MINISTERE DE LA JEUNESSE DE L'ÉDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE

Xavier Ronot - Président

Description

Niveau: Supérieur

• mémoire

MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L'ÉDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Section des Sciences de la Vie et de la Terre MEMOIRE présenté et soutenu le 29 janvier 2007 par PARADISSIS Agnès Pour l'obtention du diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes ETUDE DE L'EFFET DU SCLAREOL SOUS FORME LIBRE ET LIPOSOMALE SUR DES LIGNEES CELLULAIRES CANCEREUSES devant le jury suivant : Dr. Xavier RONOT - Président Pr. Jean-Marie EXBRAYAT - Tuteur pédagogique Dr Jacques LAUTIER - Examinateur Dr Emmanuelle GORMALLY - Examinateur Rapporteur du Mémoire : Dr Claire BELLATON Laboratoire EPHE: Reproduction et Développement des Vertébrés, Université Catholique de Lyon, France Directeur : Prof. JM EXBRAYAT Laboratoire d'accueil: Technologie Pharmaceutique, Faculté de Pharmacie d'Athènes, Grèce Tuteur scientifique: Pr. assoc. Dr C. DEMETZOS EPHE Banque de Monographies SVT 1

• trichloracetic acid


• lignée cellulaire


• composition chimique


• médicaments anticancéreux……


• membrane


• sclaréol


• détermination du taux de viabilité cellulaire……


• acid hepes

Sujets

• Mémoire
• Université catholique de Lyon
• Lignée cellulaire

Informations

• Publié par: profil-nechor-2012
• Publié le: 01 janvier 2007
• Nombre de lectures: 29
• Langue: Français

Extrait

MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L’ÉDUCATION NATIONALE
ET DE LA RECHERCHE

ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES
Section des Sciences de la Vie et de la Terre

MEMOIRE

présenté et soutenu le 29 janvier 2007
par
PARADISSIS Agnès

Pour l’obtention du diplôme de l’Ecole Pratique des Hautes Etudes


ETUDE DE L’EFFET DU SCLAREOL SOUS FORME LIBRE ET
LIPOSOMALE SUR DES LIGNEES CELLULAIRES CANCEREUSES



devant le jury suivant :

Dr. Xavier RONOT - Président
Pr. Jean-Marie EXBRAYAT - Tuteur pédagogique
Dr Jacques LAUTIER - Examinateur
Dr Emmanuelle GORMALLY - Examinateur

Rapporteur du Mémoire : Dr Claire BELLATON

Laboratoire EPHE:
Reproduction et Développement des Vertébrés,
Université Catholique de Lyon, France
Directeur :
Prof. JM EXBRAYAT
[e-mail]

Laboratoire d’accueil:
Technologie Pharmaceutique,
Faculté de Pharmacie d’Athènes, Grèce
Tuteur scientifique:
Pr. assoc. Dr C. DEMETZOS
EPHE Banque de Monographies SVT [e-mail]






Résumé des travaux
L’étude présente concerne principalement la nano-encapsulation du sclaréol et ses
perspectives dans la thérapie du cancer du côlon, du poumon et du sein humain. Des essais
in vitro, effectués auparavant, ont démontré, que cette molécule présente un pouvoir
cytotoxique vis-à-vis de certaines lignées cellulaires humaines cancéreuses. Une étude in
vivo, récemment effectuée sur des xénogreffes de cellules cancéreuses colorectales
humaines (lignée cellulaire HCT-116) a montré l’effet du sclaréol, associé à des liposomes,
sur la croissance d’une tumeur sous-cutanée. La composition lipidique des trois lignées
cellulaires, représentant les trois types de cancer (cancer du côlon, du poumon et du sein), a
été analysée. Les trois lignées cellulaires ont été traitées par le sclaréol sous forme libre et
liposomale; l’effet de l’agent sur la croissance cellulaire a pu être suivi après absorption de
celui-ci par les lignées cellulaires. La lignée HCT-116 (cancer du côlon) a été
traitée par le sclaréol sous forme libre et liposomale, afin de détecter la biodistribution de
cette molécule au niveau de trois fractions cellulaires (cytosol, membranes et noyau).
L’analyse qualitative et quantitative des lipides cellulaires a donné un profil lipidique similaire
pour les trois lignées cellulaires avec la phosphatidylcholine comme lipide prédominant.
L’effet du sclaréol sur la croissance cellulaire est dépendent du temps d’incubation. Le
sclaréol libre a démontré une forte cytotoxicité, alors que sous sa forme liposomale cette
cytotoxicité est diminuée mais retient sa capacité à réduire le taux de croissance cellulaire.
L’absorption du sclaréol liposomal a été plus lente et de faible concentration, comparant à
l’agent libre. La biodistribution du sclaréol au niveau des trois fractions cellulaires a montré
que sous forme liposomale le sclaréol est incorporé en premier dans les membranes, puis
dans le cytosol et le noyau contrairement à la forme libre qui est directement introduit dans le
cytosol. Ces résultats viennent se rajouter dans l’ensemble des résultats sur le sclaréol qui
pourraient conduire au développement d’un agent anticancéreux vis-à-vis du cancer du
côlon, poumon ou sein humains.

Mots-clés: Sclaréol, liposomes, absorption, fractionnement subcellulaire







Table des Matières
Liste des abréviations.………………………. ………………………………………….….… 7
EPHE Banque de Monographies SVT 2Glossaire……………………………………………………………………….…………......….9
Introduction générale……………………………………………………………………….….12
Chapitre I : Revue bibliographique……………......................………...……...…...……12
A. Les lipides membranaires……………………………….…………………………….…12
A.1 Structure des membranes biologiques………………………………………….….. ….12
A. 2. 1 Les glycérophospholipides (ou phospholipides)………..………….……................12
A. 2. 2 Les sphingolipides………..…………………..………………………….………….….13
B. Le cancer…………………..……………………………….…………………..……………17
B.1 Processus tumoral………………………………………………………….……………....17
B. 2 Nomenclature générale des tumeurs…………………………………………….……....17
B. 3 Classification des néoplasmes du sein, du poumon et du côlon humain………….…18
C. Le côlon……………..………………………………………………………………………...19
C. 1 Structure et fonction du côlon……………………………………………...……………...19
C. 2 Cancérogenèse colique………………………………………………..…….………….…20
D. Le poumon……………………………………………………………………………………..21
D. 1 Structure et fonction du poumon………………….……………..………………..…..…..21
D. 2 pulmonaire…………….…………………………………………..…..…22
E. Le sein…………………..……………………………………………………………………..23
E. 1 Structure et fonction du sein……………...……….……………..………………..…..…..23
E. 2 Cancérogenèse mammaire……….…….…………………………………………....……24
F. La thérapie du cancer..………………….……………………………………..………….. 25
F. 1 Méthodes de traitement du cancer…..…………………………………………………...25
F. 2 La chimiothérapie – les médicaments anticancéreux……...………………………......25
F. 2. 1 Classification des anticancéreux…..…….………………..................26
F. 2. 2 Nocivité des médicaments anticancéreux……………….………………………......28
G. Développement de nouveaux systèmes pharmaceutiques………………...……..29
G. 1 Les systèmes colloïdaux…………………………….……………………..………...….29
G. 2 Les liposomes…………..…………………………….……………………..………...….30
G. 3 La sauge sclarée et le sclaréol……………………………………………..…….…..…32
H. Buts du projet de recherche...………………………………………….…………...….. 33
Chapitre II: Matériel et méthodes..……………......................………...……...…...….... 35
A. Matériaux………..……………………………………………………………………......….36
B. Méthodes……………..……………………………………………………………………….37
B. 1 Cultures cellulaires……...………………………………………...……………...........…..37
B. 1. 1 Mise en culture des lignées cellulaires…………………………………...…………...37
B. 1. 2 Mise en sous culture…………………..…………………….……………………….….38
B. 1. 3 Congélation et décongélation des lignées cellulaires………………………..…..….38
B. 2 Etudes analytiques……...………………………………………...…………….………....39
B. 2. 1 Analyse de la composition lipidique des lignées cellulaires….…………………..….39
B. 3 Etudes pharmacotechniques…...…………..…………………….…………………....….41
B. 3. 1 Préparation et caractérisation du sclaréol liposomal….…………………………..….41
B. 4 Etudes pharmacologiques…………………..…………………….……………..………..41
B. 4. 1 Traitement des lignées cellulaires au sclaréol……...…………………..…………….41
B. 4. 2 Détermination du taux de viabilité cellulaire……...……...……………………………..42
B. 4. 3 du taux d’absorption du sclaréol par les cellules..………………..….44
B. 4. 4 Fractionnement cellulaire de la lignée cellulaire HCT-116..………………….…..…..44
Chapitre III: Résultats expérimentaux…….……………………………..…………..……..46IV: Discussion…………………………………………………….……………...…..58V: Conclusion ……………………………………………………..……………….…67
Références bibliographiques……………………………………………….…………………….70
Annexe…………………………………………………………………………………….………..77



EPHE Banque de Monographies SVT 3Liste des Abréviations
DAPI : 4’,6-diamidino-2-phenylindole
DG : Diglycérides
DMSO : Dimethyl Sulfoxyde
DPPG : Dipalmytolyl Phopsphatidyl Glycerol
DTT :1,4-Dithio-DL-threitol
EDTA : Ethylene diamine tetracetic acid
EGTA : Ethylene glycol-bis (2-aminoethyl-ether)-N,N,N’,N’-tetracetic acid
FFA : Free fatty Acid
Hepes : (N-[2-Hydroxyethyl] piperazine-N’-[2-ethanesulfonic acid])
HPTLC-FID : High Performance Thin Layer Chromatography - Flame Ionisation Detector
KCl : Potassium Chloride
L-Glu : L-Glutamine
l-PC : Lyso-Phopsphatidyl Choline
mg : Miligramme
MG : Monoglycérides
MgCl : Magnesium Chloride2
Min : Minutes
mL : Millilitres
NCI : National Cancer Institut
NIH : National Institutes of Health
NSCLC : Non-Small Cell Lung Cancer
PA : Phosphatidic Acid
PBS : Phosphate Buffered Saline
PC : Phosphatidylcholine
PE : Phosphatidyléthanolamine
PG : Phosphatidylglycérol
PI : Phosphatidylinositol
PMSF: Phenyl methyl sulfoxide fluoride
PS : Pénicilline - Streptomycine
PS : Phosphatidylsérine
RPMI : Roswell Park Memorial Institute
SCLa : Sclaréol
Sphm : Sphingomyéline
TCA : Trichloracetic Acid
TG : Triglycérides
Tris : (Tris [hydroxymethyl] aminomethane)
μL : Microlitres




Introduction Bibliographique
EPHE Banque de Monographies SVT 4A. LES LIPIDES MEMBRANAIRES
A. 1 Structure des membranes biologiques
La proposition de Gorter et Grendel, selon laquelle les membranes de la cellule sont
composées d’une double couche lipidique, est valable jusqu’à aujourd’hui (Gorter et Grendel,
1925). Davson et Danielli ont compl