Efecto de la quercetina y la rutina frente al daño oxidativo inducido en eritrocitos con distintos contenidos de colesterol

Gallego Sánchez, Ignacio José

Description

Colecciones : DBBM. Tesis del Departamento de Bioquímica y Biología MolecularTD. Ciencias biosanitarias
Fecha de publicación : 2009
[ES]Esta tesis trata de analizar la influencia que ejerce la modificación de los contenidos de colesterol en la membrana sobre la protección otorgada por la quercetina y la rutina frente a las alteraciones estructurales y funcionales que sufre el eritrocito sometido a estrés oxidativo[EN]This thesis attempts to analyze the influence of the modification of content of cholesterol in the membrane on the protection afforded by quercetin and rutin against structural and functional changes experienced by the erythrocytes subjected to oxidative stress

Sujets

• Sciences et techniques

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Extrait

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
Y BIOLOGÍA MOLECULAR



TESIS DOCTORAL







Efecto de la quercetina y la rutina frente al
daño oxidativo inducido en eritrocitos con
distintos contenidos de colesterol.





JOSÉ IGNACIO SÁNCHEZ GALLEGO

Salamanca, 2009

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR

Campus Miguel de Unamuno - Edificio Departamental
Pza. Doctores de la Reina s/n 37007 Salamanca. Spain.
Tel.[phone] Fax:[phone]








MARCIAL LLANILLO ORTEGA, Profesor Titular de Universidad del
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular de la Universidad de
Salamanca,


HAGO CONSTAR,


Que la presente Memoria de Tesis Doctoral titulada “Efecto de la
quercetina y la rutina frente al daño oxidativo inducido en eritrocitos con
distintos contenidos de colesterol”, de la que es autor D. José Ignacio SÁNCHEZ
GALLEGO y que presenta para optar al Grado de Doctor en Biología, ha sido
realizada bajo mi dirección en el Departamento de Bioquímica y Biología
Molecular de la Universidad de Salamanca. Considero que dicha Tesis Doctoral
se halla concluida, y por tanto, autorizo su presentación para que sea juzgada
por el Tribunal correspondiente.

Y para que así conste, firmo el presente documento en Salamanca a
diecisiete de febrero de dos mil nueve.

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR

Campus Miguel de Unamuno - Edificio Departamental
Pza. Doctores de la Reina s/n 37007 Salamanca. Spain.
Tel.[phone] Fax:[phone]











JOSÉ IGNACIO SÁNCHEZ GALLEGO, licenciado en Biología y Bioquímica por la
Universidad de Salamanca,


HAGO CONSTAR,


Que soy autor de la Tesis Doctoral titulada “Efecto de la quercetina y la
rutina frente al daño oxidativo inducido en eritrocitos con distintos contenidos
de colesterol”, realizada en el Departamento de Bioquímica y Biología Molecular
de la Universidad de Salamanca bajo la dirección del Profesor Dr. Marcial
Llanillo.

Y para que así conste, firmo el presente documento en Salamanca a
diecisiete de febrero de dos mil nueve.

NOTA PRELIMINAR

Este trabajo de investigación ha sido financiado con cargo a los
proyectos subvencionados por el Ministerio de Ciencia y Tecnología (Plan
I+D+i, “Efecto de la peroxidación sobre la estructura-función de los eritrocitos
enriquecidos en colesterol” Ref. BMC2000-1132), la Universidad de Salamanca
(“Protecciones aportadas por quercetina y rutina frente al daño oxidativo
inducido por radicales libres de oxígeno en eritrocitos modificados en sus
contenidos de colesterol” Ref. USAL2005B1-13) y la Junta de Castilla y León
(Ref. SA058A07).

El autor de la Memoria ha disfrutado de una Beca de Investigación de la
Junta de Castilla y León (Junio 2003-Junio 2007).

Los resultados recogidos en esta Memoria han sido en parte publicados
en un artículo y presentados en los siguientes Congresos:

Artículo:

López-Revuelta, A., Sánchez-Gallego, J.I., Hernández-Hernández, A., Sánchez-
Yagüe, J. y Llanillo, M.
Membrane cholesterol contents influence the protective effects of quercetin and
rutin in erythrocytes damaged by oxidative stress
Chemico-Biological Interactions 161(2006)79-91


Congresos:

1. II Congreso Nacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos, Orihuela
(Alicante, España), 3-6 de Junio de 2003. “Actividad biológica de la quercetina y
la rutina frente al daño oxidativo en eritrocitos enriquecidos en colesterol”.
Volumen 1, pág 109-112.

2. XXVII Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular,
Lleida (España), 12-15 de Septiembre de 2004. “Relación entre el contenido en
colesterol de los eritrocitos y su susceptibilidad al daño oxidativo inducido por
hidroperóxido de ter-butilo. Protección por antioxidantes”. Resumen P12-3, pág
216.

3. XXX Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular,
Málaga (España), 12-15 de Septiembre de 2007. “Influencia del colesterol en la
disposición asimétrica de los aminofosfolípidos de membrana en eritrocitos
oxidados con hidroperóxido de ter-butilo. Efectos protectores de quercetina y
rutina. Resumen T06-16, pág 152.

Abreviaturas

Abreviaturas

APLT: Aminofosfolípido translocasa.
Anexina V-FITC: Proteína anticoagulante anexina V conjugada con el
compuesto fluorescente isotiocianato de fluoresceina.
BCD: β-ciclodextrina.
BHA: 3-t-butil-4-hidroxianisolona.
BHT: Hidroxitoluenobutilado.
BSA: Seroalbúmina bovina.
BSF: Suero bovino fetal.
Ch: Colesterol.
COMT: Catecol-O-metiltransferasa
CPD-A : Anticoagulante citrato/fosfato/glucosa/adenina. 1
DCF: 2´,7´-diclorofluoresceina.
DCFDA: Diacetato de diclorodihidrofluoresceina.
DCFH : 2´,7´-diclorodihidrofluoresceina. 2
D.E.: Desviación estándar de la media.
DHEAS: Dehidroandrosterona 3-sulfato.
DMSO: Dimetilsulfósido.
DPG: Difosfatidilglicerol ó Cardiolipina.
DPH: 1,6-difenil-1,3,5-hexatrieno.
DTNB: 5-5´-dithiobis(2-ácido nitrobenzoico).
FAME: Ésteres metílicos de ácidos grasos.
FID: Detector de ionización de llama.
FITC: Isotiocianato de fluoresceina.
F-OH: Flavonoide
FSC: Forward scatter (dispersión frontal de luz)
GC: Cromatografía en fase gaseosa.
GC-MS: Cromatografía en fase gaseosa acoplada a espectrometría de masas.
GSH: Glutation reducido.
GSSG: Glutation oxidado.
Hb: Hemoglobina.
HBS : Disolución amortiguadora de HEPES 10 mM, KCl 150 mM, pH 7,4. 1
HBS : Disolución amortiguadora de HEPES 10 mM, NaCl 145 mM, pH 7,4. 2
HEPES: Ácido N-[2-hidroxietil]piperacina-N’-[2-etanosulfónico].
HOO•: Radical perhidroxilo.
IAA: Ácido indolacético.
LDL: Lipoproteínas de baja densidad
MBCD: Metil-β-ciclodextrina.
MDA: Malonildialdehído.

Abreviaturas

MetHb: Metahemoglobina.
MS: Espectrometría de masas.
NBD-PS: 1-Palmitoil-2-[6-[(7-nitro-2-1,3-benzoxadiazol-4-il)amino]hexanoil]-
sn-glycero-3-phosphoserine
NEM: N-etilmaleimida.
•O : Radical superóxido. 2
•OH : Radical hidroxilo.
P: Polarización de fluorescencia.
PA: Ácido fosfatídico.
PBS: Disolución amortiguadora de fosfato sódico 5 mM, NaCl 150 mM, pH 7,5.
PC: Fosfatidilcolina.
PDE: Fosfodiesterasa
PE: Fosfatidiletanolamina.
Pi: Fósforo inorgánico (procedente de lípidos).
PI: Fosfatidilinositol.
PL: Fosfolípido.
PMSF: Fluoruro de fenilmetilsulfonilo.
PRP: Plasma rico en plaquetas.
PS: Fosfatidilserina.
PUFA: Ácidos grasos poliinsaturados.
p/v: Peso/volumen.
PVP: Polivinilpirrolidona.
Q: Quercetina
Rf: Coeficiente de reparto.
•R : Radical libre
RNS: Especies reactivas de nitrógeno
•RO : Radical alcoxilo
•ROO : Radical peroxilo.
ROOH: Hidroperóxido lipídico.
ROS: Especies reactivas de oxígeno.
r : Anisotropía de fluorescencia. s
Ru: Rutina
SBF: Suero bovino fetal
SDS: Lauril sulfato sódico.
SM: Esfingomielina.
SOD: Superóxido dismutasa.
SSC: Side scatter (dispersión lateral de luz).
TBA: Ácido tíobarbitúrico.

Abreviaturas

TBARS: Sustancias reaccionantes con el ácido tiobarbitúrico.
tBHP: Hidroperóxido de ter-butilo.
•t-BuO : Radical butoxilo.
TCA: Ácido tricloroacético.
TEAC: Actividad antioxidante equivalente en Trolox
THF: Tetrahidrofurano.
TLC: Cromatografía en capa fina.
TMA-DPH: 1-[4-(trimetilamonio)-fenil]-6-fenil-1,3,5-hexatrieno.
TRIS: tris[hidroximetil]aminometano.
UFR: Unidades de fluorescencia relativa
UV: Ultravioleta
v/v:Volumen/volumen.