Thèse présentée pour obtenir le grade de

Sandra Eliautou

Description

Niveau: Supérieur, Doctorat, Bac+8

• redaction

1 Thèse présentée pour obtenir le grade de Docteur de l'Université de Strasbourg Aspects Moléculaires et Cellulaires de la Biologie Option Biologie Moléculaire et cellulaire Par Sandra ELIAUTOU Signalisation déclenchée par le complexe GPIb-V-IX et émission de filopodes dans la plaquette sanguine Directeur de Thèse Dr. François LANZA Présentée et soutenue publiquement le 30 octobre 2009 Membres du jury: Directeur de Thèse Dr. François LANZA, Strasbourg. Rapporteur externe Dr. Cécile DENIS, Paris. Rapporteur externe Dr. Christophe LAMAZE, Paris. Rapporteur interne Dr. Jean-Etienne FABRE, Strasbourg. Ecole Doctorale Vie et Santé

• professeur jean-pierre


• jean-yves


• équipe de microscopie électronique


• émission de filopodes dans la plaquette sanguine


• pôle nord du bureau des étudiants ?


• vrai ?

Sujets

• Redaction
• Cazenave
• Lamaze technique
• Université de Strasbourg
• Institut national de la santé et de la recherche médicale
• Gachet
• Jean-Yves

Informations

• Publié par: profil-feym-2012
• Publié le: 01 octobre 2009
• Nombre de lectures: 155
• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 37 Mo

Extrait

Ecole Doctorale
Vie et Santé



Thèse présentée pour obtenir le grade de
Docteur de l’Université de Strasbourg


Aspects Moléculaires et Cellulaires de la Biologie
Option Biologie Moléculaire et cellulaire

Par

Sandra ELIAUTOU

Signalisation déclenchée par le complexe GPIb-V-IX
et émission de filopodes dans la plaquette sanguine


Directeur de Thèse
Dr. François LANZA

Présentée et soutenue publiquement le 30 octobre 2009

Membres du jury:

Directeur de Thèse Dr. François LANZA, Strasbourg.
Rapporteur externe Dr. Cécile DENIS, Paris.
Rapporteur externe Dr. Christophe LAMAZE, Paris.
Rapporteur interne Dr. Jean-Etienne FABRE, Strasbourg.

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Unité de Recherche
INSERM UMR_S949
« Biologie et pharmacologie des plaquettes sanguines : hémostase, thrombose, transfusion »
Directeur : Dr. Christian Gachet

Etablissement Français du Sang (EFS)-Alsace
Directeur : Pr. Jean-Pierre Cazenave
10 rue Spielmann, B.P.36, 67065 Strasbourg Cedex
Tél : [phone]
Fax : [phone]
Email : [e-mail]














Direction de thèse :
Dr. François Lanza
Email : [e-mail]
2
Remerciements

Que le Docteur Cécile Denis, Jean-Etienne Fabre et Christophe Lamaze reçoivent l’expression
de toute ma reconnaissance pour avoir accepté d’être les rapporteurs de cette thèse. Je vous remercie.
Je tiens à remercier le Professeur Jean-Pierre Cazenave de m’avoir accueillie au sein de
l’Etablissement Français du Sang-Alsace et de m’avoir donnée les moyens de réaliser ce travail.
Mes remerciements vont également au Docteur Christian Gachet, Directeur de l’Unité 949 de
l’INSERM. Il a porté un regard pertinent et constructif sur mon travail.
Un grand merci au Docteur François Lanza de m’avoir accueillie dans son équipe et encadrée,
pour ses nombreux conseils et pour m’avoir aidée et soutenue au cours de ce travail.
Merci à Pierre pour m’avoir fait partager ses connaissances et m’avoir aidée à réaliser ce
travail.
Je remercie particulièrement Marie-Jeanne pour tout le temps consacré à m’aider et à
m’expliquer les joies de la culture cellulaire et de bien d’autres techniques. Merci pour ta patience et
tes conseils. Merci à Murielle pour tes conseils sur à peu près tous les sujets et de m’avoir supportée
dans le pôle nord du bureau des étudiants . Je n’oublierai pas le soutien que vous m’avez apportée
dans les moments difficiles.
Au labo 234 : Merci à Nico, qui se veut Shiva, pour ses compliments en tout genre et sa
bonne humeur (ca c’est vrai ). Je tiens d’ailleurs à solliciter à son égard une prime de risque pour
avoir manipé à mes côtés, et avoir survécu. Sincèrement, merci pour tes précieux conseils et ton aide
dans ce travail. Merci à Sylvie de m’avoir écoutée parler et calculer pendant les manips, je suis sûre
que ca va te manquer… et plus sérieusement merci pour tes conseils. Merci à Catherine pour les
nombreuses doses d’anesthésiant injectées ! ainsi que ton aide au cours de ce travail.
Je tiens également à remercier l’équipe de microscopie électronique ; Jean-Yves, Fabienne et
Anita pour m’avoir accueillie, conseillée et aidée au cours de ce travail. Merci également à toute
l’équipe de l’animalerie pour votre aide et disponibilité.
Mes remerciements s’adressent également à toute l’équipe U949, pour votre aide, votre
disponibilité et vos conseils au cours de ces 3 années.

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Merci à mes amies le beau Benoit, Laurence, Claire et Milou.
Merci également à ma famille et surtout à mes parents pour leur soutien et encouragements au
cours de ces longues études.
Merci à mes deux compagnons de route Mica et Loona qui ont été là pour moi, au quotidien.
Merci à toi Mica pour ta patience et le bonheur que tu m’apportes jour après jour. Ce travail n’aurait
pu voir li jour sans ton soutien.
Et je ne pourrais finir ses remerciements sans parler de mes invités de dernière minute, les
asticots, qui m’ont beaucoup aidé à la rédaction de cette thèse ! 
















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Sommaire















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I) Figures et abréviations ________________________________________ 15
II) Revue bibliographique 23
A) Changements morphologiques plaquettaires : _______________________ 24
1) Forme discoïde des plaquettes au repos : rôle du cytosquelette ______________ 24
1.1 Les microtubules ________________________________ 24
1.2 Rôle du cytosquelette d’actine ____________ 27
1.2.1 Cytosquelette intracellulaire 29
1.2.2 Cytosquelette sous-membranaire ________________________________________ 29
2) Changements morphologiques lors de l’activation plaquettaire ______________ 29
2.1 Réarrangement du cytosquelette d’actine ___ 31
2.2 Filopodes ______________________________________________________________ 35
2.2.1 Activation par les agonistes solubles _____ 35
2.2.2 Activation au contact d’une protéine adhésive 36
2.3 Lamellipodes et étalement _______________________________________________ 37
2.4 Contraction et transition disque-sphère ____ 39
2.4.1 Rôle du complexe acto-myosine ________ 39
2.4.2 Rôle des microtubules _______________ 41
2.5 Rôles dans l’hémostase __________________ 43
B) Signalisation via le complexe GPIb-V-IX plaquettaire _________________ 44
1) Structure du complexe GPIb-V-IX _____________________________________ 44
2) Ligands ____________________________________________________________ 46
2.1 Le Facteur Willebrand __________________ 46
2.2 La thrombine __________________________ 47
2.3 Autres ligands _________________________ 48
3) Partenaires intracellulaires ____________ 49
4) Signalisation en réponse au FW ________ 51
4.1 GPIb-V-IX est plus qu’un récepteur d’adhésion _____________________________ 51
4.2 Signalisation GPIb-V-IX spécifique ________________________________________ 52
4.3 Signalisation en condition d’adhésion ______ 53
4.4 Signalisation en condition d’agrégation ____ 54
4.5 Signalisation GPIb-V-IX et activation de l’intégrine αIIbβ3____________________ 54
C) Mécanismes conduisant à l’émission de filopodes _____________________ 55
1) Dans la plaquette ________________________________ 55
2) Dans d’autres types cellulaires _________ 56
2.1 Mécanismes généraux ___________________ 56
2.2 Protéines impliquées ____________________ 60
2.2.1 Kinases ____________________________ 60
2.2.2 GTPases ___________________________ 61
2.2.3 Ena/VASP _________________________ 63
III) But du travail et approches expérimentales ______________________ 69
IV) Matériel et Méthodes : _______________________________________ 75
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A) Matériel _______________________________________________________ 75
B) Etudes plaquettaires _____________ 77
1) Inhibiteurs _________________________ 77
2) Modèles murins _____________________ 77
3) Prélèvement et lavage des plaquettes ____________________________________ 79
4) Activation en suspension ______________ 80
5) Agrégation ________________________________ 80
6) Cytométrie de flux (FACS) ____________ 80
7) Temps de saignement ________________ 81
8) Thrombose après lésion au FeCl _______ 81 3
9) Immunoprécipitation et immunoempreinte ______________________________ 82
C) Lignées cellulaires ______________ 83
1) Transfection du complexe GPIb-IX dans les cellules HEK __________________ 83
2) shRNA _____________________________________________________________ 83
2.1 Transfection stable des shRNA ___________________________________________ 83
2.2 Lysats cellulaires et immunoempreinte _____ 84
D) Adhésion statique _______________ 84
E) Microscopie _______________