Purification and characterization of heterologously produced cannabinoid receptor 1 and G proteins [Elektronische Ressource] / von Chandramouli Chillakuri

Vamsi

Sujets

• Biologie

Informations

• Publié par: goethe_universitat_frankfurt_am_main
• Publié le: 01 janvier 2007
• Nombre de lectures: 30
• Langue: English
• Poids de l'ouvrage: 3 Mo

Extrait

Purification and Characterization of Heterologously

Produced Cannabinoid Receptor 1 and G proteins





Dissertation


Zur Erlangung des Doktorgrades
der Naturwissenschaften


Vorlegt beim Fachbereich 14
Biochemie, Chemie und Pharmazie
der Johan Wolfgang Goethe Universität
in Frankfurt am Main


von

Chandramouli Chillakuri
aus Tirupati (Indien)

Frankfurt am Main



























Dekan: Prof. Harald Schwalbe
1. Gutachter: Prof. Dieter Steinhilber
2. Gutachter: Prof. Hartmut Michel

Datum der Disputation:











To my mother..
























Diese Doktorarbeit wurde vom 12. September 2002 bis zum 30. April 2007 unter
Leitung von Prof. Dr. Hartmut Michel und Dr. Christoph Reinhart in der Abteilung
für Molekulare Membranbiologie am Max-Planck Institute für Biophysik in Frankfurt
am Main durchgeführt.












Eidesstattliche Erklärung


Hiermit versichere ich, dass ich die vorliegende Arbeit selbständig angefertigt habe
und keine weiteren Hilfsmitten und Quellen als die hier aufgeführten verwendet habe.










Chandramouli Chillakuri

Frankfurt am Main,
















Abbreviations:

2D Two dimensional
3D Three dime
AC Adenylyl Cyclase
AM251 N-(Piperidin-1-yl)-5-(4-iodophenyl)-1-(2,4-dichlorophenyl)-4-
methyl-1H-pyrazole-3-carboxamide
AM630 [(6-Iodo-2-methyl-1-[2-(4-morpholinyl)ethyl]-1H-indol-3-yl)(4-
methoxyphenyl)methanone]
AP Alkaline phosphatase
APS Ammonium persulphate
βMe β-Mercaptoethanol
BCA Bicinchoninic acid
BCIP 5-Bromo-4-chloro-3-indolylphosphate, 4-toluidine salt
bp Base pairs
BSA Bovine serum albumin
C E Dodecyloctaethylene glycol ether 12 8
cAMP 3’,5’-cyclic-adenosine monophosphate
CB1 Cannabinoid receptor type 1
CB2 receptor type 2
cDNA complementary deoxyribonucleic acid
CFP Cyan fluorescent protein
CHAPS 3-[N-(3-Cholamidopropyl)-dimethyl-ammonio]-1-propansulfonate
CHS Cholesterol hemisuccinate
CMC Critical Micelle Concentration
CNS Central nervous system
cpm counts per minute
Cymal 6 5-Cyclohexyl-1-pentyl- β-D-maltoside
Da Dalton
DM n-Dodecyl- β-D-maltoside
DMF Dimethyl formamide
DMSO mesulphoxide
DNA Deoxyribonucleic acid dpm disintegrations per minute
DTT 1,4 Dithiothreitol
EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid
ER Endoplasmic reticulum
FCS Foetal calf serum
Fos12 n-dodecylphoscholine
GDP Guanosine 5’-diphosphate
G α α subunit of heterotrimeric G-protein
G β β
G γ γeric G-protein
GTP Guanosine triphosphate
GTP γS 5’-O-(3-thiotriphosphate)
GppNp 5’-Guanylylimidodi-phosphate
g Centrifugal force
GPCR G protein coupled receptor
G protein Guanine nucleotide binding protein
hr hour(s)
Hepes N-(2-Hydroxyethyl)-Piperazine-N’-(2-ethylsulphonic acid)
HU210 (6aR)-trans-3-(1,1-Dimethylheptyl)-6a,7,10,10a-tetrahydro-1-
hydroxy-6,6-dimethyl-6H-dibenzo[b,d]pyran-9-methanol
IMAC Immobilized metal affinity chromatography
Kb Kilo basepairs
K Dissociation constant D
KDa Daltons
Kan Kanamycin
LB Luria-Bertani medium
LDAO N,N-dimethyldodecylamine-N-oxide
LM n-Dodecyl- β-D-maltoside
min minute(s)
MOI Multiplicity of infection
NA not applicable
NTA Nitrilo triacetic acid
OD Optical density
PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis PBS Phosphate buffered saline
PCR Polymerase chain reaction
PEG Polyethylene glycol
PEI Polyethylenimine
PMSF Phenylmethylsulphonyl fluoride
PVDF Polyvinylidene fluoride
rpm Revolutions per minute
RT Room temperature
SDS Sodium dodecyl sulphate
TEMED N,N’,N’,N’-Tetramethylethylenediamine
Tris Tris-(hydroxymethyl)-aminomethane
UC Ultracentrifuge
v/v Volume per volume
w/v Weight volume
WIN 55,212-2 (R)-(+)-[2,3-dihydro-5-methyl-3-(4-
morpholinylmethly)pyrrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazin-6-yl]-1-
naphthalenylmethanone mesylate
X-gal 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl- β-D-galactopyranoside
YFP Yellow fluorescent protein
YNB Yeast Nitrogen Base