Polymorphismus der chicken Ig-like receptors (CHIRs) [Elektronische Ressource] / von Claudia Martina Gick

Claudia Gick

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• Publié par: ludwig-maximilians-universitat_munchen
• Publié le: 01 janvier 2008
• Nombre de lectures: 21
• Langue: Deutsch
• Poids de l'ouvrage: 18 Mo

Extrait

Aus dem
Institut für Physiologie, Physiologische Chemie und Tierernährung
der Tierärztlichen Fakultät München
der Ludwig-Maximilians-Universität München

Vorstand: Univ.-Prof. Dr. M. Stangassinger


Arbeit angefertigt unter der Leitung von
Univ.-Prof. Dr. T.Göbel

Titel der Arbeit
„Polymorphismus der Chicken Ig-like Receptors (CHIRs)“



Inaugural-Dissertation
zur Erlangung der tiermedizinischen Doktorwürde
der Tierärztlichen Fakultät der
Ludwig-Maximilians-Universität München


von
Claudia Martina Gick
aus München
München 2008





Gedruckt mit Genehmigung der Tierärztlichen Fakultät
der Ludwig-Maximilians-Universität München






Dekan: Univ.-Prof. Dr. Braun
Berichterstatter: Univ.-Prof. Dr. Göbel
Korreferent/en: Univ.-Prof. Dr. Förster





















Tag der Promotion: 6. Februar 2009

Charakter:
neben dem Geist wohl der einzige Luxus, den man bis heute nicht kaufen kann.

Peter Rudl, deutscher Aphoristiker Die in dieser Arbeit identifizierten 180 verschiedenen Nukleotidsequenzen wurden in
der „EMBL Nucleotide Sequence Database“ unter den Zutrittsnummern (accession
numbers) „FM200227“ bis „FM200406“ veröffentlicht.

INHALTSVERZEICHNIS I
1. Einleitung.................................................................................................................................... 1
2. Literaturübersicht........................................................................................................................ 2
2.1. Definitionen .............................................................................................................................. 2
2.1.1. Domäne.................................................................................................................................. 2
2.1.2. Immunglobulindomäne........................................................................................................... 2
2.1.3. Immunglobulin-Superfamilie (Ig-SF) ...................................................................................... 3
2.2. Leukozyten-Rezeptor-Complex (LRC)..................................................................................... 3
2.2.1. Nomenklaturuneinigkeit: Leukozyten-Rezeptor-Complex
oder Leukozyten-Rezeptor-Cluster ........................................................................................ 3
2.2.2. Allgemeines............................................................................................................................ 4
2.2.3. Rezeptortypen des LRC......................................................................................................... 4
2.2.4. Aufbau des LRC..................................................................................................................... 5
2.2.5. Exon-Intron-Struktur............................................................................................................... 7
2.2.6. Mitglieder des LRC................................................................................................................. 8
3. Zielsetzung der Arbeit............................................................................................................... 16
4. Material und Methoden............................................................................................................. 17
4.1. Tiere und Tierhaltung ............................................................................................................. 17
4.2. Präparation von peripheren mononukleären Zellen (PBMC) aus dem Blut......................... 17
4.2.1. Material................................................................................................................................. 17
4.2.2. Durchführung ....................................................................................................................... 18
4.3. RNA-Präparation .................................................................................................................... 18
4.3.1. Material................................................................................................................................. 18
4.3.2. Durchführung ....................................................................................................................... 19
4.4. cDNA-Synthese...................................................................................................................... 20
4.5. Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) ...................................................................................... 20
4.5.1. Herculase-PCR .................................................................................................................... 21
4.5.2. Hot-FIRE-Polymerase (HFP)-PCR ...................................................................................... 22
4.6. Agarosegelelektrophorese ..................................................................................................... 24
4.6.1. Material................................................................................................................................. 24
4.6.2. Durchführung ....................................................................................................................... 25
4.7. Gelaufreinigung ...................................................................................................................... 26
4.7.1. Material................................................................................................................................. 26
4.7.2. Durchführung ....................................................................................................................... 26
4.8. Restriktionsenzymverdau....................................................................................................... 27
4.8.1. Material................................................................................................................................. 27
4.8.2. Durchführung ....................................................................................................................... 27
4.9. SAP-Verdau ........................................................................................................................... 28
4.9.1. Material................................................................................................................................. 28
4.9.2. Durchführung ....................................................................................................................... 28
4.10. TA-Klonierung ........................................................................................................................ 28 INHALTSVERZEICHNIS II
4.10.1. Material................................................................................................................................. 29
4.10.2. Durchführung ....................................................................................................................... 29
4.11. Ligation................................................................................................................................... 30
4.11.1. Material................................................................................................................................. 31
4.11.2. Durchführung ....................................................................................................................... 31
4.12. Transformation von chemokompetenten TOP10 E. coli ........................................................ 31
4.12.1. Material................................................................................................................................. 31
4.12.2. Durchführung ....................................................................................................................... 31
4.13. Plasmidaufreinigung............................................................................................................... 32
4.13.1. Mini-Prep.............................................................................................................................. 32
4.13.2. MidiPrep ............................................................................................................................... 33
4.14. Anlegen von Bakterienstocks................................................................................................. 34
4.14.1. Material................................................................................................................................. 34
4.14.2. Durchführung ....................................................................................................................... 34
4.15. DNA-Sequenzierung .............................................................................................................. 34
4.16. Transfektion von eukaryotischen Zellen................................................................................. 35
4.