The role of EBI-3 in a murine model of lung metastases of melanoma [Elektronische Ressource] / Kerstin Annika Sauer

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• Publié le: 01 janvier 2007
• Nombre de lectures: 42
• Langue: Deutsch
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Extrait

The role of EBI-3 in a murine model of lung
metastases of melanoma






Dissertation

zur Erlangung des Grades
„Doktor der Naturwissenschaften“

am Fachbereich Biologie
der Johannes Gutenberg-Universität Mainz





Kerstin Annika Sauer
geb. am 03.10.1977 in Schwetzingen


Mainz, im September 2007

Aus der I. Medizinischen Klinik und Poliklinik des Universitätsklinikums der
Johannes Gutenberg-Universität Mainz

























Dekan:
1. Gutachter:
2. Gutachter:

Tag der mündlichen Prüfung: 07.12.2007







Ich erkläre, dass ich die vorgelegte Thesis selbständig, ohne unerlaubte fremde Hilfe
und nur mit den Hilfen angefertigt habe, die ich in der Thesis angegeben habe. Alle
Textstellen, die wörtlich oder sinngemäß aus veröffentlichten oder nicht veröffentlichten
Schriften entnommen sind, und alle Angaben, die auf mündlichen Auskünften beruhen,
sind als solche kenntlich gemacht. Bei den von mir durchgeführten Untersuchungen
habe ich die Grundsätze guter wissenschaftlicher Praxis, wie sie in der Satzung der
Johannes Gutenberg - Universität Mainz zur Sicherung guter wissenschaftlicher Praxis
niedergelegt sind, eingehalten.



Ort, Datum Kerstin Sauer
Diese Arbeit wurde in der Arbeitsgruppe für zelluläre und molekulare Immunologie der
Lunge an der I. Medizinischen Klinik der Johannes-Gutenberg Universität in der Zeit
von 01.10.2004 bis August 2007 angefertigt.


Teilergebnisse der Arbeit sind zur Veröffentlichung in Vorbereitung:
Sauer, K.A., Scholtes, P., Maxeiner, J.H., Karwot, R., Lehr, H.A., Birkenbach, M.,
Blumberg, R., Finotto, S. Immunosurveillance of lung melanoma metastasis in EBI-
+3 deficient mice by IK-DC-induced CD8 T cells.


Weitere Publikationen:
Maxeiner, J.H., Karwot, R., Hausding, M., Sauer, K.A., Scholtes, P., Finotto, S. A
method to enable the investigation of murine bronchial immune cells, their
cytokines and mediators. Nature Protocols 2007; 2(1):105-12.

Sauer, K.A., Scholtes, P., Karwot, R., Finotto, S. Isolation of CD4+ T cells from
murine lungs: a method to analyze ongoing immune responses in the lung. Nature
Protocols 2006;1(6):2870-5.

Doganci, A., Sauer, K., Karwot, R., and Finotto, S. Pathological Role of IL-6 in the
Experimental Allergic Bronchial Asthma in Mice. Clinical Reviews in Allergy and
Immunology 2005. 28: 257-69.

Kongressbeiträge:
Sauer, K.A., Maxeiner, J.H., Scholtes, P., Karwot, R., Finotto, S. EBI 3 deficient
dendritic cells induce a CD8 mediated tumor cell death in a murine model of lung
melanoma. 4th annual symposium of the Association for Immunotherapy of Cancer as
th thjoint meeting with "Strategies for Immune Therapy" in Mainz on May 4 and 5 2006

Sauer, K.A., Maxeiner, J.H., Scholtes, P., Karwot, R., Finotto, S. EBI-3 deficiency
protects from lung melanoma by upregulating IL-12 production in the airways in a
th th murine model. ATS 2006 in San Diego, May 19 -24 2006

Sauer, K.A., Maxeiner, J.H., Scholtes, P., Karwot, R., Finotto, S. EBI-3 deficiency inducing infiltration of dendritic cells in the
tumor where they induce CD8 mediated tumor cell death. ECI 2006, 16th European
th thCongress of Immunology in Paris, September 6 – 9 2006

Sauer, K.A., Scholtes, P., Maxeiner, J.H., Karwot, R., Lehr, H.A., Galle, P.R.,
Birkenbach, M., Finotto, S. Immunosurveillance of lung melanoma metastasis in
+ thEBI-3 (-/-) mice by IKDCs- induced CD8 T cells. Immunology 2007, 9 Annual
th ndMeeting of the American Association of Immunologists in Miami Beach, May 18 -22
2007











Der Mensch hat 3 Wege, um zu lernen
Durch Nachdenken
- das ist der Edelste
Durch Nachahmung
- das ist der Leichteste
Durch Erfahrung
- das ist der Bitterste
(Konfuzius)


1 Introduction...............................................................................................................4
1.1 Immune System ................................................................................................4
1.2 The Lung ...........................................................................................................5
1.2.1 Anatomy of the Lung ..................................................................................5
1.2.2 Function of 6
1.3 Cancer...............................................................................................................7
1.3.1 Tumor and Metastasis................................................................................7
1.3.2 Malignant Melanoma10
1.3.3 Tumor Immunology ..................................................................................12
1.3.4 Therapeutic Approaches ..........................................................................18
1.3.5 Mouse model of metastatic Melanoma.....................................................21
1.4 Interleukin-27 and its signaling........................................................................22
1.4.1 The heterodimeric cytokine IL-12.............................................................22
1.4.2 Interleukin-23 ...........................................................................................24
1.4.3 -2725
1.4.4 The paradoxical pro- and anti-inflammatory properties of IL-27...............28
2 Definition of the Project ..........................................................................................30
3 Materials and Methods31
3.1 Materials..........................................................................................................31
3.1.1 Chemicals and Reagents .........................................................................31
3.1.2 Equipment................................................................................................33
3.1.3 Applied equipment ...................................................................................35
3.1.4 Antibodies36
3.1.5 Beads.......................................................................................................38
3.1.6 Commercial Kits.......................................................................................38
3.1.7 Buffers and solutions................................................................................38
3.2 Methods ..........................................................................................................43
3.2.1 Mice .........................................................................................................43
3.2.2 DNA isolation and PCR............................................................................44
3.2.3 Design of standard experiments...............................................................46
3.2.4 Design of cell transfer experiments..........................................................47
3.2.5 Bronchoalveolar Lavage Fluid (BALF) .....................................................48
3.2.6 Surgical removal of organs ......................................................................48
3.2.7 Quantification of tumor mass....................................................................49
1 3.2.8 Lung histology..........................................................................................49
3.2.9 Cell isolation from spleens and lungs.......................................................50
+ + +3.2.10 CD4 /CD8 /CD11c cell purification from spleens and lungs ...................51
3.2.11 Cell culture ...............................................................................................52
3.2.12 FACS staining and analysis .....................................................................54
3.2.13 ELISA.......................................................................................................57
3.2.14 Protein isolation and Western Blot analysis .............................................58
3.2.15 Statistical evaluation ................................................................................60
4 Experiments and Results........................................................................................61
4.1 Development of B16-F10 induced lung melanoma in EBI-3 deficient and
C57B/6 wild-type mice ...............................................................................................61
4.1.1 Development of B16-F10 induced lung metastasis of melanoma ............61
4.1.2 Survival of mice with B16-F10 induced lung melanoma...........................65
4.2 Analysis of EBI-3 deficient tumor vascularization............................................66
4.2.1 VEGF expression in the lungs of B16-F10 injected mice .........................66
4.2.2 Expression of VEGF Receptor in the lungs of B16-F10 injected mice .....69
4.3 Dendritic Cells in the murine model of B16-F10
induced lung melanoma.......................................................