Caracterización genética de la oveja Palmera con microsatélites (Genetic characterisation of the palmera sheep with microsatellites)

Martínez A.M.

Description

Resumen
Se estudian 178 animales pertenecientes a la raza ovina Palmera, lo que supone la totalidad de la población, mediante 24 marcadores microsatélites con objeto de caracterizar esta raza autóctona de la Isla de la Palma (Islas Canarias, España). Se han empleado microsatélites de ovino y de bovino recomendados por la FAO, por la ISAG (International Society of Animal Genetics) y por otros autores en la bibliografía para este tipo de estudios en ovinos. Los microsatélites se han amplificado mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y los fragmentos amplificados se han separado mediante electroforesis en un secuenciador automático ABI 377XL. Todos los microsatélites utilizados han resultado polimórficos y se han encontrado entre 2 alelos para el ETH10 y 15 para el CSSM66, con un número medio de alelos de 7,04. La heterocigosidad media esperada ha sido 0,6039 y la observada 0,5504. Se ha llevado a cabo también la comprobación de paternidades y maternidades con estos microsatélites, lo que ha servido para establecer una batería de 10-12 microsatélites con una probabilidad de exclusión a priori superior al 99,9 p.100 que puede resultar muy útil para realizar controles de filiación en esta raza ovina en serio peligro de extinción.
Abstract
It have been studied 178 animals (the whole population) of the Palmera sheep with 24 microsatellites in order to characterise this autochthonous breed from La Palma Island (Canary Islands, Spain). Ovine and bovine microsatellites recommended by FAO, ISAG (International Society of Animal Genetics) and other authors in the bibliography for ovine biodiversity studies have been used. These markers were amplified by mean of the polymerase chain reaction (PCR) technique and to get the size separation of the obtained fragments we have developed electrophoresis in polyacrylamide gel in an automatic sequencer ABI377XL. All the microsatellites have been polymorphic and between 2 (ETH10) and 15 (CSSM66) alleles have been found with an average value of 7.04. The expected heterozigosity has been 0,6039 and the observed heterozigosity 0.5504. The paternity and maternity have been checked with these microsatellites and this has been used to make a paternity panel with 10-12 markers and an a priori exclusion probability higher than 99,9 percent. This panel is useful to check paternity in this threatened breed.

Sujets

• Conservación
• Îles Canaries
• Molecular marker
• Conservation
• Canary Islands

Informations

• Publié par: erevistas
• Publié le: 01 janvier 2005
• Nombre de lectures: 20
• Langue: Español

Extrait

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE LA OVEJA PALMERA CON
MICROSATÉLITES
GENETIC CHARACTERISATION OF THE PALMERA SHEEP WITH MICROSATELLITES
1 4 2 3 2 1Martínez, A.M. , J.L. Vega-Pla , M.J. Bravo , C. Barba , J. Caraballo y J.V. Delgado
1Departamento de Genética. Universidad de Córdoba. Edificio Gregor Mendel. Campus de Rabanales.
14071 Córdoba. España. E-mail: [e-mail]
2Asociación de Criadores de la Oveja Palmera. La Palma. España.
3Federación Española de Asociaciones de Ganado Selecto (FEAGAS). Madrid. España.
4Laboratorio de Genética Molecular. Servicio de Cría Caballar. Carretera Madrid-Cádiz km 397. 14071
Córdoba. España. E-mail: [e-mail]
PALABRAS CLAVE ADICIONALES ADDITIONAL KEYWORDS
Marcadores moleculares. Conservación. Islas Molecular markers. Conservation. Canary Islands.
Canarias.
RESUMEN
Se estudian 178 animales pertenecientes a la des con estos microsatélites, lo que ha servido
raza ovina Palmera, lo que supone la totalidad de para establecer una batería de 10-12 micro-
la población, mediante 24 marcadores micro- satélites con una probabilidad de exclusión a
satélites con objeto de caracterizar esta raza priori superior al 99,9 p.100 que puede resultar
autóctona de la Isla de la Palma (Islas Canarias, muy útil para realizar controles de filiación en
España). Se han empleado microsatélites de esta raza ovina en serio peligro de extinción.
ovino y de bovino recomendados por la FAO, por
la ISAG (International Society of Animal Genetics)
y por otros autores en la bibliografía para este SUMMARY
tipo de estudios en ovinos. Los microsatélites se
han amplificado mediante la reacción en cadena It have been studied 178 animals (the whole
de la polimerasa (PCR) y los fragmentos amplifi- population) of the Palmera sheep with 24
cados se han separado mediante electroforesis microsatellites in order to characterise this
en un secuenciador automático ABI 377XL. To- autochthonous breed from La Palma Island
dos los microsatélites utilizados han resultado (Canary Islands, Spain). Ovine and bovine
polimórficos y se han encontrado entre 2 alelos microsatellites recommended by FAO, ISAG
para el ETH10 y 15 para el CSSM66, con un (International Society of Animal Genetics) and
número medio de alelos de 7,04. La hetero- other authors in the bibliography for ovine
cigosidad media esperada ha sido 0,6039 y la biodiversity studies have been used. These
observada 0,5504. Se ha llevado a cabo también markers were amplified by mean of the polymerase
la comprobación de paternidades y maternida- chain reaction (PCR) technique and to get the size
Arch. Zootec. 54: 363-367. 2005.
CaracterizacionOvejaMartinez.p65 363 20/12/2005, 9:29MARTÍNEZ, VEGA-PLA, BRAVO, BARBA, CARABALLO Y DELGADO
separation of the obtained fragments we have pasos dados para intentar recuperar y
developed electrophoresis in polyacrylamide gel conservar la raza. También se ha rea-
in an automatic sequencer ABI377XL. All the lizado la comprobación de paternida-
microsatellites have been polymorphic and des y maternidades con estos micro-
between 2 (ETH10) and 15 (CSSM66) alleles satélites, lo que ha servido para esta-
have been found with an average value of 7.04. blecer una batería de 10-12 micro-
The expected heterozigosity has been 0,6039 satélites con una probabilidad de ex-
and the observed heterozigosity 0.5504. The clusión a priori superior al 99,9 p.100
paternity and maternity have been checked with que puede resultar muy útil para la
these microsatellites and this has been used to gestión de esta raza ovina en serio
make a paternity panel with 10-12 markers and peligro de extinción.
an a priori exclusion probability higher than 99,9
percent. This panel is useful to check paternity in
this threatened breed. MATERIAL Y MÉTODOS
Se han analizado 178 animales (lo
INTRODUCCIÓN que constituye la totalidad de la pobla-
ción en la actualidad) de la raza ovina
La oveja Palmera es originaria de la Palmera pertenecientes, a varios ga-
isla de La Palma del archipiélago Ca- naderos de la Asociación de Ganade-
nario (España), y ha sido muy impor- ros de Oveja Palmera y al Excmo.
tante para la economía doméstica has- Cabildo Insular de La Palma.
ta finales de los años 60 del siglo XX Se ha extraído sangre de todos los
por la producción de lana, siendo tam- animales en tubos con EDTA K como
3bién muy apreciada por la calidad de su anticoagulante y utilizando el sistema
carne. A partir de entonces ha dismi- Vacutainer® para realizar las extrac-
nuido considerablemente su presencia, ciones. El ADN de las muestras se ha
debido a la llegada de fibras sintéticas extraído mediante el Kit BLOOD-
y a la importación de otras razas ovinas CLEAN de purificación de ADN
más productivas de leche procedentes (BIOTOOLS - Biotechnological &
de otras islas. Actualmente, junto con Medical Laboratories, S.A. Madrid,
el cerdo Negro Canario, es la raza de España) siguiendo las indicaciones del
animales domésticos más amenazada fabricante para este kit.
de las Islas Canarias: se halla en situa- Se han estudiado los 24 microsa-
ción crítica, estando en grave peligro télites siguientes: BM8125, BM1818,
de extinción pues, según Álvarez et al. BM1824, CSSM66, ILSTS011, INRA63,
(2000), en 1996 quedaban unos 150 SPS115, BM6506, ETH225, ETH10,
ejemplares de esta raza. INRA35, TGLA122, TGLA126, TGLA53,
Estos mismos autores presentan los BM6526, RM006, CSRD247, MAF65,
resultados de la caracterización MAF209, OarFCB11, OarFCB48,
morfológica de la raza, y en el presente OarFCB304, OarCP20 y OarCP34.
trabajo se muestran los resultados de Los microsatélites se amplifican me-
la caracterización genética con mar- diante la técnica de la reacción en
cadores microsatélites del ADN, como cadena de la polimerasa (PCR) según
Archivos de zootecnia vol. 54, núm. 206-207, p. 364.
CaracterizacionOvejaMartinez.p65 364 20/12/2005, 9:29CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE LA OVEJA PALMERA CON MICROSATÉLITES
la metodología de Martínez et al. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
(2000). Se diseñan varias reacciones
múltiplex con el objeto de reducir el Todos los microsatélites emplea-
número de reacciones y los costes de dos, excepto uno, han resultado
los experimentos. Para realizar la se- polimórficos, encontrándose entre 4
paración por tamaños de los fragmen- alelos para tres de ellos y 15 para el
tos obtenidos mediante la PCR se so- CSSM66 (tabla I), con un número
meten éstos a una electroforesis en gel medio de alelos de 7,04. Aunque el
de poliacrilamida en un secuenciador ETH10 muestra dos alelos, lo cierto es
automático ABI 377XL (Applied que este marcador debe considerarse
Biosystems, Foster City, CA, USA). monomórfico puesto que uno de ellos
El análisis de los fragmentos y la se presenta con una frecuencia supe-
tipificación alélica se realiza mediante rior al 95 p.100.
los programas informáticos Genescan En la tabla I se reflejan los valores
Analisys 3.1.2 y Genotyper 2.5 res- de PIC que indican qué marcadores
pectivamente. son más informativos en esta raza (va-
Con objeto de conocer el perfil ge- lores superiores a 0,5) cuales son me-
nético de la raza se han calculado las dianamente informativos (valores en-
frecuencias alélicas y las heteroci- tre 0,25 y 0,5) y cuales son poco infor-
gosidades mediante el programa mativos (valores inferiores a 0,25).
informático Genetix versión 4.01 Exceptuando el ETH10, el resto de los
marcadores son informativos y por tan-(Belkhir, 1999). Se ha realizado una
to son útiles para valorar la variabilidadprueba de equilibrio según Guo y
genética de la oveja Palmera.Thompson (1992) con el algoritmo en
La heterocigosidad media observa-cadena de Monte Carlo Markov me-
da alcanza un valor de 0,5504 y ladiante el programa informático
esperada, calculada a partir de lasGENEPOP versión 3.1c (Raymond &
frecuencias alélicas, de 0,6039. EstosRousset, 1995). Para el cálculo del
valores son inferiores a los encontra-contenido de información polimórfica
dos por Arranz et al. (2001) en otras(PIC) ha sido empleada la fórmula que
razas ovinas españolas y por Diez-propusieron Botstein et al. (1980).
El control de filiación se ha realiza- Tascón et al. (2000) en el Merino
do comparando los genotipos del hijo español y 5 razas derivadas del mismo,
con los genotipos de sus progenitores. sin embargo indican una diversidad
Para evaluar la utilidad de estos genética aceptable en la oveja Palme-
microsatélites para realizar controles ra a pesar de tratarse de una raza en
de filiación en esta raza, se ha calcula- proceso de recuperación.
do la probabilidad de exclusión a priori La prueba de equilibrio Hardy-
(PE) de cada uno de ellos mediante la Weinberg para la totalidad de la pobla-
fórmula de Jamieson (1994), y la pro- ción dio como resultado un