Présenté pour l'obtention du grade de

Patrick Saulnier

Description

Niveau: Supérieur, Doctorat, Bac+8
1 THESE Présenté pour l'obtention du grade de DOCTEUR DE L'UNIVERSITE DE STRASBOURG ECOLE DOCTORALE SCIENCES CHIMIQUES par Pierre SAE HOUER CONCEPTION ET CARACTERISATION BIOLOGIQUE DE SYSTEMES LIPIDIQUES DESTINES A UNE ADMINISTRATION PAR VOIE ORALE Discipline : Chimie Spécialité : Sciences Pharmaceutiques Pr. Sudaxshina MURDAN Rapporteur externe Pr. Patrick SAULNIER Rapporteur externe Pr. Eric MARCHIONI Rapporteur interne Pr. Thierry VANDAMME Directeur de thèse

• base d'excipients lipidiques


• entière reconnaissance


• docteur de l'universite de strasbourg


• dosage de la ldh


• amélioration de la biodisponibilité par voie orale


• travaux de chimie analytique


• caractérisation des systèmes lipidiques


• professeur eric

Sujets

• Van Damme
• Schmitt
• Laurent
• Saulnier

Informations

• Publié par: profil-zyak-2012
• Nombre de lectures: 142
• Langue: Français
• Poids de l'ouvrage: 4 Mo

Extrait

THESE
Présenté pour l’obtention du grade de
DOCTEUR DE L’UNIVERSITE DE STRASBOURG
ECOLE DOCTORALE SCIENCES CHIMIQUES
par
Pierre SAE HOUER
CONCEPTION ET CARACTERISATION BIOLOGIQUE
DE SYSTEMES LIPIDIQUES DESTINES A UNE
ADMINISTRATION PAR VOIE ORALE
Discipline : Chimie
Spécialité : Sciences Pharmaceutiques

Pr. Sudaxshina MURDAN Rapporteur externe
Pr. Patrick SAULNIER Rapporteur externe
Pr. Eric MARCHIONI Rapporteur interne
Pr. Thierry VANDAMME Directeur de thèse
1

2 Remerciements
Dans un premier temps, je tiens à remercier sincèrement le Professeur Thierry Vandamme pour
m’avoir accueilli au sein de son laboratoire et donné l’opportunité de réaliser ma thèse dans des
conditions idéales de travail. Vous m’avez accordé une grande liberté dans cette aventure tout en me
faisant confiance sur les nombreux choix que j’ai eu à faire. Cela m’a appris l’autonomie, le sens de
l’organisation et de la responsabilité. J’ai beaucoup apprécié votre disponibilité et votre bonne
humeur.
Mes remerciements vont aussi au Professeur Eric Marchioni qui m’avait vivement encouragé à me
lancer dans cette « nouvelle expérience », il y a trois ans. Nos conversations m’ont toujours
beaucoup appris et inspiré aussi bien du point de vue professionnel que personnel. Je tiens à vous
exprimer toute ma reconnaissance et mon respect.
J’exprime toute ma reconnaissance au Professeur Patrick Saulnier et au Professeur Sudaxshina
Murdan de me faire l’honneur de juger ce travail.

Un grand merci à tous les membres du Laboratoire de Conception et Application de Molécules
Bioactives que j’ai pu rencontrer pendant ces trois années. Merci à Béatrice Heurtault pour m’avoir
initié et formé à l’utilisation du Nanosizer et du kit de détection des mycoplasmes. Merci à Gaëlle
Creusat pour m’avoir montré comment réaliser un test MTT. Merci à Guy et Nicolas pour leur aide.
Merci aussi à Benoit, Jérôme, Régis, Rkya pour nos conversations amicales.
Je tiens à exprimer mon entière reconnaissance au Docteur Francis Raul et à Francine Gossé de
l’Institut de Recherche Contre les Cancers de l'Appareil Digestif (IRCAD). Vous avez grandement
contribué à la mise en place de notre salle de culture cellulaire. C’est aussi grâce à vous que j’ai
appris les bases ainsi que de nombreuses subtilités de la culture de cellules.
Au Professeur Jean-Marc Lessinger, à Elisabeth Laurent et à Lyse Fontaine, je tiens à vous exprimer
mes plus sincères remerciements pour les travaux que vous avez réalisés quant au dosage de la LDH.
Au sein de votre laboratoire au Centre de Chirurgie Orthopédique et de la Main de Strasbourg,
d’innombrables dosages ont réalisés pendant les trois dernières années. Je vous remercie aussi pour
les bons moments passés autour d’un café accompagné de bons chocolats (ou de saucissons pour
Jean-Marc).
3
Enfin, je remercie encore le Professeur Eric Marchioni et Minjie Zhao pour leur précieuse aide dans la
mise au point et la validation des méthodes de dosage chromatographique que nous avions à
réaliser.

A mes voisins et voisines d’étage et leurs amis… je tiens aussi à vous remercier : Esther, Joseph, Julie
Legrandois, Guillaume, Martine, Françoise, Diane Julien-David, Amadine Cambrai. Vous avez été
d’une aide formidable pour mes travaux de chimie analytique. Mais surtout je me rappellerai
toujours des soirées, anniversaires et vacances de skis passés ensemble.
Un petit mot à mes camarades de la promo 2006. Un grand merci pour les personnes que je revois
encore régulièrement : Thomas, Yves, Joanne, Luc, Philippe, Florent, Leatitia, Christelle, Mélanie,
Charlotte, Stéphane…
Je n’oublierai pas non plus tous les stagiaires qui sont passés au laboratoire. Qu’ils aient travaillé ou
non sur mon projet de thèse, votre compagnie a été une expérience irremplaçable. Je tiens
particulièrement à remercier Mathieu Schmitt et Emilie Kling qui m’ont apporté une aide précieuse
lors de leur présence. Mais je n’oublie pas non plus Marie, Guillaume, Nicolas, Julien, Christel,
AnneMarie, Virginia et tous les autres.

Enfin, je tiens à remercier toute ma famille ! Toujours présente pour me soutenir et m’aider…
4 Table des matières
Table des matières .................................................................................................................................. 5
Liste des abréviations .............................. 8
Liste des figures ....... 9
Liste des tableaux .................................................................................................................................. 12
INTRODUCTION GENERALE ................................................................................................................... 13
PARTIE BIBLIOGRAPHIQUE .................... 17
Chapitre 1: Formulations orales à base d’excipients lipidiques ....................... 19
1.1 Les principes actifs ................................................................................................................. 19
1.2 Excipients pharmaceutiques ................................................................................................. 21
1.2.1 Les solvants organiques miscibles à l’eau ou « co-solvants » ....... 21
1.2.2 Les excipients huileux .... 22
1.2.3 Les surfactants non-ioniques ......................................................................................... 23
1.2.4 Les cyclodextrines .......................................................................................................... 26
1.3 Systèmes lipidiques ............... 26
1.3.1 Le système de classification des systèmes lipidiques.................................................... 26
1.3.2 Systèmes auto-émulsifiants .......................................................... 28
1.3.3 Formes micellaires ......................................................................................................... 29
1.4 Mécanismes amenant à une amélioration de la biodisponibilité par voie orale .................. 30
1.4.1 Augmentation de la solubilité des principes actifs ........................................................ 30
1.4.2 Impacts sur les phénomènes de résistance médicamenteuse ...................................... 31
1.4.2.1 Les protéines d’efflux ................................................................ 31
1.4.2.2 Les enzymes de métabolisation intestinale .............................. 33
1.4.2.3 Activité modulatrice des excipients sur les phénomènes de résistance ................... 34
Chapitre 2: Caractérisation des systèmes lipidiques et leur stratégie de formulation .................... 38
2.1 Propriétés Physicochimiques ................................................................................................ 38
2.1.1 Granulométrie ............................................................................................................... 38
2.1.2 Milieux de dissolution ... 39
2.2 Propriétés biologiques ........... 40
2.2.1 Etude de la perméabilité et du métabolisme ................................................................ 40
2.2.1.1 Perméabilité intestinale ............................................................ 40
2.2.1.1.1 Physiologie de l’appareil digestif ......................................................................... 40
2.2.1.1.2 Modèles in vitro d’absorption intestinale ........................... 45
5
2.2.1.1.3 La lignée cellulaire Caco-2 ................................................................................... 46
2.2.1.2 Modèles in vitro de métabolisme intestinal .............................. 51
2.2.2 Tests de cytotoxicité ...................................................................................................... 51
2.2.2.1 Mises en solution des excipients lipophiles 52
2.2.2.2 Tests in vitro sur culture cellulaire ............ 53
2.2.2.2.1 Observations microscopiques ............................................................................. 53
2.2.2.2.2 Mesure du TEER .................................. 54
2.2.2.2.3 Marqueurs de perméabilité paracellulaire ......................................................... 54
2.2.2.2.4 Activité métabolique cellulaire ........................................... 56
2.2.2.2.4.1 Les sels de tétrazolium ................................................. 56
2.2.2.2.4.2 Resazurin ...................................... 57
2.2.2.2.5 Marqueurs d’intégrité membranaire .................................................................. 58
2.2.2.2.5.1 LDH ............................................... 58
2.2.2.2.5.2 Autres marqueurs...................