Étude de l'effet prophylactique, propriétés immunogènes et effet adjuvant, de la profiline des Apicomplexes contre la toxoplasmose chronique en modèle murin, Prophylactic effects of profilins of apicomplexa parasites against chronicle toxoplasmosis infection in mice

Dorsaf Hedhli

Description

Sous la direction de Marie Noëlle Mevelec
Thèse soutenue le 17 décembre 2008: Tours
Toxoplasma gondii, protozoaire intracellulaire obligatoire, est l’agent responsable de la toxoplasmose, infection qui revêt un caractère sévère au cours de toxoplasmoses cérébrales ou congénitales en médecines humaine et vétérinaire. Aucun vaccin n’est actuellement disponible ; le développement de stratégies vaccinales efficaces s’impose. Au cours de notre étude nous avons développé deux approches vaccinales basées sur l’utilisation des profilines des apicomplexes en tant qu’immunogène d’une part et en tant qu’adjuvant d’autre part, contre la toxoplasmose chronique chez la souris. Dans une stratégie de vaccination ADN, les profilines de T. gondii et de N. caninum, exprimées sous formes sécrétées par un vecteur bicistronique optimisé codant à la fois pour l’antigène et une molécule adjuvante le GM-CSF, induisent des réponses humorale et cellulaire de type Th1 et confèrent une protection (réduction du nombre de kystes cérébraux de 40%). La forme cytoplasmique de la profiline de T. gondii induit une réponse humorale similaire, une réponse cellulaire moindre et ne confère pas de protection. La profiline d’Eimeria tenella (protéine recombinante rEA) a été utilisée en tant qu’agoniste de Toll Like Recepteur (TLR 11) dans une stratégie d’immunisation par voie intrapéritonéale et nasale avec de l’extrait parasitaire de T. gondii. Par voie intrapéritonéale, rEA augmente les réponses humorale et cellulaire (Th1) et la protection par rapport aux souris immunisées avec l’extrait parasitaire seul (62% de réduction du nombre de kystes contre 36% seulement pour le lot immunisé avec l’extrait parasitaire seul). Par voie nasale, rEA augmente les réponses immunes de façon moindre. Néanmoins, une protection significative contre la phase chronique de l’infection est observée chez les souris immunisées avec l’extrait parasitaire associé à la protéine rEA (réduction de la charge parasitaire de 50 %) alors que les souris immunisées avec l’extrait seul ne sont pas protégées.
-Profilines
Toxoplasma gondii, an obligate intracellular protozoan, is the etiological agent of toxoplasmosis. This infection has severe consequences during cerebral or congenital toxoplasmosis both in human and veterinary medicines. No vaccine is currently available, so the design of efficient vaccine strategies is still a topical question. In this study, both the immunogenicity and the adjuvant properties of apicomplexan profilins were evaluated in a vaccine strategy against chronic infection in mice. DNA vaccination with T. gondii profilin and N. caninum profilin, expressed as secreted forms by bicistronic vectors which encode both the antigen and the adjuvant GM-CSF, induced humoral and cellular responses (Th1) and conferred protection (40% brain cysts reduction). The cytoplasmic form of T. gondii profilin induced a similar humoral response but a lower cellular immune response and did not confer protection. Recombinant Eimeria tenella profilin (rEA) was used as an agonist of TLR 11 within a strategy of immunization by intraperitoneal and nasal routes in combination with T. gondii antigen extract. By intraperitoneal route, rEA enhanced humoral and cellular immune responses and conferred a better protection in mice compared to mice immunized with T. gondii antigen alone (62% brain cysts reduction versus 32%). By nasal route, rEA enhanced both humoral and cellular immune responses (Th1) but to a less extent compared to the intraperitoneal route. However, a significant protection was observed (50% brain cysts reduction) compared to mice immunized with T. gondii antigen alone, which were not protected.
Source: http://www.theses.fr/2008TOUR3804/document

Informations

• Publié par: Thesee
• Nombre de lectures: 76
• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 2 Mo

Extrait

UNIVERSITÉ FRANÇOIS - RABELAIS
DE TOURS


ÉCOLE DOCTORALE Santé, Sciences et Technologie
UMR 483 Université-INRA, Laboratoire d’Immunologie Parasitaire,
Vaccinologie et Biothérapies Anti-Infectieuses

THÈSE présentée par :
Dorsaf HEDHLI

Soutenue le : 17 Décembre 2008


pour obtenir le grade de : Docteur de l’Université François - Rabelais
Discipline/ Spécialité : Sciences de la vie et de la santé/ Immunologie-Vaccinologie

Etude de l’effet prophylactique, propriétés
immunogènes et effet adjuvant, de la profiline
des Apicomplexess contre la toxoplasmose
chronique en modèle murin.


THÈSE dirigée par :
Mme. Marie Noëlle MEVELEC Chargée de recherche (HDR), INRA, Tours

RAPPORTEURS :
M. Ermanno CANDOLFI Professeur, Université Strasbourg I
Mme. Valérie QUESNIAUX Directeur de recherche, CNRS, Orléans


JURY :
M. Bernard CHARLEY Directeur de recherche, INRA, Jouy-en-Josas
M. Ermanno CANDOLFI Professeur, Université Strasbourg I
M. Fabrice LAURENT Directeur de recherche, INRA, Tours
Mme. Isabelle DIMIER-POISSON Professeur, Université François-Rabelais, Tours
Mme. Marie Noëlle MEVELEC Chargée de recherche (HDR), INRA, Tours
Mme. Valérie QUESNIAUX Directeur de recherche, CNRS, Orléans


Remerciements

Je remercie en premier lieu les Pr Bout et Dimier-Poisson qui m’ont accueillie au sein de
leur laboratoire pendant ces trois années de thèse.
Je tiens à témoigner ma reconnaissance à Monsieur Ermanno Candolfi et à Madame
Valérie Quésniaux d’avoir accepté d’être rapporteurs de ma thèse et d’avoir consacré de
leur temps à la lecture, l’analyse et la critique de ce travail.
Je voudrais remercier également Monsieur Bernard Charley et Monsieur Fabrice Laurent
d’avoir accepté de faire partie du jury et d’examiner cette thèse
Je tiens également à exprimer ma gratitude à Madame Marie Noëlle Mévélec pour sa
disponibilité, son encadrement et ses qualités humaines. Merci pour ta patience et ton
soutien.
Je remercie tous les membres de l’équipe du laboratoire d’Immunologie Parasitaire et
Vaccinologie, pour leur aide et assistance ; Jean-Marie pour son aide à chaque fois que
j’avais un souci informatique, Josette pour les magnifiques photos
d’immunofluorescence, ses phrases cultes et sa bonne humeur. Stéphanie pour sa
serviabilité, Nathalie pour ses conseils, Dany puis Sylvie pour leurs services.
Un grand merci à mes amis, qui m’ont énormément soutenue, pour les moments de
complicité et fous rires. Je leur souhaite à chacun(e) plein de réussite et de bonheur.
Merci infiniment à ma famille, particulièrement à mes parents qui m’ont soutenue tout au
long de mes études et continuent à me soutenir, j’espère que vous trouverez ce travail à la
hauteur de vos sacrifices. Merci à ma sœur et à mon petit frère qui malgré la distance ont
su et continué à m’encourager.
Je dédie ce travail à la mémoire de ma grand-mère qui nous a quitté avant de voir aboutir
le fruit de ses prières et de ses sacrifices, ta mémoire restera à jamais gravée dans mon
cœur.
2 Résumé

Toxoplasma gondii, protozoaire intracellulaire obligatoire, est l’agent responsable de la
toxoplasmose, infection qui revêt un caractère sévère au cours de toxoplasmoses
cérébrales ou congénitales en médecines humaine et vétérinaire. Aucun vaccin n’est
actuellement disponible ; le développement de stratégies vaccinales efficaces s’impose.
Au cours de notre étude nous avons développé deux approches vaccinales basées sur
l’utilisation des profilines des apicomplexes en tant qu’immunogène d’une part et en tant
qu’adjuvant d’autre part, contre la toxoplasmose chronique chez la souris.
Dans une stratégie de vaccination ADN, les profilines de T. gondii et de N. caninum,
exprimées sous formes sécrétées par un vecteur bicistronique optimisé codant à la fois
pour l’antigène et une molécule adjuvante le GM-CSF, induisent des réponses humorale
et cellulaire de type Th1 et confèrent une protection (réduction du nombre de kystes
cérébraux de 40%). La forme cytoplasmique de la profiline de T. gondii induit une
réponse humorale similaire, une réponse cellulaire moindre et ne confère pas de
protection.
La profiline d’Eimeria tenella (protéine recombinante rEA) a été utilisée en tant
qu’agoniste de Toll Like Recepteur (TLR 11) dans une stratégie d’immunisation par voie
intrapéritonéale et nasale avec de l’extrait parasitaire de T. gondii. Par voie
intrapéritonéale, rEA augmente les réponses humorale et cellulaire (Th1) et la protection
par rapport aux souris immunisées avec l’extrait parasitaire seul (62% de réduction du
nombre de kystes contre 36% seulement pour le lot immunisé avec l’extrait parasitaire
seul). Par voie nasale, rEA augmente les réponses immunes de façon moindre.
Néanmoins, une protection significative contre la phase chronique de l’infection est
observée chez les souris immunisées avec l’extrait parasitaire associé à la protéine rEA
(réduction de la charge parasitaire de 50 %) alors que les souris immunisées avec l’extrait
seul ne sont pas protégées.

Mots clés : Toxoplasma gondii, vaccination, profiline des apicomplexes.




3 Summary


Toxoplasma gondii, an obligate intracellular protozoan, is the etiological agent of
toxoplasmosis. This infection has severe consequences during cerebral or congenital
toxoplasmosis both in human and veterinary medicines. No vaccine is currently available,
so the design of efficient vaccine strategies is still a topical question.
In this study, both the immunogenicity and the adjuvant properties of apicomplexan
profilins were evaluated in a vaccine strategy against chronic infection in mice.
DNA vaccination with T. gondii profilin and N. caninum profilin, expressed as secreted
forms by bicistronic vectors which encode both the antigen and the adjuvant GM-CSF,
induced humoral and cellular responses (Th1) and conferred protection (40% brain cysts
reduction). The cytoplasmic form of T. gondii profilin induced a similar humoral response
but a lower cellular immune response and did not confer protection.
Recombinant Eimeria tenella profilin (rEA) was used as an agonist of TLR 11 within a
strategy of immunization by intraperitoneal and nasal routes in combination with T.
gondii antigen extract. By intraperitoneal route, rEA enhanced humoral and cellular
immune responses and conferred a better protection in mice compared to mice immunized
with T. gondii antigen alone (62% brain cysts reduction versus 32%). By nasal route, rEA
enhanced both humoral and cellular immune responses (Th1) but to a less extent
compared to the intraperitoneal route. However, a significant protection was observed
(50% brain cysts reduction) compared to mice immunized with T. gondii antigen alone,
which were not protected.

Key words: Toxoplasma gondii, vaccination, profilins of apicomplexa.










4 Sommaire

Introduction 13
Revue bibliographique 16

A- T. gondii et Toxoplasmose

I- Historique 17
II- Description du parasite 17
II-1- Le tachyzoïte …………………………………………………………..18
II-2- Le bradyzoïte………………………………………………………….. 20
II-3- Le sporozoïte…………………………………………………………...22
III- Le cycle parasitaire 22
III-1- Cycle sexué chez l’hôte définitif…………………………………… 23
III-2- Cycle asexué chez l’hôte intermédiaire………………………………..24
IV- Génétique et virulence