR DE L'INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE TOULOUSE

École doctorale: Sciences Ecologiques, Vétérinaires, Agronomiques &
Bioingénieries - SEVAB
Spécialité: Qualité et Sécurité des Aliments

TITRE

CARACTERISATION DE MELONS TRANSGENIQUES ANTISENS ACC OXYDASE ET
ETUDE BIOCHIMIQUE DES ALCOOL ACYLTRANSFERASES IMPLIQUEES DANS LA
BIOGENESE D’AROMES

par

Luciano LUCCHETTA

Soutenue le 16 Avril 2007
devant le jury composé de:

M. Jean-Claude PECH (INP/ENSAT-Toulouse-France) Président
M. Cesar Valmor ROMBALDI (FAEM/UFPel-Pelotas-Brasil) Co-directeur
M. Alain LATCHÉ (INP/ENSAT-Toulouse-France) Co-directeur
M. Odir DELLAGOSTIN (CENBIOT/UFPel-Pelotas-Brasil) Rapporteur
M. Gilles FERON (INRA/ Dijon-France) Rapporteur
M. Leonardo NORA (FAEM/UFPel-Pelotas-Brasil) Membre

Universidade Federal de Pelotas/UFPEL – Facultade de Agronomia Eliseu Maciel
Campus Universitario – CP 354 – 96.010.900 – Pelotas – RS - Brasil
1
Ministério da Educação
Universidade Federal de Pelotas
Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia Agroindustrial






LUCIANO LUCCHETTA



CARACTERIZAÇÃO DE MELÕES TRANSGÊNICOS ACC OXIDASE ANTISENSE E
ESTUDO BIOQUÍMICO DE ÁLCOOL ACILTRANSFERASES ENVOLVIDAS NA
BIOSSÍNTESE DE AROMAS



Tese apresentada à Universidade Federal
de Pelotas, como requisito para à
obtenção do título de Doutor em Ciências
(área do conhecimento: Ciência e
Tecnologia Agroindustrial).


Orientadores:
Cesar Valmor ROMBALDI
Alain LATCHÉ


PELOTAS
RIO GRANDE DO SUL – BRASIL
2007
2
AGRADECIMENTOS
(Remerciements)

A César Valmor Rombaldi, professor e amigo, pela confiança, pelos ensinamentos,
incentivo e pela permanente e inestimável orientação.
A Alain Latché e Jean-Claude Pech, pela confiança, pelos ensinamentos, incentivo e pela
permanente e inestimável orientação.
À Universidade Federal de Pelotas, Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Programa de
Pós-graduação em Ciência e Tecnologia Agroindustrial pela oportunidade e apoio para realizar
este trabalho.
Ao “Laboratoire de Génomique et Biotechnologie des Fruits, INRA/INP-ENSAT”, Toulouse
– França na pessoa do diretor chefe Mondher Bouzayen e toda a equipe, pelo apoio,
disponibilidade e confiança.
Ao Laboratório de Biologia Molecular do Centro de Biotecnologia – UFPel, na pessoa do
prof. Odir A. Dellagostin e sua equipe.
À CAPES, pelo apoio e pela concessão das bolsas para a realização dos trabalhos no
Brasil e no Exterior (estágio doutoral).
Aos professores do Programa de Pós-graduação em Ciência e Tecnologia Agroindustrial
pelo estímulo, ensinamentos, dedicação e amizade, em especial a Jorge Adolfo Silva, Leonardo
Nora, Moacir Cardoso Elias, Valdecir Carlos Ferri, Wladimir Padilha da Silva, Celso Medina
Fagundes, Germano Jorge Dornelles Soares, Pedro Luis Antunes, Álvaro Renato Guerra Dias e
Manoel Artigas Schirmer.
Aos membros da banca examinadora, pela disponibilidade, contribuições e dedicação.
Aos alunos de pós-graduação, bolsistas e estagiários do laboratório de biotecnologia de
alimentos pela convivência, contribuições, dedicação e amizade.
Aos colegas de pós-graduação, pelo apoio, incentivo e amizade.
A Marcio Roggia Zanuzo, colega e inestimável amigo, pelo apoio, incentivo, auxílio e
compreensão.
A Daniel Manriquez, colega e amigo, pelo apoio, incentivo e ensinamentos.
À minha namorada, Edinara, pelo apoio, compreensão, carinho e amor.
Aos meus pais, Lussidio e Iracema, e meu irmão, Marciano, pelo apoio, incentivo,
amizade e amor.
À minha filha, Stefany, pelo amor e luz em minha vida.
A DEUS, pelo dom da vida e benção.
3
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO.................................................................................................................12
2 REVISÃO BIBLIOGRÁFICA ...........................................................................................18
2.1 QUALIDADE DE FRUTOS ........................................................................................... 18
2.2 MATURAÇÃO DE FRUTOS ......................................................................................... 21
2.3 INTERAÇÃO ENTRE CITOCININAS E MATURAÇÃO: PLANTAS
TRANSGÊNICAS E ASPECTOS FISIOLÓGICOS........................................................ 26
2.4 INTERAÇÃO ENTRE ETILENO E MATURAÇÃO: ASPECTOS BIOQUÍMICOS
E FISIOLÓGICOS E PLANTAS TRANSGÊNICAS COM BAIXA PRODUÇÃO
DE ETILENO ................................................................................................................. 29
2.5 PRODUÇÃO DE COMPOSTOS VOLÁTEIS EM FRUTOS .......................................... 35

3 ARTIGO “I” ..................................................................................................................... 44
CHARACTERIZATION OF RIPENING BEHAVIOR IN TRANSGENIC
MELONS EXPRESSING AN ANTISENSE 1-AMINOCYCLOPROPANE-1-
CARBOXYLATE (ACC) OXIDASE GENE FROM APPLE. .......................................... 44
ABSTRACT........................................................................................................................44
3.1 INTRODUCTION .......................................................................................................... 45
3.2 MATERIALS AND METHODS ...................................................................................... 46
3.2.1 Plant material and transformation....................................................................... 46
3.2.2 Fruit ripening and analysis.................................................................................. 46
3.2.3 Color and pigments............................................................................................. 46
3.2.4 Firmness............................................................................................................. 47
3.2.5 Total soluble solids and acidity ........................................................................... 47
3.2.6 Internal ethylene concentration 47
3.3 RESULTS ..................................................................................................................... 47
3.3.1 Carotenoid and chlorophyll levels 47
3.3.2 Firmness, soluble solids content and titratable acidity........................................ 47
3.3.3 Color development in the rind and internal ethylene concentration .................... 48
3.4 DISCUSSION ............................................................................................................... 48
3.4 REFERENCES ............................................................................................................. 51

4 ARTIGO “II” .................................................................................................................... 54
ETILENO E CITOCININAS NA SÍNTESE DE ÉSTERES EM MELÕES
‘CANTALOUPE’, TRANSFORMADOS GENETICAMENTE COM UM CLONE DA ACC
OXIDASE DE MAÇÃ EM ORIENTAÇÃO ANTISENSE................................................ 54
RESUMO............................................................................................................................54
ABSTRACT........................................................................................................................ 55
4.1 INTRODUÇÃO.............................................................................................................. 56
4
4.2 MATERIAL E MÉTODOS ............................................................................................. 57
4.2.1 Material vegetal .................................................................................................. 57
4.2.2 Análise do etileno ............................................................................................... 58
4.2.3 RT-PCR da ACC oxidase e Cm-AAT.................................................................. 58
4.2.4 Compostos voláteis ............................................................................................ 58
4.2.5 Western Blot ....................................................................................................... 59
4.2.6 Zeatina e Zeatina ribose em casca e polpa ........................................................ 59
4.3 RESULTADOS ............................................................................................................. 60
4.4 DISCUSSÃO...............................................................................