Papel de las células inmunocompetentes de bazo y timo en la patogenia de la diarrea vírica bovina

Ana Isabel Raya Bermúdez

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Extrait

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE VETERINARIA











PAPEL DE LAS CÉLULAS
INMUNOCOMPETENTES DE BAZO Y TIMO
EN LA PATOGENIA DE LA DIARREA
VÍRICA BOVINA




Trabajo presentado por la Licenciada Ana Isabel Raya
Bermúdez para optar al Grado de Doctor en Veterinaria


Departamento de Anatomía y Anatomía Patológica
Comparadas

Córdoba, Octubre de 2008TITULO: PAPEL DE LAS CÉLULAS INMUNOCOMPETENTES DE BAZO Y
TIMO EN LA PATOGENIA DE LA DIARREA VÍRICA BOVINA
AUTOR: ANA ISABEL RAYA BERMUDEZ
© Edita: Servicio de Publicaciones de la Universidad de Córdoba. 2008
Campus de Rabanales
Ctra. Nacional IV, Km. 396
14071 Córdoba
www.uco.es/publicaciones
[e-mail]
ISBN-13: 978-84-7801-938-0
D.L.: CO-185-2009Ana Isabel Raya Bermúdez



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1 Papel de las células inmunocompetentes de bazo y timo en la patogenia de la DVB Ana Isabel Raya Bermúdez





ÍNDICE

- ABREVIATURAS,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, . 6
- INTRODUCCIÓN,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, . 8
- REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA,,,,,,,,,,,,,,,,,, . 10
1. CLASIFICACIÓN Y BIOLOGÍA MOLECULAR,,,,,,, 11
1.1. Proteínas víricas,,,,,,,,,,,,,,,, 12
1.2. Genotipos,,,,,,,,,,,,,,,,,,, 13
1.3. Biotipos,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, . 14
2. EPIDEMIOLOGÍA,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ... 16
3. MANIFESTACIONES CLÍNICAS DE LA DVB............................ 17
3.1. Infección aguda............................................................... 17
a) Cepas de baja virulencia......................................... 19
b) Cepas de alta virulencia......................................... 20
3.2. Infección uterina/transplacentaria................................... 21
3.3. Infecciones persistentes................................................ 22
Patogenia de la EM.................................................... 25
4. CITOQUINAS EN LA DVB........................................................... 26
4.1. TNFα...................................................................................... 27
4.2. IL-1................................................................................ 30
4.3. Citoquinas en el timo..................................................... 31
5. RESPUESTA INMUNOLÓGICA FRENTE AL VDVB.................. 32
5.1. Respuesta inmunológica innata..................................... 32
5.2. Respuesta inmunológica humoral.................................. 33
5.3. Respuesta inmunológica celular.................................... 35
2 Papel de las células inmunocompetentes de bazo y timo en la patogenia de la DVB Ana Isabel Raya Bermúdez
Respuesta Th1/Th2 .................................................... 35
5.4. Inmunosupresión en infección por DVB......................... 37
6. HISTOLOGÍA DEL TIMO............................................................. 39
6.1. Estructura....................................................................... 39
Estroma....................................................................... 39
Parénquima................................................................ 40
a) Corteza........................................................ 40
b) Médula......................................................... 42
Estructuras vasculares................................................ 43
6.2. Desarrollo de los linfocitos T en el timo.......................... 44
a) Maduración de los linfocitos T................................ 45
b) Selección de los linfocitos T................................... 46
7. HISTOLOGÍA DEL BAZO............................................................ 47
7.1. Estroma.......................................................................... 47
7.2. Parénquima.................................................................... 48
Pulpa esplénica blanca............................................... 48
Pulpa esplénica roja.................................................... 49
Zona marginal............................................................. 50
7.3. Circulación linfática......................................................... 50
- OBJETIVOS.............................................................................................. 51
- MATERIAL Y MÉTODOS......................................................................... 53
1. MATERIAL DE ESTUDIO........................................................... 53
1.1. Animales y virus.............................................................. 53
1.2. Muestras de sangre y suero............................................54
1.3. Necropsia y recogida de las muestras............................ 54
Fijación........................................................................ 55
Inclusión...................................................................... 55
2. MÉTODOS DE ESTUDIO............................................................. 55
2.1. Estudio hematológico...................................................... 55
2.2. Detección antigénica del vDVB...................................... 56
2.3. Detección de anticuerpos frente al vDVB...................... 56
2.4. Estudio estructural.......................................................... 56
2.5. Estudio inmunohistoquímico........................................... 57
Muestras fijadas en formol, solución de bouin y
3 Papel de las células inmunocompetentes de bazo y timo en la patogenia de la DVB Ana Isabel Raya Bermúdez
solución de zinc............................................................................ 57
Técnica del complejo ABC................................................... 57
Pretratamientos de desenmascaramiento antigénico
permeabilización de tejidos........................................................... 58
a) Digestión enzimática............................................. 58
b) Tampón citrato y microondas................................ 58
c) Tween 20............................................................... 58
Reactividad de los diferentes anticuerpos utilizados............. 59
Controles............................................................................... 60
2.7. Estudio de la apoptosis mediante la técnica de TUNEL........... 61
Técnica de TUNEL............................................................... 61
2.8. Recuentos celulares................................................................. 62
2.9. Análisis estadístico................................................................... 62
- RESULTADOS.................................................................................................... 63
1. HALLAZGOS CLÍNICOS......................................................................... 63
2. RECUENTO DE LEUCOCITOS Y FÓRMULA LEUCOCITARIA.............64
3. DETERMINACIÓN DEL VIRUS EN SANGRE........................................ 65
4. DETECCIÓN DE ANTICUERPOS FRENTE AL VIRUS EN SUERO...... 65
5. LESIONES MACROSCÓPICAS............................................................. 65
6. RESULTADOS EN EL TIMO.................................................................. 66
6.1. Estudio histopatológico............................................................. 66
6.2. Estudio inmunocitoquímico....................................................... 69
Detección de la infección vírica............................................ 69
Estudio de los fenómenos de apoptosis................................ 71
Estudio de la población de linfocitos T................................... 73
a) Linfocitos T CD3...................................................... 73
b) Linfocitos T CD4 y CD8........................................... 75
c) Linfocitos T γ/δ....................................................... 77
Estudio de la población de m-MØ.......................................... 78
a) Cambios cuantitativos de los m-MØ........................ 78
b) Producción de citoquinas........................................ 81
Estudio de la población de células retículo-epiteliales........... 85
a) Citoqueratinas......................................................... 85
b) HLA II...................................................................... 88
4 Papel de las células inmunocompetentes de bazo y timo en la patogenia de la DVB Ana Isabel Raya Bermúdez
Estudio de los fenómenos de proliferación celular................ 89
6.3. Estudio ultraestructural............................................................ 91
7. RESULTADOS E