Agua de coco, suero fetal bovino, Aloe vera y sus combinaciones para criopreservar semen ovino (Coconut milk, bovine fetal serum, Aloe vera and their combinations for cryopreservation of ovine semen)

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Resumen
Se evaluó agua de coco (AC), (Cocus nucifera) y su combinación con suero fetal bovino (SFB) o aloe vera (AV), (Aloe barbadensis) para preservar semen ovino. El diluyente base fue 50 p.100 AC y 50 p.100 citrato de sodio (2,9 p.100), con 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70 p.100 de SFB o AV. Se utilizó un ovino Blackbelly. Con un modelo de regresión múltiple con intercepto cero, se evaluaron motilidad progresiva (MP) y espermas vivos (EV), en cinco etapas: al diluir el semen a 35ºC, finalizado el equilibramiento, concluida la congelación, y a las 48 h y 90 d poscongelamiento. La mayoría de las combinaciones tuvieron valores iguales o superiores al testigo con 40 p.100 de MP a 90 d poscongelamiento aunque las combinaciones 10-70 SFB y 40-40 AV fueron mejores con 60 p.100 de MP. En conclusión las diferentes combinaciones de AC con SFB o AV, fueron apropiadas para la preservación de semen ovino, salvo las combinaciones en donde se excedía el 50 p.100 de AV.
Abstract
The objective was to evaluate the coconut milk added with bovine fetal serum (SFB) or aloe vera (AV), (Aloe barbadensis) for Blackbelly ram semen cryopreservation. Base diluent was 50 percent coconut milk (AC) and 50 percent sodium citrate (2.9 percent) added with either 10, 20, 30, 40, 50, 60, and 70 percent SFB or AV. The progressive motility (MP) and live sperm (EV) were evaluated at semen dilution, equilibrium time, immediately after freezing and 48 h and 90 d after freezing. Multiple regression model was used for data analysis. Most treatments were equal or showed higher values than control (40 percent MP) at 90 d postfreezing, however, extenders 10-70 SFB and 40-40 AV were the best diluents with 60 percent of MP. In conclusion, different combinations of AC with SFB or AV, gave appropiate results for ram semen dilution and preservation, but if AV is higher than 50 percent showed detrimental effects.
Publié le : dimanche 1 janvier 2006
Lecture(s) : 58
Source : Archivos de Zootecnia 0004-0592 2006 Volumen 55 Número 209 pp: 101-104
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NOTA BREVE
AGUA DE COCO, SUERO FETAL BOVINO, ALOE VERA Y SUS
COMBINACIONES PARA CRIOPRESERVAR SEMEN OVINO
COCONUT MILK, BOVINE FETAL SERUM, ALOE VERA AND THEIR COMBINATIONS
FOR CRYOPRESERVATION OF OVINE SEMEN
1 1 1 1Gutiérrez, A.J. , R.W. Cosme , C.J.A. Jiménez y G.J.A. Ramírez
1Facultad de Zootecnia. UACH. Apdo. Postal 4-28. C.P. 31031, Chihuahua, Chih. México.
Correo electrónico: jagual2208@hotmail.com
PALABRAS CLAVE ADICIONALES ADDITIONAL KEYWORDS
Congelamiento. Espermatozoides vivos. Motili- Freezing. Live spermatozoa. Progressive motility.
dad progresiva. Blackbelly. Blackbelly.
RESUMEN
milk added with bovine fetal serum (SFB) or aloeSe evaluó agua de coco (AC), (Cocus
nucifera) y su combinación con suero fetal bo- vera (AV), (Aloe barbadensis) for Blackbelly
vino (SFB) o aloe vera (AV), ( Aloe barbadensis) ram semen cryopreservation. Base diluent was
para preservar semen ovino. El diluyente base 50 percent coconut milk (AC) and 50 percent
fue 50 p.100 AC y 50 p.100 citrato de sodio (2,9 sodium citrate (2.9 percent) added with either 10,
p.100), con 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70 p.100 de 20, 30, 40, 50, 60, and 70 percent SFB or AV. The
progressive motility (MP) and live sperm (EV)SFB o AV. Se utilizó un ovino Blackbelly. Con un
modelo de regresión múltiple con intercepto cero, were evaluated at semen dilution, equilibrium
se evaluaron motilidad progresiva (MP) y esper- time, immediately after freezing and 48 h and 90
mas vivos (EV), en cinco etapas: al diluir el semen d after freezing. Multiple regression model was
a 35ºC, finalizado el equilibramiento, concluida la used for data analysis. Most treatments were
congelación, y a las 48 h y 90 d poscongelamiento. equal or showed higher values than control (40
percent MP) at 90 d postfreezing, however,La mayoría de las combinaciones tuvieron valo-
res iguales o superiores al testigo con 40 p.100 extenders 10-70 SFB and 40-40 AV were the
de MP a 90 d poscongelamiento aunque las best diluents with 60 percent of MP. In conclusion,
combinaciones 10-70 SFB y 40-40 AV fueron different combinations of AC with SFB or AV,
mejores con 60 p.100 de MP. En conclusión las gave appropiate results for ram semen dilution
diferentes combinaciones de AC con SFB o AV, and preservation, but if AV is higher than 50
percent showed detrimental effects.fueron apropiadas para la preservación de se-
men ovino, salvo las combinaciones en donde se
excedía el 50 p.100 de AV.
INTRODUCCIÓN
El procesamiento de semen permi-SUMMARY
te utilizar recursos genéticos a largo
The objective was to evaluate the coconut plazo. En ovinos este método es limita-
Arch. Zootec. 55 (209): 101-104. 2006.
13NotaAguaSueroGutierrez.p65 101 09/03/2006, 9:07GUTIÉRREZ, COSME, JIMÉNEZ Y RAMÍREZ
do por una reducción de la población bajo los criterios mínimos de referen-
de células móviles, posdesconge- cia: 1) Volumen ‡1.0 ml; 2) MP ‡80
lamiento (Watson, 2000). Los objeti- p.100; 3) EV ‡85 p.100; 4) Células
vos fueron evaluar AC y diferentes anormales £15 p.100 y 5) pH entre 6.5
combinaciones con SFB o AV, para la y 7.5. Se emplearon diluyentes con 50
criopreservación de semen ovino a lar- p.100 de AC y 50 p.100 de citrato de
go plazo así como encontrar los mejo- sodio al 2,9 p.100 en combinación con
res niveles de estos extensores semi- SFB o AV, éstos en concentraciones
nales, para conservar el potencial ge- de 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70 p.100,
nético de un buen semental. además de 14 p.100 yema de huevo
(YH) y 7 p.100 de glicerol. Se proba-
ron 14 diluyentes y un testigo (80-0),
MATERIAL Y MÉTODOS los cuales contenían 1 mg/ml de es-
treptomicina y 1000 UI/ml de penicili-
El estudio se realizó en Chihuahua, na. Se usó D-fructosa a razón de 1, 2
México. Como fuente de células es- y 2,5 g/100 ml para el testigo, SFB y
permáticas, se utilizó un ovino AV respectivamente. El pH de los
Blackbelly adulto. Se recolectaron 15 diluyentes se mantuvo entre 6,5 y 7,5.
eyaculaciones (una por tratamiento), El AC, SFB y el gel de AV se deben
Tabla I. Porcentajes de motilidad progresiva y espermatozoides vivos en cinco períodos de
evaluación. (Percentages of progressive motility and live sperm in five periods of evaluation).
Motilidad progresiva (p.100) Espermas vivos (p.100)
Tratamiento Combinación T0 TE TC 48 h 90 d T0 T.E TC 48 h 90 d
1 80-0 (testigo) 80 50 40 40 40 80 60 40 40 40
2 70-10 SFB 80 70 40 40 40 85 75 40 40 40
3 60-20 SFB 90 60 55 55 50 90 85 55 55 50
4 50-30 SFB 85 80 45 45 40 85 80 45 45 40
5 40-40 SFB 80 75 50 50 40 85 75 50 50 40
6 30-50 SFB 90 70 60 60 50 90 85 60 60 50
7 20-60 SFB 90 70 50 50 50 90 70 50 50 50
8 10-70 SFB 90 80 70 70 60 90 80 70 70 70
9 70-10 AV 80 60 40 40 40 80 80 50 50 40
10 60-20 AV 85 80 50 50 50 85 80 60 60 60
11 50-30 AV 85 60 50 50 50 85 60 50 50 50
12 40-40 AV 85 85 60 60 60 85 85 70 70 60
13 30-50 AV 85 60 50 50 50 85 60 50 50 50
14 20-60 AV 85 80 30 30 30 85 80 30 30 30
15 10-70 AV 90 60 20 20 20 90 85 20 20 20
T0= (semen más diluyente A a 35ºC), TE (finalizado el tiempo de equilibramiento), TC (concluido el proceso
de congelamiento), 48 h (48 h poscongelamiento) y 90 d (90 d poscongelamiento).
Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 102.
13NotaAguaSueroGutierrez.p65 102 09/03/2006, 9:07CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN CON AGUA DE COCO, SUERO FETAL O A. VERA
filtrar con papel del número 42 para su 14 p.100 v/v de glicerol. El semen se
uso. El semen se recolectó con vagina mezcló con la fracción A y ambas
artificial con un tubo graduado en fracciones se enfriaron de 35ºC a 5ºC
décimas de ml (Evans y Maxwell, en 120 min. A 5ºC se añadió al semen
1990). Se evaluó macroscópicamente el diluyente B en cuatro porciones (10,
(volumen y color). La muestra se colo- 20, 30 y 40 p.100), con 15 min entre
có en baño María a 35°C y de ahí con cada adición y con 3 h de equilibrio.
un microscopio de luz (Leica con mo- Las pajillas se congelaron en nitrógeno
nitor Sony), se evaluaron MP y EV con líquido, bajando la temperatura a -120ºC
aumentos de 400 y 100 diámetros, res- por 12 min y posteriormente a -196ºC.
pectivamente (Ax et al., 2002). Se Se descongelaron tres pajillas por tra-
realizó una dilución fija de 1:9 tamiento en agua a 37ºC durante 30 s
(semen:diluyente) para obtener una y se evaluaron inmediatamente. Con
concentración aproximada de 120 mi- un modelo de regresión múltiple con
llones de espermatozoides por pajilla intercepto cero (SAS Institute, 2001)
de 0,5 ml (Nunes y Fernández, 2001). se evaluaron las variables MP y EV al
El diluyente se dividió en dos fraccio- diluir el semen a 35ºC, finalizado el
nes, A y B, a la fracción B se le añadió equilibramiento; concluido el proceso
Tabla II. Modelos ajustados al porcentaje de motilidad progresiva y espermas vivos en los
cinco tiempos de evaluación. (Fitted models for percentage of progressive motility and live sperm
in five periods of evaluation).
Motilidad progresiva (p.100) Espermas vivos (p.100)
Modelo: Y=b (AC)+b (SFB) Modelo: Y=b (AC)+b (SFB)
1 2 1 2
Parámetros estimados Parámetros estimados
2 2b b R b b R
1 2 1 2
Tiempo SFB
T0 0,808333 + 0,917857 0,9984 0,829167 + 0,919643 0,9993
TE 0,595833 + 0,819643 0,9900 0,716667 + 0,821429 0,9912
TC 0,395833 + 0,662500 0,9875 0,395833 + 0,662500 0,9875
48h
90d 0,383333 + 0,564286 0,9901 0,366667 + 0,614286 0,9815
Modelo: Y=b (AC)+b (AV) Modelo: Y=b (AC)+b (AV)
1 2 1 2
Parámetros estimados Parámetros estimados
2 2b b R b b R
1 2 1 2
Tiempo SFB
T0 0,804167 + 0,894643 0,9997 0,804167 + 0,894643 0,9997
TE 0,612500 + 0,741071 0,9719 0,679167 + 0,812500 0,9815
TC 0,500000 + 0,328571 0,9386 0,566667 + 0,328571 0,9251
48h
90d 0,9386 0,525000 + 0,325000 0,9326
Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 103.
13NotaAguaSueroGutierrez.p65 103 09/03/2006, 9:07GUTIÉRREZ, COSME, JIMÉNEZ Y RAMÍREZ
de congelamiento, y a las 48 h y 90 d yor favoreció la MP y EV fue el AC.
poscongelamiento. A los 90 d poscongelamiento la
combinación 40-40 AV fue la mejor
con 60 p.100 de MP, dichos resultados
RESULTADOS Y DISCUSIÓN son mayores a los reportados por Ro-
dríguez (1988) con un diluyente con
La tabla I muestra los resultados base en AV (40 p.100 AV, 54 p.100 de
para MP y EV en diferentes periodos citrato de sodio al 3 p.100) donde en-
de la evaluación. La tabla II muestra contró 49,5 p.100 de MP al descon-
los modelos ajustados para dichas va- gelamiento. Al comparar el mejor tra-
riables, se puede observar que en casi tamiento, 10-70 SFB (60 p.100 MP),
todos los tiempos ß2 es superior a ß1 concuerda con lo encontrado por Ma-
excepto para el diluyente AV del TC drid (2004) el cual combinó SFB al 30
(concluido el proceso de conge- p.100, 10 p.100 YH y 60 p.100 de
lamiento), en adelante esta diferencia citrato de sodio al 2,9 p.100, obtenien-
se puede atribuir a que al utilizar nive- do MP de 65 p.100.
les altos del diluyente AV se obtuvie- En conclusión utilizar más de 50
ron MP y EV bajos, no cumpliendo con p.100 de gel de AV es nocivo para la
los estándares para semen desconge- criopreservación de células espermá-
lado (Giles, 1993). En estas combina- ticas, ya que las motilidades son infe-
ciones AC-AV al ser mayor ß1 que ß2, riores a las requeridas para semen
nos indica que el ingrediente que ma- congelado.
BIBLIOGRAFÍA
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Recibido: 24-6-05. Aceptado13-7-05.
Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 104.
13NotaAguaSueroGutierrez.p65 104 09/03/2006, 9:07

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