DIFERENTES FUENTES DE LÍQUIDO FOLICULAR EN EL DESARROLLO IN VITRO DE EMBRIONES BOVINOS (DIFFERENT SOURCES OF FOLLICULAR FLUID ON IN VITRO DEVELOPMENT OF BOVINE EMBRYOS)

Larocca C.

Description

Resumen
En conclusión, nuestros resultados indican un efecto favorable del LFb adicionado inmediatamente a la inseminación in vitro, independientemente de si el mismo se obtuvo de folículos entre 5 a 7 mm o de más de 15 mm de diámetro (pre-ovulatorios).

Sujets

• Oocito
• Bovino
• Follicular fluid

Informations

• Publié par: erevistas
• Publié le: 01 janvier 2004
• Nombre de lectures: 16
• Langue: Español

Extrait

NOTA BREVE
DIFERENTES FUENTES DE LÍQUIDO FOLICULAR EN EL
DESARROLLO IN VITRO DE EMBRIONES BOVINOS
DIFFERENT SOURCES OF FOLLICULAR FLUID ON IN VITRO DEVELOPMENT OF
BOVINE EMBRYOS
1 2 1 1 1Larocca, C.* , J. Calvo , I. Lago , G. Roses y M. Viqueira
1* Area Biotecnología de la Reproducción. Facultad de Veterinaria. Las Places 1550. CP.11600. Montevi-
deo. Uruguay. E-mail: [e-mail].
2Departamento de Morfología y Desarrollo. Facultad de Veterinaria. Las Places 1550. CP. 11600.
Montevideo. Uruguay. E-mail: [e-mail]
PALABRAS CLAVE ADICIONALES ADDITIONAL KEYWORDS
Ovocito. Bovino. Licor folicular. Oocyte Bovine. Follicular fluid.
INTRODUCCIÓN
Diversos autores han estudiado el metros de diámetro (pre-ovulatorios),
efecto del suero de vaca en celo (SVC) adicionado inmediatamente y a las 48
y líquido folicular bovino (LFb) en el h de la inseminación in vitro sobre el
medio de maduración in vitro, y en el desarrollo embrionario.
medio de desarrollo (Larocca et al.,
1993; 1997).
MATERIAL Y MÉTODOSSe ha estudiado el efecto de adicio-
nar LFb a diferentes concentraciones y
Se seleccionaron 1888 CCO A y Bde diferentes fuentes al medio de ma-
(First y Parrish, 1987), fueron lavadosduración in vitro, encontrando efectos
3 veces en m-PBS con 5 p.100 de sueropositivos (Romero y Sidel, 1994; Sirard
de ternero (ST).et al., 1995). La adición de LFb duran-
Los CCO fueron madurados 22 ho-te la maduración in vitro (MIV) apunta
ras en medio de cultivo TCM-199principalmente a su efecto sobre los
(Gibco Lab, Burlington, Ontario,complejos cumulus-ovocito primarios
Canada), suplementado con 5 p.100(CCO), (Gordon, 1994). El LFb con-
ST, penicilina/estreptomicina (Sigma,tiene esteroides, glucosaminoglicanos
St. Louis, MO, EE.UU.) más 10 p.100y muchos otros metabolitos sintetiza-
de LFb obtenido de folículos de 5-7dos por las células de la teca folicular
(Larocca et al., 1995a). milímetros de diámetro y de los pre-
El objetivo del presente trabajo fue ovulatorios >15 mm. (Holy, 1969).
estudiar el efecto del LFb obtenido de Se incubaron a 38,5°C, 99 p.100 de
folículos de 5-7 y de más de 15 milí- humedad relativa y 5 p.100 CO en aire.
2
Arch. Zootec. 53: 329-332. 2004.LAROCCA, CALVO, LAGO, ROSES Y VIQUEIRA
El licor folicular bovino fue a las 48 horas de la FIV y el desarrollo
centrifugado a 800 G durante 30 minu- a morula compacta( MC) y blastocisto
tos y el sobrenadante inactivado du- (BL) al día 8.
rante 30 minutos a 56°C. Los resultados se analizaron por el
El semen de dos pajuelas congela- método de Chi-cuadrado complemen-
das-descongeladas fue capacitado por tado con la corrección de Yates.
centrifugación a 500 G durante 5 mi-
nutos, en medio Brackett y Oliphant
RESULTADOS(BO, Brackett y Oliphant, 1975), sin
glucosa, complementado con 4UI/ml
A las 48 horas de la FIV, en elheparina (Sigma), y 10 mM de cafeína
experimento 1, de 1371 CCO dividie-benzoato de sodio (Sigma). La con-
ron 741. En el G1, 66 embriones desa-centración final del BO se ajustó a
rrollaron a 29 MC, 27 a BL y 10 a2UI/ml de heparina, 5 mM de cafeína
blastocistos expandidos (BEx). Para elbenzoato de sodio y 10 mg/ml de albú-
G2, 105 embriones desarrollaron a 53mina sérica bovina fracción V (BSA,
MC, 32 BL, y 20 BEx, y para el G3, 95Sigma) la concentración del semen fue
embriones desarrollaron a 16 MC, 46de 1x106 espermatozoides/ml. Los
BL y 33 BEx. Los resultados se mues-CCO (1888) y el semen se co-incuba-
tran en la tabla I.ron en gotas de 100 µl bajo aceite
En el experimento 2 los resultadosmineral durante 18 horas.
mostraron que: 251 de 517 CCO divi-Los ovocitos en los distintos gru-
dieron a las 48 horas (TD 48,5 p.100pos fueron incluidos en gotas de 100 l
de medio de cultivo bajo aceite mine- G1- 90/180, 50 p.100; G2 -87/167,
ral. El medio de desarrollo fue renova- 52,1 p.100 G3- 74/170 43,5 p.100 de
do cada 48 horas. los divididos desarrollaron en el G1:
Se realizaron dos experimentos: En 13 MC(14,4 p.100), 10 BL(11,1 p.100)
el experimento 1, inmediatamente des- y 3 BEx.(3,3 p.100) total 26/ 90 29,8
pués de la FIV, 1371 cigotos fueron p.100; G2 -14 MC(16,0 p.100), 11
divididos en 3 grupos. El grupo 1, BL(12,6 p.100) y 7 BEx,(8,0 p.100)
control (G1)-MCE sin LFb; grupo 2 total 32/ 87, 36,8 p.100 y en el G3 -2
(G2)- MCE más 20 p.100 de LFb de MC, 14 BL y 7 BEx, total 23/74 31,0
folículos pre-ovulatorios y grupo 3 p.100. No se encontraron diferencias
(G3)-MCE más 20 p. 100 de LFb de significativas, p<0,05, aunque hubo
folículos de 5-7 mm de diámetro. un mayor desarrollo en el G2 respecto
Experimento 2, después de la FIV, a los otros grupos.
517 cigotos fueron divididos en 3 gru-
pos: control (G1)- MCE. Para los res-
tantes grupos, se adicionó al MCE 48 DISCUSIÓN
horas post FIV 20 p.100 de LFb pre-
ovulatorio en el grupo 2 (G2), y 20 p.100 Los resultados en el experimento 1
de LFb obtenido de los folículos de 5-7 mostraron diferencias significativas
mm de diámetro para el grupo 3 (G3). entre el grupo 2 y el grupo 1 en el
La tasa de división (TD) se evaluó desarrollo embrionario. En el experi-
Archivos de zootecnia vol. 53, núm. 203, p. 330.LÍQUIDO FOLICULAR EN EL DESARROLLO IN VITRO DE EMBRIONES BOVINOS
Para confirmar o descartar esta ten-Tabla I. Efecto de la adición de líquido
dencia sería necesario aumentar elfolicular bovino (LFb) inmediatamente a la
número de ovocitos por grupo y defertilización in vitro. (Effect of the addition of
esta forma poder concluir si el LFb de
bovine follicular fluid (bFF) immediately after in
folículos de 5-7 mm de diámetro tiene
vitro fertilization).
un efecto positivo o negativo sobre el
desarrollo embrionario. Los resulta-Grupo n TD DE/TD DE/n
dos de Sirard et al. (1995), estarían(p.100) (p.100) (p.100)
indicando que existe un componente
negativo para el desarrollo embriona-1 428 220/428ª 66/220ª 66/428ª
(51,4) (30,0) (15,4) rio en el LFb obtenido de folículos de
5 a 10 mm de diámetro. Los resultados
a a b2 480 259/480 105/259 105/480 del presente trabajo no coinciden con
(54,0) (40,5) (21,9) los de Sirard et al., ya que la adición de
LFb de folículos de 5- 7 mm diámetro,
a ab3 463 262/463 95/262ª 95/463 si bien no mejora significativamente el
(56,6) (36,3) (20,5)
desarrollo, tiende a ello.
Choi et al. (1998), emplearon elTotal 1371 741/1371 266/741 266/1371
LFb como aditivo en el medio de desa-(54,0) (35,9) (19,4)
rrollo, sin obtener un efecto beneficio-
so sobre la tasa de desarrollo. EsteValores en la misma columna con diferentes
superíndices difieren significativamente (p<0,05). autor concluye la necesidad de una
Nota (n: número; TD: Tasa de división; DE: Desa- mayor investigación, utilizando LFb
rrollo embrionario). derivado de folículos pre-ovulatorios.
En nuestros resultados el LFb tuvo un
efecto significativo sobre la tasa de
mento 2 no se halló diferencia signifi- desarrollo hasta blastocisto expandido
cativa entre los grupos. En ambos ex- cuando fue adicionado inmediatamen-
perimentos, no se halló diferencia sig- te a la FIV en el experimento 1.
nificativa en la TD. En el trabajo de Choi et al. (1998),
Sirard et al. (1995), utilizando LFb el medio de desarrollo empleado fue
provenientes de folículos de 5-10 mi- TCM 199 en co-cultivo con células de
límetros de diámetro encontraron un oviducto bovino. En nuestro trabajo,
menor desarrollo embrionario al utili- el medio empleado fue CR1aa sin co-
zar LFb que al utilizar LFb de folículos cultivo. Existe la posibilidad de que las
dominantes. células oviductales hayan enmascarado
El grupo 3 de este trabajo contiene los resultados benéficos del LFb en el
LFb de folículos de 5 a 7 mm de diáme- desarrollo. A partir de los resultados, y
tro. Este grupo no tuvo diferencia sig- dada la escasa bibliografía existente so-
nificativa con el grupo control en el bre este tema, sería interesante realizar
experimento 1, si bien mostró una ten- nuevas investigaciones comparando el
dencia a comportarse como el grupo 2, uso de diferentes medios de desarrollo
o sea a tener un mayor desarrollo em- sin y con diferentes co-cultivos.
brionario. De acuerdo a los resultados obteni-
Archivos de zootecnia vol. 53, núm. 203, p. 331.LAROCCA, CALVO, LAGO, ROSES Y VIQUEIRA
dos en este trabajo podrian existir uno adicionado inmediatamente a la inse-
o más factores promotores del desa- minación in vitro, independientemen-
rrollo embrionario, positivos en el LFb. te de si el mismo se obtuvo de folículos
En conclusión, nuestros resultados entre 5 a 7 mm o de más de 15 mm de
indican un efecto favorable del LFb diámetro (pre-ovulatorios).
BIBLIOGRAFÍA
Brackett, B.G. and G. Oliphant. 1975. Capacitation Larocca, C., S. Kmaid and J. Calvo.1993 . Effect
of rabbit spermatozoa in vitro. Biology of of follicular fluid and oestrus cow serum on
Reproduction, 12: 260-274. maturation, fertilization and development of
Choi, Y.H., M.