Efecto de la osmolaridad, sobre el diámetro y la calidad de oocitos bovinos madurados in vitro (Osmolarity effect on the diameter and the quality of in vitro matured bovine oocytes)

Yasser

Description

Resumen
Los oocitos son susceptibles a cambios osmolares, presentando fenómenos que afectan la membrana plasmática. Objetivo. Evaluar el efecto de la hipo y la hiperosmolaridad del medio de cultivo sobre el diámetro y la calidad de oocitos madurados in vitro. Materiales y métodos. Se utilizaron 75 oocitos de excelente y buena calidad, como medio de control se empleó el M 199 suplementado con suero fetal bovino, 10%, hormona folículo estimulante (30 µg ) y hormona luteinizante (30 µg), piruvato, cuya osmolaridad es 290 mOsm/l (T2). Los oocitos fueron sometidos a dos concentraciones osmolares: medio hiperosmótico 497mOsm/L (T1), y medio hiposmótico 150mOsm/L (T3), se midió el diámetro y calidad a las 0 y 24 horas. Resultados. El diámetro de los oocitos a las 24 horas fue mayor en el T3 (148,7±9.7) y menor en el T1 (134,6±1.2) con respecto al control (147.9±11.5) (p<0.05.). No se encontró diferencia entre el porcentaje de oocitos de excelente y buena calidad a las 24 horas del tratamiento T1 respecto al control (56% y 60%) (p>0.05.), pero la calidad en el T3 fue menor (36%). Conclusiones. El medio hiperosmótico presenta un mayor detrimento sobre los oocitos que el medio hiposmótico, posiblemente porque los oocitos presenten mas mecanismos para evitar la entrada de agua del medio extracelular, que para evitar la salida de solutos y agua intracelular. Se evidencia la necesidad de adoptar medidas rigurosas en el control de calidad de osmolaridad de los medios de cultivo empleados en los procesos de maduración in vitro de oocitos.
Abstract
Ooocytes are susceptible to osmolar changes, and show some phenomena that affect the plasma membrane Objective. To evaluate the effect of hypo and hyperosmolarity from the culture’s environment on the diameter and the quality of in vitro matured oocytes. Materials and methods. 75 oocytes of excellent and good quality were use in the study. As a control the M 199 was used, suplemented with 10 % of FCS, 30 µg of FSH and 30 µg of LH (290 mOsm/l T2). The oocytes were evaluated under two osmolar concentrations: Hyperosmotic media, 497mOsm/L (T1), and hyposmotic media 150mOsm/L (T3). The diameter and the quality were measured at 0 hours and after 24 hours. Results. The oocyte diameter at 24 hours was bigger in the T3 (148,7±9.7) and smaller in the T1 (134,6±1.2). Regarding the control (147.9±11.5) (p <0.05.), no difference was found between the percentage of excellent and good quality oocytes after 24 hours of treatment T1 in comparison to the control (56 % and 60 %) (p> 0.05.), but the quality in the T3 was lower (36 %). Conclusions. It was demonstrated that the hyperosmotic media had a bigger detrimental effect on the oocytes than the hyposmotic media. It is possible that the oocytes show more mechanisms to avoid the water flow into the cytoplasm than to avoid the exit of solutes and water flow towards the outside. The necessity to adopt rigorous measurements in the quality control of osmolarity for the culture mediums used in the processes of in vitro maturation for oocytes, is evident.

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• Publié par: erevistas
• Publié le: 01 janvier 2009
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Extrait

Artículo original
Efecto de la osmolaridad, sobre el diámetro y la calidad de
oocitos bovinos madurados in vitro*
Yasser Yohan Lenis Sanin**, Luis Fernando Restrepo Betancur***,
Martha Olivera Angel****, Ariel Marcel Tarazona Morales*****
Resumen Osmolarity effect on the diameter and the
quality of in vitro matured bovine oocytes
Los oocitos son susceptibles a cambios osmolares,
presentando fenómenos que afectan la membrana Abstract
plasmática. Objetivo. Evaluar el efecto de la hipo y
Ooocytes are susceptible to osmolar changes, andla hiperosmolaridad del medio de cultivo sobre el diá-
metro y la calidad de oocitos madurados in vitro. show some phenomena that affect the plasma mem-
brane Objective. To evaluate the effect of hypo andMateriales y métodos. Se utilizaron 75 oocitos de
hyperosmolarity from the culture’s environment onexcelente y buena calidad, como medio de control
the diameter and the quality of in vitro matured oo-se empleó el M 199 suplementado con suero fetal
cytes. Materials and methods. 75 oocytes of excel-bovino, 10%, hormona folículo estimulante (30 µg ) y
lent and good quality were use in the study. As a con-hormona luteinizante (30 µg), piruvato, cuya
trol the M 199 was used, suplemented with 10 % ofosmolaridad es 290 mOsm/l (T2). Los oocitos fueron
FCS, 30 µg of FSH and 30 µg of LH (290 mOsm/lsometidos a dos concentraciones osmolares: medio
T2). The oocytes were evaluated under two osmolarhiperosmótico 497mOsm/L (T1), y medio hiposmótico
concentrations: Hyperosmotic media, 497mOsm/L150mOsm/L (T3), se midió el diámetro y calidad a
(T1), and hyposmotic media 150mOsm/L (T3). Thelas 0 y 24 horas. Resultados. El diámetro de los
diameter and the quality were measured at 0 hoursoocitos a las 24 horas fue mayor en el T3 (148,7±9.7)
and after 24 hours. Results. The oocyte diameter aty menor en el T1 (134,6±1.2) con respecto al control
24 hours was bigger in the T3 (148,7±9.7) and smaller
(147.9±11.5) (p<0.05.). No se encontró diferencia
in the T1 (134,6±1.2). Regarding the control
entre el porcentaje de oocitos de excelente y buena
(147.9±11.5) (p <0.05.), no difference was found be-
calidad a las 24 horas del tratamiento T1 respecto al
tween the percentage of excellent and good quality
control (56% y 60%) (p>0.05.), pero la calidad en el
oocytes after 24 hours of treatment T1 in comparison
T3 fue menor (36%). Conclusiones. El medio
to the control (56 % and 60 %) (p> 0.05.), but the
hiperosmótico presenta un mayor detrimento sobre quality in the T3 was lower (36 %). Conclusions. It
los oocitos que el medio hiposmótico, posiblemente was demonstrated that the hyperosmotic media had
porque los oocitos presenten mas mecanismos para a bigger detrimental effect on the oocytes than the
evitar la entrada de agua del medio extracelular, que hyposmotic media. It is possible that the oocytes show
para evitar la salida de solutos y agua intracelular. more mechanisms to avoid the water flow into the
Se evidencia la necesidad de adoptar medidas rigu- cytoplasm than to avoid the exit of solutes and water
rosas en el control de calidad de osmolaridad de los flow towards the outside. The necessity to adopt rig-
medios de cultivo empleados en los procesos de orous measurements in the quality control of osmo-
maduración in vitro de oocitos. larity for the culture mediums used in the processes
of in vitro maturation for oocytes, is evident.
Palabras clave: Membrana celular, solutos,
hipertónico, hipotónico, calidad y diámetro de oocitos, Key words: Cell membrane, solutes, hypertonic,
oocitos bovinos hypotonic.
____________________________
* Artículo derivado de la investigación del mismo nombre, realizada entre marzo y junio de 2008 y financiada por el laboratorio Singamia,
Universidad de Antioquia.
** Médico Veterinario Zootecnista, Especialista en Reproducción Bovina Tropical y Transferencia de Embriones, MSc(c) Ciencias Animales.Antioquia, Facultad de Ciencias Agrarias, Grupo Reproducción, Fisiología y Biotecnología Animal. Correo electrónico
[e-mail]
*** Estadístico, Especialista en biomatemáticas y estadística, Grupo GRICA, Facultad de Ciencias Agrarias Universidad de Antioquia.
**** Médico Veterinario, Dr. Sci. Agr. Universidad de Antioquia, Facultad de Ciencias Agrarias, Grupo Reproducción, Fisiología y Biotecnología
Animal.
***** Zootecnista, MSc en Ciencias Básicas Biomédicas. DPA/FCA/BIOGEM Universidad Nacional de Colombia, Sede Medellín.
58 REVISTA LASALLISTA DE INVESTIGACIÓN - Vol. 6 No. 1Efeito da osmolaridad, sobre o diâmetro e a ras foi maior no T3 (148,7±9.7) e menor no T1
qualidade de oocitos bovinos madurados in (134,6±1.2) com respeito ao controle (147.9±11.5)
vitro. (p<0.05.) não se encontrou diferença entre a per-
centagem de oocitos de excelente e boa qualidade
às 24 horas do tratamento T1 com respeito ao con-
Resumo trole (56% e 60%) (p>0.05.), mas a qualidade no T3
Os oocitos são susceptíveis a mudanças osmolares, foi menor (36%). Conclusões. Demonstra-se que o
apresentando fenômenos que afetam a membrana meio hiperosmótico apresenta maior efeito
plasmática. Objetivo. Avaliar o efeito da soluço e a detrimental sobre os oocitos do que o meio
hiperosmolaridad do meio de cultivo sobre o diâme- hiposmótico, possivelmente os oocitos apresentem
tro e a qualidade de oocitos madurados in vitro. Ma- mas mecanismos para evitar a entrada de água do
teriais e métodos. Utilizaram-se 75 oocitos de ex-
meio extracelular que para evitar a saída de solutos
celente e boa qualidade, como médio controle se
e água intracelular. Se evidência a necessidade de
utilizou o M 199 suplementado com SFB 10%, FSH
adotar medidas rigorosas no controle de qualidade(30 µg ) e LH (30 µg), piruvato, cuja osmolaridad é
de osmolaridad dos meios de cultivo empregados290 mOsm/l (T2). Os oocitos foram submetidos a
nos processos de maturação in vitro de oocitos.duas concentrações osmolares: meio hiperosmótico
497mOsm/L (T1), e meio hiposmótico 150mOsm/L
Palavras chaves. Membrana celular, solutos,(T3), mediu-se o diâmetro e qualidade às 0 e 24 ho-
hipertónico, hipotónico.ras. Resultados. O diâmetro dos oocitos às 24 ho-
en su ambiente, depende de la actividad de laIntroducción
membrana, la cual es capaz de intercambiar
solutos, según las necesidades, para equilibrarDesde sus inicios en los años 70 hasta la actua-
4concentraciones en sus respectivos espacios .lidad, los medios de cultivo empleados en la pro-
ducción de embriones in vitro han presentado
Las partículas cargadas (iones) no atraviesanpocas variaciones. El M-199 ha sido el medio
la bicapa fosfolipídica debido al carácter hidró-más utilizado en los protocolos de maduración
fobo en su parte interna. Algunas moléculas po-de oocitos y en muchos laboratorios es rutinario
lares, como el agua y la urea, son suficiente-preparar in situ estos medios, lo que puede au-
mente pequeñas para atravesarla. Las molécu-mentar el riesgo de variabilidad en la repetición
las de tamaño reducido, grandes o de tamañode los ensayos experimentales realizados en
1 moderado que son liposolubles, pasan fácilmen-esta área . El parámetro convencionalmente
te a través de la membrana. Moléculas comoevaluado en los medios preparados es el pH,
azúcares, (monosacáridos), amino-ácidos,omitiendo la medición de la osmolaridad, la cual
2 nucleósidos y otros polímetros como las proteí-afecta directamente la calidad de los procesos .
nas, polisacáridos, y ácidos nucleicos, tampocoLa célula es un sistema semi-abierto, delimita-
son capaces de atravesar la membrana. Estado por una membrana plasmática de carácter
dinámica entre soluto y solvente celular generasemipermeable, que regula el paso de agua y
3respuestas filológicas compensatorias .de moléculas químicamente definidas, los pro-
cesos fisiológicos y las interacciones de la célu-
la con su entorno suceden en un medio acuoso. La relación entre el número de osmoles (solutos
en dilución) y el solvente se conoce comoLa membrana plasmática es una bicapa lipídica
que mantiene las diferencias del espacio osmolaridad; ésta juega un papel fundamental
citosólico y el ambiente extracelular; el flujo de en el mantenimiento de la homeostasis regulan-
sustancias se da en mayor grado por canales y do el paso a través de la membrana entre el
5transportadores, que presentan especificidad y medio intra y extracelular .
3son regulados por múltiples vías .
La alteración de la osmolaridad es un factor de
Las células eucariontes poseen diversos proce- estrés celular que afecta el balance iónico e
sos de difusión simple para controlar cambios hídrico. El modelo de lisis y crenación en el
en la osmolaridad; en particular, la habilidad de eritrón muestra que la célula responde de dife-
la cél